胰腺癌预后诊断分子标记物制造技术

本发明专利技术公开了用于胰腺癌预后诊断的分子标记物，所述分子标记物选自LOC100271722、LOC100302650和PI4KAP1中的一个或多个基因。本发明专利技术进一步公开了所述的分子标记物在制备胰腺癌预后诊断试剂或试剂盒中的应用，所述试剂盒包括特异性扩增LOC100271722、LOC100302650和PI4KAP1中的一组或多组的引物序列。利用本发明专利技术的分子标记物监测胰腺癌预后，不仅精确度大大提高，同时对后续临床研究的开展具有指导意义。

【技术实现步骤摘要】
胰腺癌预后诊断分子标记物
本专利技术涉及生物检测领域，具体涉及用于胰腺癌临床预后诊断的分子标记物在预后诊断试剂或试剂盒中的应用。
技术介绍
胰腺癌是一种消化道常见肿瘤，是预后最差的恶性肿瘤之一。根据最新流行病学调查，胰腺癌位居欧美等发达国家恶性肿瘤死亡率第四位，全球每年约250万人死于胰腺癌。近20年来我国胰腺癌的发病率持续增高，目前胰腺癌位居恶性肿瘤死亡率第五位。在胰腺癌的治疗中，早期诊断困难，其起病隐匿，缺乏典型临床症状，且预后极差，胰腺癌侵袭性强，恶性度高，外科手术、化疗及放疗等手段的疗效均不尽人意，其术后1年生存率不到20％，5年生存率仅为4％，早期确诊率低和术后转移是胰腺癌死亡率高的主要原因。因此，胰腺癌的早期诊断和早期治疗是提高和改善胰腺癌预后的关键，尤其是发现一种特有的、可用于早期诊断和预后的标记物和靶向分子，对于战胜胰腺癌具有重要意义，成为目前国内外肿瘤专家的研究热点。近年来，随着分子生物学技术的发展，在癌症疾病的相关研究中，越来越多的非编码基因或非编码RNA被报道，如lncRNA、micRNA、假基因等。非编码RNA(ncRNAs)是一类具有重要生物学功能的RNA，参与基因组印记、染色体沉默、染色质修饰、转录激活、转录干扰、核内运输等多种重要的调控过程，在细胞分化和发育、基因转录和翻译、遗传和表观遗传等生命活动中均发挥重要的调控作用。越来越多的权威研究表明lncRNA在肿瘤的发生发展中起着抑制或促进肿瘤的作用。目前己有较多lncRNAs被证实在包括乳腺癌、前列腺、黑色素瘤、肝癌、结肠癌、膀胱癌等在内的人类多种肿瘤中存在差异表达并执行重要的调控功能。假基因则是一段具有与正常功能基因相似的序列，但是与正常的基因存在结构上的差异。这些差异包括在不同部位上程度不等的核苷酸缺失或插入，在基因内含子和外显子连接区发生序列变化，在编码序列当中含有终止密码子，或在转录启动区出现缺陷等。这些变化使此类基因不能转录翻译，或者产生有缺陷的蛋白质从而失去原有的生物学功能。长期以来，人们认为假基因是貌似正常、却没有功能的“死亡基因”，是基因组进化的“化石记录”。但是近年来，关于假基因的讨论日益增多，越来越多的试验证实假基因能够转录并且表达。假基因在基因表达调控、基因组进化等方面发挥着重要作用。对于胰腺癌这类发病隐匿、进展快且预后极差的疾病，更需要使用准确、灵敏、特异性强的标记物来辅助胰腺癌的诊断或预后，lncRNAs或者假基因表达分析研究或许可以帮助我们发现一些新的生物标记物。
技术实现思路
为了实现胰腺癌的早期发现，早期干预，本专利技术的目的在于提供用于胰腺癌预后诊断的分子标记物。本专利技术的还一目的是提供所述的胰腺癌预后诊断分子标记物在制备胰腺癌预后诊断试剂或试剂盒中的应用。为实现上述目的，本专利技术首先提供用于胰腺癌临床预后诊断的分子标记物，所述分子标记物为LOC100271722(NR_027036.1,lncRNA)、LOC100302650(NR_028308.1,lncRNA)和PI4KAP1(NR_003563.1,pseudogene)中的一种或多种基因。进一步地，本专利技术提供了所述的分子标记物在制备胰腺癌预后诊断试剂或试剂盒中的应用。优选的，所述预后为监测、疗效评估或转移复发监控。优选的，所述试剂包括检测所述LOC100271722、LOC100302650和PI4KAP1中的一种或多种基因表达量的寡聚核苷酸片段；所述试剂盒为检测所述LOC100271722、LOC100302650和PI4KAP1中的一种或多种基因表达量的试剂盒。进一步地，本专利技术提供了一种用于胰腺癌预后诊断的试剂盒，所述试剂盒包括特异性扩增LOC100271722、LOC100302650和PI4KAP1中的一种或多种基因的引物序列。优选的，所述引物序列包括：LOC100271722的引物对：SEQIDNO.1和SEQIDNO.2；LOC100302650的引物对：SEQIDNO.3和SEQIDNO.4；PI4KAP1的引物对：SEQIDNO.5和SEQIDNO.6中的一组或多组。优选的，所述试剂盒的组分包括：(1)组织样本或血液中总RNA提取试剂：Trizol、氯仿、异丙醇和75％乙醇等。(2)反转录试剂：逆转录缓冲液、M-MLV逆转录酶、热稳定DNA聚合酶活性的酶、RNA酶抑制剂和T重复寡核苷酸OligodT。(3)定量PCR试剂：PCR缓冲液、SYBRGreen荧光染料、dNTPs组成的SYBRGreen聚合酶链式反应体系，引物和RNaseFreeH2O。进一步地，本专利技术提供了检测受试者样本中LOC100271722、LOC100302650和PI4KAP1中的一种或多种基因表达量的寡聚核苷酸片段在制备胰腺癌预后试剂盒中的应用。优选的，利用所述的寡聚核苷酸片段检测LOC100271722、LOC100302650和PI4KAP1中的一种或多种基因表达量来进行受试者预后评估的方法为：确定来自受试者治疗前的样本中所述LOC100271722、LOC100302650和PI4KAP1中的一种或多种基因表达量以获得第一值，对受试者施用癌症治疗，确定在其后由受试者获得的后续样品中所述LOC100271722、LOC100302650和PI4KAP1中的一种或多种基因的表达量以获得治疗值，将所述第一值与所述治疗值相比较，当所述治疗值低于第一值时，指示所述受试者预后不良。优选的，当所述治疗值低于第一值35％以上时，指示所述受试者胰腺癌转移复发。优选的，所述样本选自组织、血液、血浆、血清、胰腺分泌物和胰腺细胞。本专利技术的有益效果如下：本专利技术公开了与胰腺癌相关的基因LOC100271722、LOC100302650和PI4KAP1，并进一步证实上述的一种或多种基因可以作为胰腺癌预后诊断的分子标记物。利用本专利技术的分子标记物监测胰腺癌预后，不仅精确度大大提高，同时对后续临床研究的开展具有指导意义。具体实施方式以下实施例用于说明本专利技术，但不用来限制本专利技术的范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，所用的试剂可以商业购买得到。实施例中未注明具体条件的实验方法，通常为本领域常规方法，如按照常规条件如Sambrook等人，分子克隆，实验手册(第三版)(科学出版社，2002)中的所述条件，或按照试剂制造厂家所建议的条件。本专利技术的专利技术人基于TCGA数据库信息进行胰腺癌的生存分析，筛选3个候选基因：LOC100271722、LOC100302650和PI4KAP1，现有研究中并没有关于上述基因和胰腺癌相关的报道。进一步，专利技术人对于从确诊的胰腺癌患者采集的血液样本作为待测样品进行研究，通过使用RNA提取和定量PCR对胰腺癌患者血液中上述基因的表达水平进行检测，结合胰腺癌患者的跟踪随访资料，采用统计学分析，显示上述基因与胰腺癌患者预后有密切的关系。上述基因的表达与胰腺癌患者的生存状况有一定的相关性。提示上述基因可能具有很好的辅助诊断价值，可成为胰腺癌标志物。LOC100271722(longintergenicnon-proteincodingRNA899，长链非编码蛋白RNA899，lncRNA,又名LINC00899)，位于第本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于胰腺癌预后诊断的分子标记物，其特征在于，所述的分子标记物为LOC100271722、LOC100302650和PI4KAP1中的一个或多个基因。

【技术特征摘要】
1.用于胰腺癌预后诊断的分子标记物，其特征在于，所述的分子标记物为LOC100271722、LOC100302650和PI4KAP1中的一个或多个基因。2.如权利要求1所述的分子标记物在制备胰腺癌预后诊断试剂或试剂盒中的应用。3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述预后为监测、疗效评估或转移复发监控。4.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述试剂包括检测所述LOC100271722、LOC100302650和PI4KAP1中的一个或多个基因表达量的寡聚核苷酸片段；所述试剂盒为检测所述LOC100271722、LOC100302650和PI4KAP1中的一个或多个基因表达量的试剂盒。5.一种用于胰腺癌预后诊断的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括特异性扩增LOC100271722、LOC100302650和PI4KAP1中的一个或多个基因的引物序列。6.如权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述引物序列包括：LOC100271722的引物对：SEQIDNO.1和SEQIDNO.2；LOC100302650的引物对：SEQIDNO.3和SEQIDNO.4；PI4KAP1的引物对：SEQIDNO.3和SEQI...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘昊，
申请(专利权)人：北京致成生物医学科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11