一种从血块中快速提取DNA的方法技术

本发明专利技术公开了一种从血块中快速提取DNA的方法，该方法所用的装置包括一下离心管和一套接在该下离心管的上开口内的上套管，该上套管的上端开口，下端具有一100～150目的铜丝网；具体包括如下步骤：(1)将血块置于上套管的铜丝网上，离心，血块的滤液进入下离心管中，移除上套管；在步骤(2)所得的滤液中加入红细胞裂解液，充分混匀，离心，小心除去上清液而留下沉淀，接着震荡使沉淀混匀；(3)将蛋白酶K与步骤(2)所得物料混匀，用市售

【技术实现步骤摘要】
一种从血块中快速提取DNA的方法
本专利技术属于医用生物
，具体涉及一种从血块中快速提取DNA的方法。
技术介绍
提取血液中的DNA是进行各种分子生物学的前提，目前已有现成的提取技术(如目前市售的Qiagen)抗凝血中快速提取DNA的技术，而对于血凝块中的DNA的提取的前提必须先进行繁琐的前期处理，将血凝块破碎成均匀的小碎块，一般采用物理、生物或化学的方法对血凝块进行破碎，物理的方法如用摄子或手术刀搅碎血块，不仅操作过程危险，还使操作人员直接接触血块；另一种物理方法破碎血块的方法是用研磨器研磨血块，由于研磨器并不是一次性的产品，需要认真清洗研磨物品，很容易造成交叉污染；生物的方法如采用蛋白酶K消化血块一般需要16小时以上，而化学的方法需要使用酚和氯仿等有机溶剂，不仅降低提取效率，还危害操作人员的健康。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术缺陷，提供一种从血块中快速提取DNA的方法。本专利技术的技术方案如下：一种从血块中快速提取DNA的方法，该方法所用的装置包括一下离心管和一套接在该下离心管的上开口内的上套管，该上套管的上端开口，下端具有一100～150目的铜丝网；具体包括如下步骤：(1)将血块置于上套管的铜丝网上，于0～4℃，10000～13000rpm离心4～10min，血块的滤液进入下离心管中，移除上套管；(2)在步骤(1)所得的滤液中加入3～4倍体积的红细胞裂解液，充分混匀，10000～13000rpm离心1～2min，小心除去上清液而留下沉淀，接着震荡使沉淀混匀；(3)将蛋白酶K与步骤(2)所得物料以1∶3～5的体积比混匀，再加入与步骤(2)所得物料等体积的bufferAL并混匀，上述bufferAL来自市售BloodMini试剂盒；(4)将步骤(3)所得物料于55～57℃水浴加热8～12min，再加入与步骤(2)所得物料等体积的无水乙醇充分混合，得混合物；(5)用市售BloodMini试剂盒纯化提取步骤(4)所得混合物中的DNA，用于后续的分子生物学实验。在本专利技术的一个优选实施方案中，所述下离心管的容量为1.5mL、2mL、5mL或10mL。在本专利技术的一个优选实施方案中，所述铜丝网为100～120目。在本专利技术的一个优选实施方案中，所述步骤(1)为：将血块置于上套管的铜丝网上，于4℃，12000rpm离心5min，血块的滤液进入下离心管中，移除上套管。在本专利技术的一个优选实施方案中，所述步骤(2)为：在步骤(1)所得的滤液中加入3倍体积的红细胞裂解液，充分混匀，12000rpm离心1min，小心除去上清液而留下沉淀，接着震荡使沉淀混匀。在本专利技术的一个优选实施方案中，所述步骤(3)为：将蛋白酶K与步骤(2)所得物料以1∶4的体积比混匀，再加入与步骤(2)所得物料等体积的bufferAL并混匀。在本专利技术的一个优选实施方案中，所述步骤(4)为：将步骤(3)所得物料于56℃水浴加热10min，再加入与步骤(2)所得物料等体积的无水乙醇充分混合，得混合物。本专利技术的有益效果：本专利技术的方法能够快速提取血块中的DNA，前处理步骤简单快速，安全方便，同时不会产生交叉感染。附图说明图1为本专利技术所用装置的装配状态下的部分剖视的结构示意图。图2为本专利技术所用装置的分解状态下的部分剖视的结构示意图。具体实施方式以下通过具体实施方式结合附图对本专利技术的技术方案进行进一步的说明和描述。实施例1一种从血块中快速提取DNA的方法，该方法所用的装置(如图1和图2所示)包括一下离心管1和一套接在该下离心管1的上开口内的上套管2，该上套管2的上端开口，下端具有一100～150目的铜丝网3；具体包括如下步骤：(1)将血块置于上套管2的铜丝网3上，于0～4℃，10000～13000rpm离心4～10min，血块的滤液进入下离心管1中，移除上套管2；(2)在步骤(1)所得的滤液中加入3倍体积的红细胞裂解液(购自上海华蓝化学科技有限公司)，充分混匀，12000rpm离心1min，小心除去上清液而留下沉淀，接着震荡使沉淀混匀；(3)在另一1.5mL的离心管中加入50uL的蛋白酶K；再加入200uL步骤(2)所得的沉淀，充分混匀；混匀后加入200uL的bufferAL，充分混匀；56℃水浴10分钟；水浴后加入200uL的无水乙醇，充分混匀，此为混合物；(4)将步骤(2)中的混合物转移到核酸吸附柱中，8000rpm离心1分钟，所述的核酸吸附柱由上层的吸附柱和下层的收集管组成；(5)弃吸附柱中的收集管中的废液，并换一个新的收集管套入吸附柱，在核酸吸附柱加入500uL的BufferAW1，8000rpm离心1分钟；(6)弃步骤(5)中收集管中的废液，并换另一个新的收集管套入吸附柱，在核酸吸附柱加入500uL的BufferAW2，14000rpm离心3分钟；(7)弃步骤(6)中收集管中的废液，并换另一个新的收集管套入吸附柱，在核酸吸附柱加入200uL的BufferAE，静置5分钟后，8000rpm离心1分钟；(8)步骤(7)中收集管中的沉淀为DNA，用于后续的分子生物这实验。上述核酸吸附柱、收集管、bufferAL、无水乙醇、BufferAW1、BufferAW2和BufferAE为市售BloodMini试剂盒中的配套产品。用上述方法处理人血样本10份，每份均含EDTA抗凝全血0.2mL和非抗凝全血0.2mL，所述的非抗凝全血按上述步骤(1)进行血块破碎，血块破碎后再按步骤(2)～(8)进行处理，所述的抗凝全血按上述步骤(2)～(8)进行DNA提取。所提取的DNA采用NanoQuantinfiniteM200PRO进行DNA的浓度和纯度检测(表1)，抗凝全血平均DNA提取量为107.13+8.22ng/ul，非抗凝全血平均DNA提取量为104.39+7.68ng/ul，两者之间无统计学差异(F＝2.365，P＝0.141)；抗凝全血平均OD(260/280)为1.92+0.03，非抗凝全血平均OD(260/280)为1.92+0.23，两者之间无统计学差异(F＝0.1，P＝0.755)。表1人抗凝血与凝血块提取DNA浓度和纯度比较表以上所述，仅为本专利技术的较佳实施例而已，故不能依此限定本专利技术实施的范围，即依本专利技术专利范围及说明书内容所作的等效变化与修饰，皆应仍属本专利技术涵盖的范围内。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种从血块中快速提取DNA的方法，其特征在于：该方法所用的装置包括一下离心管和一套接在该下离心管的上开口内的上套管，该上套管的上端开口，下端具有一100～150目的铜丝网；具体包括如下步骤：(1)将血块置于上套管的铜丝网上，于0～4℃，10000～13000rpm离心4～10min，血块的滤液进入下离心管中，移除上套管；(2)在步骤(1)所得的滤液中加入3～4倍体积的红细胞裂解液，充分混匀，10000～13000rpm离心1～2min，小心除去上清液而留下沉淀，接着震荡使沉淀混匀；(3)将蛋白酶K与步骤(2)所得物料以1∶3～5的体积比混匀，再加入与步骤(2)所得物料等体积的buffer AL并混匀，上述buffer AL来自市售

【技术特征摘要】
1.一种从血块中快速提取DNA的方法，其特征在于：该方法所用的装置包括一下离心管和一套接在该下离心管的上开口内的上套管，该上套管的上端开口，下端具有一100～150目的铜丝网；具体包括如下步骤：(1)将血块置于上套管的铜丝网上，于0～4℃，10000～13000rpm离心4～10min，血块的滤液进入下离心管中，移除上套管；(2)在步骤(1)所得的滤液中加入3～4倍体积的红细胞裂解液，充分混匀，10000～13000rpm离心1～2min，小心除去上清液而留下沉淀，接着震荡使沉淀混匀；(3)将蛋白酶K与步骤(2)所得物料以1∶3～5的体积比混匀，再加入与步骤(2)所得物料等体积的bufferAL并混匀，上述bufferAL来自市售BloodMini试剂盒；(4)将步骤(3)所得物料于55～57℃水浴加热8～12min，再加入与步骤(2)所得物料等体积的无水乙醇充分混合，得混合物；(5)用市售BloodMini试剂盒纯化提取步骤(4)所得混合物中的DNA，用于后续的分子生物...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨天赐，林丽蓉，朱晓桢，范瑾依，高琨，童曼莉，刘莉莉，张惠林，
申请(专利权)人：厦门大学附属中山医院，
类型：发明
国别省市：福建,35