吉尔吉斯白桦叶绿体伴侣蛋白60亚基β4基因及其编码蛋白制造技术

吉尔吉斯白桦叶绿体伴侣蛋白60亚基β4基因及其编码蛋白，它属于生物技术领域。吉尔吉斯白桦BkCPN60β4基因的核苷酸序列如SEQ ID No：1所示。其的编码蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No：2所示。本发明专利技术中吉尔吉斯白桦BkCPN60β4基因的编码区长度为1248bp，编码415个氨基酸，亚细胞定位表明BkCPN60β4蛋白定位在细胞核和细胞质，BkCPN60β4基因成功转化拟南芥，转基因株系BkCPN60β4基因的表达量高于野生型(WT)，1.5mmol/L和3.0mmol/L NaHCO

【技术实现步骤摘要】
吉尔吉斯白桦叶绿体伴侣蛋白60亚基β4基因及其编码蛋白
本专利技术属于生物
，具体涉及吉尔吉斯白桦叶绿体伴侣蛋白60亚基β4基因及其编码蛋白。
技术介绍
伴侣蛋白是结构复杂的一类分子伴侣蛋白质，并广泛存在于原核与真核细胞的质体和线粒体中。质体CPN60含有α亚基和β亚基两种类型，在拟南芥中存在2种α亚基基因和4种β亚基基因，水稻中α亚基基因和β亚基基因各有3种。CPN60蛋白参与蛋白折叠的装配，并且蛋白的底物十分丰富，该蛋白可能在不同的逆境胁迫中发挥重要的作用。但是CPN60蛋白在植物体内参与的植物生命活动的机制还尚不清楚。
技术实现思路
本专利技术目的是提供吉尔吉斯白桦叶绿体伴侣蛋白60亚基β4(BkCPN60β4)基因及其编码蛋白。本专利技术中吉尔吉斯白桦叶绿体伴侣蛋白60亚基β4基因的核苷酸序列如SEQIDNo：1所示。本专利技术中吉尔吉斯白桦叶绿体伴侣蛋白60亚基β4基因编码蛋白的氨基酸序列如SEQIDNo：2所示。本专利技术获得了吉尔吉斯白桦BkCPN60β4基因及其编码蛋白，BkCPN60β4基因的编码区长度为1248bp，编码415个氨基酸，亚细胞定位表明BkCPN60β4蛋白定位在细胞核和细胞质，BkCPN60β4基因成功转化拟南芥，转基因株系BkCPN60β4基因的表达量高于野生型(WT)，1.5mmol/L和3.0mmol/LNaHCO3处理转基因拟南芥与野生型株系，表明转BkCPN60β4基因的拟南芥能够提高对NaHCO3的耐受性。附图说明图1是本专利技术中吉尔吉斯白桦叶片总RNA电泳图；图2是本专利技术中BkCPN60β4基因cDNA的PCR产物的凝胶电泳图，其中，泳道M为2kbMarker，泳道1为以cDNA为模板的BkCPN60β4基因的PCR扩增产物；图3是本专利技术中pMD18-T-BkCPN60β4的菌液PCR产物的凝胶电泳图，其中，泳道M为2kbMarker，泳道1-5均为以pMD18-T-BkCPN60β4单菌落；图4是本专利技术中pBI121-BkCPN60β4-GFP的菌液PCR产物的凝胶电泳图，其中，泳道M为2kbMarker，泳道1-3均为pBI121-BkCPN60β4-GFP的菌液PCR产物；图5是本专利技术中过表达BkCPN60β4基因的拟南芥转基因株系的Kana筛选图；图6是本专利技术中过表达BkCPN60β4基因的拟南芥转基因株系的PCR鉴定中BkCPN60β4基因PCR产物的凝胶电泳图，其中，泳道M为2kbMarker，泳道CK+为阳性对照，泳道CK-为阴性对照，泳道1-3为T2代6#-8#转基因株系；图7是本专利技术中过表达BkCPN60β4基因的拟南芥转基因株系的PCR鉴定中35SPCR产物的凝胶电泳图，其中，泳道M为2kbMarker，泳道CK+为阳性对照，泳道CK-为阴性对照，泳道1-3为T2代6#-8#转基因株系；图8是本专利技术中过表达BkCPN60β4基因的拟南芥转基因株系的PCR鉴定中KanaPCR产物的凝胶电泳图，其中，泳道M为2kbMarker，泳道CK+为阳性对照，泳道CK-为阴性对照，泳道1-3为T2代6#-8#转基因株系；图9是本专利技术中过表达BkCPN60β4基因的拟南芥转基因株系的表达量分析图；图10是本专利技术中拟南芥萌发后期的NaHCO3抗性分析中无NaHCO3处理组的图；图11是本专利技术中拟南芥萌发后期的NaHCO3抗性分析中1.5mmol/LNaHCO3处理组的图；图12是本专利技术中拟南芥萌发后期的NaHCO3抗性分析中3.0mmol/LNaHCO3处理组的图。具体实施方式本专利技术技术方案不局限于以下所列举具体实施方式，还包括各具体实施方式间的任意组合。具体实施方式一：本实施方式吉尔吉斯白桦叶绿体伴侣蛋白60亚基β4基因的核苷酸序列如SEQIDNo：1所示。本实施方式中叶绿体伴侣蛋白60亚基β4基因的简写为BkCPN60β4基因。本实施方式中吉尔吉斯白桦BkCPN60β4基因的编码区全长序列1248bp。具体实施方式二：本实施方式吉尔吉斯白桦叶绿体伴侣蛋白60亚基β4基因编码蛋白的氨基酸序列如SEQIDNo：2所示。本实施方式吉尔吉斯白桦BkCPN60β4基因的编码蛋白由415个氨基酸组成。本实施方式中吉尔吉斯白桦BkCPN60β4基因的获得过程：1实验材料1.1植物材料吉尔吉斯白桦实生苗；野生型拟南芥种子。1.2菌株与载体Trans1-T1大肠杆菌感受态细胞；pMD18-T载体；pBI121表达载体；pROKⅡ植物表达载体。1.3主要试剂和培养基DNA消化酶、反转录酶、ExTaq、OMEGA胶回收和质粒提取试剂盒均购自TaKaRa公司，TipGreenqPCRSuperMix荧光染料购自全式金生物公司，其他试剂为国产分析纯。RNA提取的相关药品：CTAB提取液，5mol/LLiCl，75％乙醇，以上药品需用0.1％DEPC水配制；β-巯基乙醇，氯仿，无水乙醇。CTAB提取液的组成：2％CTAB(m/v)、20mmol/LEDTA、l00mmol/LTris-HCl(pH8.0)、1.4mol/LNaClLB液体培养基(1L)：酵母5g，蛋白胨10g，NaCl10g，纯水1L，高压灭菌后备用；LB固体培养基(1L)：酵母5g，蛋白胨10g，NaCl10g，琼脂15g，纯水1L，高压灭菌后备用。1.4实验仪器电子天平、微量移液器、常温离心机及冷冻离心机、凝胶成像仪、高压灭菌锅、超净工作台、制冰机、PCR仪、摇床、培养箱、恒温水浴槽、旋祸振荡器、核酸测定仪、ABI7500荧光定量PCR仪、基因枪、荧光显微镜。1.5引物合成与测序实验中用到的引物均委托北京华大基因公司合成，测序均由哈尔滨博仕生物技术有限公司完成。所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。所使用的材料、试剂、酶、感受态细胞何质粒等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。2实验方法2.1吉尔吉斯白桦叶片总RNA的提取准备工作：水浴锅和CTAB提取液预热，取出事先用锡纸包裹的高压灭菌的研钵和研棒进行预冷，离心机预冷(4℃)和其他药品预冷。(1)向灭菌的1.5ml离心管中加入700μL无水乙醇；(2)取未做任何处理的吉尔吉斯白桦叶片于液氮中充分研磨，研好后将其立刻加入上述离心管中，振荡3min，12000rpm4℃时离心10min；(3)弃去离心后的上清，向上述离心管中加入700μLCTAB提取液、100μLβ-巯基乙醇，振荡5min，65℃水浴5min(其间摇晃数次)，12000rpm4℃时离心10min；(4)吸取离心后的上清至新的离心管中，加入预冷的400μL氯仿、400μL水-饱和酚，振荡3min，12000rpm4℃时离心10min；(5)重复步骤(4)1次；(6)吸取离心后的上清至新的离心管中，加入预冷的等体积氯仿，振荡3min，12000rpm4℃时离心10min；(7)吸取离心后的上清至新的离心管中，加入1/2体积预冷的无水乙醇、0.8倍体积预冷的5mol/LLiCl，振荡混匀，冰浴10min，12000rpm4℃时离心10min；(8)弃去离心后的上清，加入700μL75％乙醇洗涤沉淀，混匀，12000rpm4℃时离心5min；(9)弃去离心后的上清，室温干燥10min，加入50μL0本文档来自技高网...

【技术保护点】
吉尔吉斯白桦叶绿体伴侣蛋白60亚基β4基因，其特征在于该基因的核苷酸序列如SEQ ID No：1所示。

【技术特征摘要】
1.吉尔吉斯白桦叶绿体伴侣蛋白60亚基β4基因，其特征在于该基因的核苷酸序列如SEQIDNo：1所示。2.吉尔...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨成君，王若宁，苟路正，许志茹，曲春浦，刘关君，李桂英，
申请(专利权)人：东北林业大学，
类型：发明
国别省市：黑龙江,23