辅酶混合溶液及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种辅酶混合溶液，所述辅酶混合溶液含ATP不少于50mg/ml、NAD不少于2mg/ml、NADP不少于5mg/ml，且含有NADH不少于0.5mg/mL、NADPH不少于0.2mg/mL、AMP不少于0.1mg/mL、ADP不少于0.1mg/mL。本发明专利技术所具有的优点是：能够较好促进酶化学反应。本发明专利技术还公开了一种辅酶混合溶液的制备方法。

【技术实现步骤摘要】
辅酶混合溶液及其制备方法
本专利技术涉及添加剂
，尤其是涉及一种辅酶混合溶液。本专利技术还涉及一种辅酶混合溶液的制备方法。
技术介绍
ATP是细胞重要的供能物质和辅酶，而烟酰胺腺嘌呤二核苷酸NAD，也称辅酶Ⅰ或线粒体素，是细胞内糖酵解途径和细胞呼吸的重要细胞因子。烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸NADP也称辅酶Ⅱ，是合成核酸和脂肪酸的重要细胞因子。随着绿色酶化学工程的发展，利用生物酶在体外实现重要化合物的合成成为现实，大部分酶反应均需要辅酶的供能或质子转移、磷酸根转移。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种辅酶混合溶液，它具有能够较好促进酶化学反应的特点。本专利技术还公开了一种辅酶混合溶液的制备方法。本专利技术所采用的第一个技术方案是：辅酶混合溶液，所述辅酶混合溶液含ATP不少于50mg/ml、NAD不少于2mg/ml、NADP不少于5mg/ml，且含有NADH不少于0.5mg/mL、NADPH不少于0.2mg/mL、AMP不少于0.1mg/mL、ADP不少于0.1mg/mL。本专利技术所采用的第二个技术方案是：辅酶混合溶液的制备方法，依次包括以下步骤：（1）取含水量不高于50%的酿酒酵母，超声波破碎30—120min得到破碎酵母；（2）向破碎酵母中按破碎酵母重量1.5—2.5%的重量添加腺苷，之后加热到35—40°C形成混合料；（3）取硫酸镁、磷酸氢二钾、葡萄糖作为辅料，将辅料和混合料添加到水中，且采用磷酸调节PH为6.5—7.0，加热到35—40°C后，得到第一混合液，其中，硫酸镁、磷酸氢二钾、葡萄糖的添加量分别为破碎酵母重量的0.15—0.25%、1.5—2.5%、4—6%，水的重量为破碎酵母重量的1—2倍；（4）继续搅拌第一混合液30—60min后，向第一混合液中添加色氨酸，搅拌反应30—60min得到第二混合液，其中，色氨酸的添加量按腺苷重量的5—15%；（5）静置第二混合液20—40min，然后向第二混合液中添加纯度不低于20%的NAD激酶继续反应25—35min得到第三混合液，其中，NAD激酶的添加量为腺苷重量的0.005—0.015%；（6）静置第三混合液至少30min，然后用磷酸调PH为2.5—3.5得第四混合液；（7）对第四混合液进行离心，取上清液，上清液经过离子交换柱处理后，再依次采用低盐洗脱、高盐洗脱，收集全部溶液，接着经纳滤浓缩15—25倍，即得辅酶混合溶液。本专利技术所具有的优点是：能够较好促进酶化学反应。本专利技术的辅酶混合溶液的化学成分较为合理，对酶化学反应具有较好的促进作用。本专利技术的辅酶混合溶液的制备方法利用酿酒酵母酶系添加基因工程NADH激酶作为工程酶系，添加原辅料转化生产三磷酸腺苷ATP的同时，联产含烟酰胺腺嘌呤二核苷酸NAD和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸NADP，确保得到成分合理的辅酶混合溶液。具体实施方式实施例1辅酶混合溶液的制备方法，依次包括以下步骤：（1）取含水量为20%的酿酒酵母。本实施例中，该酿酒酵母采用新鲜啤酒酵母。即，生产出之后，在不超过10min内取出的啤酒酵母。对酿酒酵母进行超声波破碎30min得到破碎酵母。本实施例中，取100kg破碎酵母进行后续步骤。（2）向破碎酵母中按破碎酵母重量1.5%的重量添加腺苷，之后加热到35°C形成混合料。即，腺苷的添加量为1.5kg。（3）取硫酸镁、磷酸氢二钾、葡萄糖作为辅料，将辅料和混合料添加到水中，且采用磷酸调节PH为6.5，加热到35°C后，得到第一混合液。其中，硫酸镁、磷酸氢二钾、葡萄糖的添加量分别为破碎酵母重量的0.15%、1.5%、4%，水的重量为破碎酵母重量的1倍。即，硫酸镁、磷酸氢二钾、葡萄糖的添加量分别是0.15kg、1.5kg、4kg，水为100kg。（4）继续搅拌第一混合液30min后，向第一混合液中添加色氨酸，搅拌反应30min得到第二混合液。其中，色氨酸的添加量按腺苷重量的5%。即，色氨酸的添加量为0.075kg。（5）静置第二混合液20min，然后向第二混合液中添加纯度为20%的NAD激酶继续反应25min得到第三混合液。其中，NAD激酶的添加量为腺苷重量的0.005%。即，0.000075kg。（6）静置第三混合液30min，然后用磷酸调PH为2.5得第四混合液。（7）对第四混合液进行离心，取上清液，上清液经过离子交换柱处理后，再依次采用低盐洗脱、高盐洗脱，收集全部溶液，接着经纳滤浓缩15倍，即得辅酶混合溶液1。其中，离子交换柱处理、低盐洗脱、高盐洗脱、纳滤浓缩均采用常规方式，不再赘述。实施例2辅酶混合溶液的制备方法，依次包括以下步骤：（1）取含水量为40%的酿酒酵母。本实施例中，该酿酒酵母采用普通酿酒酵母。对酿酒酵母进行超声波破碎60min得到破碎酵母。本实施例中，取100kg破碎酵母进行后续步骤。（2）向破碎酵母中按破碎酵母重量2%的重量添加腺苷，之后加热到37°C形成混合料。即，腺苷的添加量为2kg。（3）取硫酸镁、磷酸氢二钾、葡萄糖作为辅料，将辅料和混合料添加到水中，且采用磷酸调节PH为6.7，加热到37°C后，得到第一混合液。其中，硫酸镁、磷酸氢二钾、葡萄糖的添加量分别为破碎酵母重量的0.2%、2%、5%，水的重量为破碎酵母重量的1.5倍。即，硫酸镁、磷酸氢二钾、葡萄糖的添加量分别是0.2kg、2kg、5kg，水为150kg。（4）继续搅拌第一混合液50min后，向第一混合液中添加色氨酸，搅拌反应50min得到第二混合液。其中，色氨酸的添加量按腺苷重量的10%。即，色氨酸的添加量为0.2kg。（5）静置第二混合液30min，然后向第二混合液中添加纯度为30%的NAD激酶继续反应30min得到第三混合液。其中，NAD激酶的添加量为腺苷重量的0.01%。即，0.0002kg。（6）静置第三混合液50min，然后用磷酸调PH为3得第四混合液。（7）对第四混合液进行离心，取上清液，上清液经过离子交换柱处理后，再依次采用低盐洗脱、高盐洗脱，收集全部溶液，接着经纳滤浓缩20倍，即得辅酶混合溶液2。其中，离子交换柱处理、低盐洗脱、高盐洗脱、纳滤浓缩均采用常规方式，不再赘述。实施例3辅酶混合溶液的制备方法，依次包括以下步骤：（1）取含水量为50%的酿酒酵母。本实施例中，本实施例中，该酿酒酵母采用新鲜啤酒酵母。即，生产出之后，在不超过10min内取出的啤酒酵母。对酿酒酵母进行超声波破碎120min得到破碎酵母。本实施例中，取100kg破碎酵母进行后续步骤。（2）向破碎酵母中按破碎酵母重量2.5%的重量添加腺苷，之后加热到40°C形成混合料。即，腺苷的添加量为2.5kg。（3）取硫酸镁、磷酸氢二钾、葡萄糖作为辅料，将辅料和混合料添加到水中，且采用磷酸调节PH为7，加热到40°C后，得到第一混合液。其中，硫酸镁、磷酸氢二钾、葡萄糖的添加量分别为破碎酵母重量的0.25%、2.5%、6%，水的重量为破碎酵母重量的2倍。即，硫酸镁、磷酸氢二钾、葡萄糖的添加量分别是0.25kg、2.5kg、6kg，水为200kg。（4）继续搅拌第一混合液60min后，向第一混合液中添加色氨酸，搅拌反应60min得到第二混合液。其中，色氨酸的添加量按腺苷重量的15%。即，色氨酸的添加量为0.375kg。（5）静置第二混合液40min，然后向第本文档来自技高网...

【技术保护点】
辅酶混合溶液，其特征在于：所述辅酶混合溶液含ATP不少于50mg/ml、NAD不少于2mg/ml、NADP不少于5mg/ml，且含有NADH不少于0.5mg/mL、NADPH不少于0.2mg/mL、AMP不少于0.1mg/mL、ADP不少于0.1mg/mL。

【技术特征摘要】
1.辅酶混合溶液，其特征在于：所述辅酶混合溶液含ATP不少于50mg/ml、NAD不少于2mg/ml、NADP不少于5mg/ml，且含有NADH不少于0.5mg/mL、NADPH不少于0.2mg/mL、AMP不少于0.1mg/mL、ADP不少于0.1mg/mL。2.辅酶混合溶液的制备方法，依次包括以下步骤：（1）取含水量不高于50%的酿酒酵母，超声波破碎30—120min得到破碎酵母；（2）向破碎酵母中按破碎酵母重量1.5—2.5%的重量添加腺苷，之后加热到35—40°C形成混合料；（3）取硫酸镁、磷酸氢二钾、葡萄糖作为辅料，将辅料和混合料添加到水中，且采用磷酸调节PH为6.5—7.0，加热到35—40°C后，得到第一混合液，其中，硫酸镁、磷酸氢二钾、葡萄糖的添加量分别为...

【专利技术属性】
技术研发人员：汪家权，
申请(专利权)人：安徽翠鸟生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽,34