泌尿生殖癌TLP复合体肽及其抗体制造技术

本文描述了含有特异泌尿生殖癌ＴＬＰ表位的肽，其中ＴＬＰ包含氨基酸序列：Ｇｌｙ Ｐｒｏ Ｐｒｏ Ｇｌｕ Ｖａｌ Ｇｌｎ Ａｓｎ Ａｌａ Ａｓｎ。另外也描述了检测所述泌尿生殖Ｔ ＬＰｓ的试剂及药物组合物。（*该技术在2017年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及从泌尿生殖器癌中分离出来的TLP复合体(肿瘤释放蛋白)的肽。具体地讲，本专利技术涉及来自人泌尿生殖器的具有抗原活性的TLP蛋白复合体的肽，以及能与所述肽反应的抗体，所述抗体可用于诊断及临床。TLP复合体是存在于人肿瘤细胞中的蛋白复合体。有人描述了一种214KDa的TLP蛋白(Tarro G．，Oncology 40，248-253，1983)。可用欧洲专利283443中所描述的方法来从肿瘤组织中分离TLP。意大利专利申请RM92A000506从肺癌中识别了一种TLP蛋白。本专利技术的专利技术人惊奇地发现来自泌尿生殖器癌的TLP含有新肽，这些新肽含有不同于已知TLP肽的序列。因此，需要从泌尿生殖癌中鉴别出起表位作用的TLP肽，以制备作为抗体的特异试剂。本专利技术的专利技术人已识别出具有一定序列的肽，所述序列包含于来自子宫颈或睾丸腺癌、以及肾瘤的214KDa的TLP蛋白的序列中。因此本专利技术的一个目的是提供含有特异性泌尿生殖癌TLP表位的肽，其中所述的TLP的特征是含有SEQ ID No．1的氨基酸序列Gly Pro Pro Glu Val Gln Asn Ala Asn按照优选实施方案，其中的肽含有SEQ ID No．1的氨基酸序列。本专利技术的再一目的是提供能从泌尿生殖癌中识别TLP的特异性试剂，所述试剂优选含有TLP抗体。更优选地，所述抗体可识别具有SEQID No．1序列的肽片断。本专利技术的又一目的是提供诊断试剂盒，所述试剂盒含有本专利技术抗体作为特异性试剂，以从样品中识别TLP。本专利技术的另一目的是提供含有本专利技术肽作为活性剂的药物组合物。现在用说明性并非限制性的实例对本专利技术进行描述。实施例1 肿瘤浸出液的制备将来自一患有子宫癌的45岁妇女的12．55g的肿瘤在室温下解冻，并且用外科方法除去坏死组织。当将所得到的物质匀化后，用Tris 1×(10mM Tris-HCl，pH7．2)进行多次洗涤，并且将该组织进行三轮冷冻-解冻循环。收集使用过的Tris洗涤液并在33，000rpm下离心1小时。收集上清液并进行冷冻。将组织用声波处理三次达3分钟，随后在33，000rpm下超离心120分钟。收集上清液(5．7ml)，在Agrodisc过滤器(0．45μm)上过滤，并将过滤后得的组织悬浮在Tris溶液中，比例为1g／ml Tris，并将其在33，000rpm下超离心60分钟。过滤上清液(0．5ml)并将其加入上一次的上清液中。对睾丸癌(总产量1．9ml)及肾瘤样品进行同样的处理。实施例2 对来自泌尿生殖器癌的TLP蛋白中包含的肽的识别如欧洲专利283443中所述，将TLP复合物从泌尿生殖器癌浸出液中分离出来。所使用的样品是1)子宫颈腺癌；2)睾丸癌；3)肾瘤。所得到的蛋白含量如下表1样品 总mg数 mg／ml TLP子宫颈腺癌 59．59．6睾丸癌 7．43．9肾瘤7．4* 1．5*总肾蛋白浓度不允许足够的TLP纯化产量。用变性电泳分析方法(SDS)，通过分子量测定(214KDa)来进行TLP识别。通过取下相应于表观分子量214kDa的凝胶部分并进一步用电洗脱仪(AMICON)进行电洗脱以去除大部分的污染物。随后通过变性电泳分析确定TLP的纯度。然后将TLP移至具有很高的蛋白质结合能力的PVDF(聚二氟乙烯(Polyvinylidifluoride))膜上，再用Applied Biosystems的蛋白质自动测序仪按照Edman方法进行氨基酸序列分析。在所有样品中发现的氨基酸序列如下Gly Pro Pro Glu Val Gln Asn Ala Asn(SEQ ID No．1)序列表(1)一般信息(i)申请人(A)名称Istituto Farmacoterapico Italiano S．p．A．(B)街道Via Paolo Frisi 21／23(C)城市罗马(E)国家意大利(F)邮政编码(ZIP)00197(A)名称Tarro Giulio c／o Istituto Farmacoterapica ItalianoS．p．A．(B)街道Via Paolo Frisi 21／23(C)城市罗马(E)国家意大利(F)邮政编码(ZIP)00197(ii)专利技术名称泌尿生殖癌TLP复合体肽及其抗体(iii)序列数1(iv)计算机可读形式(A)媒体类型软盘(B)计算机IBM PC兼容机(C)操作系统PC-DOS／MS-DOS(D)软件Patentin Release#1．0，Version#1．30(EPO)(2)SEQ ID NO1的信息(i)序列特征(A)长度9个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓朴学线性(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO1Gly Pro Pro Glu Val Gln Asn Ala Asn1 权利要求1．包含TLP泌尿生殖特异性表位的肽，其中所述TLP包含SEQ IDNo．1的氨基酸序列。2．根据权利要求1的肽，该肽包含SEQ ID No．1的氨基酸序列。3．可识别至少一种根据权利要求1或2的肽的抗体。4．从泌尿生殖肿瘤样品中识别TLP的诊断试剂盒，所述试剂盒包含根据权利要求3的作为特异试剂的抗体。5．从泌尿生殖肿瘤样品中识别TLP复合体的方法，其特征在于包含以下步骤-用第一份抗权利要求1或2的肽的免疫血清对所述样品进行免疫沉淀；-通过与第二份所述免疫血清进行反应以及用所述反应的检测方法来从第一免疫沉淀物中检测所述TLP复合体。6．含有权利要求1的肽作为活性剂的药物组合物。全文摘要本文描述了含有特异泌尿生殖癌TLP表位的肽,其中TLP包含氨基酸序列:Gly Pro Pro Glu Val Gln Asn AlaAsn。另外也描述了检测所述泌尿生殖TLPs的试剂及药物组合物。文档编号A61K39/395GK1205012SQ97191213 公开日1999年1月13日 申请日期1997年7月2日 优先权日1996年7月10日专利技术者朱利奥·塔若 申请人:意大利法尔马科特拉皮克研究所公开有限公司本文档来自技高网...

【技术保护点】
包含ＴＬＰ泌尿生殖特异性表位的肽，其中所述ＴＬＰ包含ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１的氨基酸序列。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：朱利奥塔若，
申请(专利权)人：尤尼哈特公司，
类型：发明
国别省市：IT[意大利]