氟苯尼考杂交瘤细胞株和单克隆抗体及复合免疫吸附剂和免疫亲和柱与试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种保藏编号为CGMCC NO.9206的杂交瘤细胞株和由该细胞株分泌得到的抗氟苯尼考的单克隆抗体及其应用。本发明专利技术还提供了一种免疫吸附剂，该免疫吸附剂包括固相载体和与该固相载体偶联的抗体，所述抗体包括上述单克隆抗体和抗苯巴比妥的抗体。本发明专利技术还提供了装载该免疫吸附剂的免疫亲和柱。本发明专利技术还提供了含有上述免疫吸附剂或免疫亲和柱的试剂盒，以及上述免疫吸附剂、免疫亲和柱或试剂盒在纯化和/或检测氟苯尼考和苯巴比妥中的应用，并提供了纯化方法和检测方法。通过使用本发明专利技术提供的产品和方法实现了对氟苯尼考和苯巴比妥的同时纯化和/或检测。

【技术实现步骤摘要】
氟苯尼考杂交瘤细胞株和单克隆抗体及复合免疫吸附剂和免疫亲和柱与试剂盒及其应用
本专利技术涉及一种杂交瘤细胞株、由该杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体及其应用，由该抗体制得的免疫吸附剂，以及装载该免疫吸附剂的免疫亲和柱和试剂盒，及其它们在纯化和/或检测氟苯尼考和苯巴比妥中的应用。
技术介绍
氟苯尼考为广谱抗菌药，被广泛应用于畜牧、水产养殖业。氟苯尼考是上世纪80年代研发的氯霉素类广谱抗生素，是氯霉素禁用后的替代药物。但随着使用的增多和研究的进展，研究发现其会在动物性食品中残留，人类食用该动物性食品后会对健康造成影响，例如，对造血功能造成危害。苯巴比妥具有镇静、催眠、抗惊厥作用，并且可以抗癫痫，对癫痫大发作与局限性发作及癫痫持续状态具有良好的效果；对癫痫小发作疗效差；而对精神运动性发作则往往无效，且单用本药治疗时还可能使发作加重。苯巴比妥还有增强解热镇痛药之作用，并能诱导肝脏微粒体葡萄糖醛酸转移酶活性，促进胆红素与葡萄糖醛酸结合，降低血浆胆红素浓度，治疗新生儿髙胆红素血症(脑核性黄疸)。不良反应包括：(1)用药后出现头晕、困倦等后遗效应，久用可产生耐受性及依赖性，多次连用需要警惕蓄积中毒；(2)少数患者可出现皮疹、药热、剥脱性皮炎等过敏反应。目前，几乎没有关于同时检测氟苯尼考和苯巴比妥的方法，仅有少量关于氟苯尼考和苯巴比妥的单独检测方法的报道，主要为酶联免疫法(ELISA)、液相色谱法、液相色谱串联质谱法等。然而，酶联免疫法具有特异性不强，线性范围小，且很容易出现假阳性和假阴性结果的缺点；而液相色谱法和液相色谱串联质谱法的样品前处理操作繁琐，灵敏度受样品的纯化、浓缩等步骤的影响较大，并且需要使用如丙酮或二氯甲烷等有毒的试剂。因此，有必要寻找一种尽量少使用有毒试剂的氟苯尼考和苯巴比妥的定量检测方法。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了克服上述用于氟苯尼考和苯巴比妥含量检测的方法所具有的缺陷，提供一种杂交瘤细胞株、由该杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体，由该抗体制得的免疫吸附剂及其在纯化和/或检测氟苯尼考和苯巴比妥中的应用，以及装载该免疫吸附剂的免疫亲和柱(IAC)和试剂盒，及其它们在纯化和/或检测氟苯尼考和苯巴比妥中的应用，以及提供一种纯化氟苯尼考和苯巴比妥的方法和一种检测氟苯尼考和苯巴比妥的方法。第一方面，本专利技术提供了一种杂交瘤细胞株，其中，该杂交瘤细胞株的保藏编号为CGMCCNO.9206。第二方面，本专利技术提供了由上述杂交瘤细胞株分泌得到的单克隆抗体。第三方面，本专利技术提供了上述单克隆抗体在纯化和/或检测氟苯尼考中的应用。第四方面，本专利技术提供了一种免疫吸附剂，其特征在于，该免疫吸附剂包括固相载体和与该固相载体偶联的抗体，所述抗体包括上述抗氟苯尼考的抗体和抗苯巴比妥的抗体。第五方面，本专利技术提供了一种装载有上述免疫吸附剂的免疫亲和柱。第六方面，本专利技术提供了一种含有上述免疫吸附剂或上述免疫亲和柱的试剂盒。第七方面，本专利技术提供了上述免疫吸附剂、上述免疫亲和柱、或上述试剂盒在纯化和/或检测氟苯尼考和苯巴比妥的应用。第八方面，本专利技术提供了一种纯化氟苯尼考和苯巴比妥的方法，该方法包括，使含有氟苯尼考和苯巴比妥的液体样品通过上述免疫亲和柱，使得所述液体样品中的至少部分氟苯尼考和至少部分苯巴比妥吸附至该免疫亲和柱上，然后用洗脱液将所述至少部分氟苯尼考和至少部分苯巴比妥洗脱下来。第九方面，本专利技术提供了一种检测氟苯尼考和苯巴比妥的方法，该方法包括以下步骤：(1)根据上述纯化氟苯尼考和苯巴比妥的方法制备得到待测液，所述待测液为使用洗脱液将所述至少部分氟苯尼考和至少部分苯巴比妥洗脱下来而得到的溶液；(2)使所述待测液进入检测系统，并通过与标准品比较进行定性或定量检测。本专利技术建立了免疫亲和层析-液相色谱法检测氟苯尼考和苯巴比妥的方法，当含有氟苯尼考和苯巴比妥的样品通过装载有本专利技术提供的免疫吸附剂的免疫亲和柱时，免疫吸附剂可以特异性地吸附氟苯尼考和苯巴比妥，其它的杂质则流出免疫亲和柱，然后使用洗脱剂将氟苯尼考和苯巴比妥从免疫亲和柱中洗脱下来，从而使样品得到了很好的纯化；进一步地，将洗脱后得到的溶液进入检测系统，并通过与标准品比较进行定性或定量检测。综上所述，通过使用本专利技术提供的产品和方法实现了对氟苯尼考和苯巴比妥的同时纯化和/或检测。免疫亲和层析-液相色谱法由于采用了先进的生物技术，不仅可以检测出许多商品中的氟苯尼考和苯巴比妥的含量，而且其具有特异性强且无需使用如丙酮或二氯甲烷等有毒的试剂等优点。进一步地，在免疫亲和层析-液相色谱法中，还可以将抗氟苯尼考的抗体和抗苯巴比妥的抗体装载在同一亲和柱上，这样通过一次提取、纯化和富集过程，即可以完成两种目标物的纯化和富集，大大简化了前处理过程，提高了检测效率。本专利技术的其它特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。生物保藏本专利技术提供的杂交瘤细胞株为抗氟苯尼考单克隆抗体细胞，保藏编号为CGMCCNO.9206。该杂交瘤细胞株已于2014年5月5日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(缩写为CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮政编码：100101)。保藏编号为CGMCCNO.9203的杂交瘤细胞株为抗苯巴比妥单克隆抗体细胞，已于2014年5月5日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(缩写为CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮政编码：100101)。附图说明附图是用来提供对本专利技术的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与下面的具体实施方式一起用于解释本专利技术，但并不构成对本专利技术的限制。在附图中图1为在本专利技术的实施例1中饲料液体样品中氟苯尼考的液相色谱图；图2为在本专利技术的实施例1中饲料液体样品中苯巴比妥的液相色谱图。具体实施方式以下对本专利技术的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本专利技术，并不用于限制本专利技术。本专利技术提供一种杂交瘤细胞株，其中，该杂交瘤细胞株的保藏编号为CGMCCNO.9206。本专利技术还提供由上述杂交瘤细胞株分泌得到的单克隆抗体。其中，该单克隆抗体可以为抗氟苯尼考的抗体。根据本专利技术，本专利技术提供的上述单克隆抗体可以应用于纯化和/或检测氟苯尼考。在本专利技术中，保藏编号为CGMCCNO.9206的杂交瘤细胞株及其分泌得到的单克隆抗体的制备方法可以为本领域常规的制备方法，例如，首先将氟苯尼考半抗原与载体蛋白偶联，制备作为免疫原，然后将该免疫原对小鼠进行免疫，通过将脾细胞和骨髓瘤细胞进行细胞融合和杂交瘤细胞克隆化筛选得到所需的杂交瘤细胞株以及由其分泌的单克隆抗体。其中，所述载体蛋白可以为牛血清蛋白或卵清蛋白；在优选情况下，所述免疫原与载体蛋白的相对用量可以为本领域常规的选择，例如，所述免疫原与载体蛋白的摩尔比优选为30-40:1，更优选为35：1。在一种优选的实施方式中，上述保藏编号为CGMCCNO.9206的杂交瘤细胞株和单克隆抗体的制备方法可以包括以下步骤：(1)制备氟苯尼考免疫原将氟苯尼考溶于有机溶剂中，然后除去有机溶剂(如挥发干燥)，以得到氟苯尼考半抗原；然后将上述氟苯尼考半抗原与载体蛋白偶联，制备得到氟苯尼考免疫原。在优选的情况下，所述有本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种杂交瘤细胞株，其特征在于，该杂交瘤细胞株的保藏编号为CGMCC NO.9206。

【技术特征摘要】
1.一种杂交瘤细胞株，其特征在于，该杂交瘤细胞株的保藏编号为CGMCCNO.9206。2.由权利要求1所述的杂交瘤细胞株分泌得到的单克隆抗体。3.权利要求2所述的单克隆抗体在纯化和/或检测氟苯尼考中的应用。4.一种免疫吸附剂，其特征在于，该免疫吸附剂包括固相载体和与该固相载体偶联的抗体，所述抗体包括权利要求2所述的单克隆抗体和抗苯巴比妥的抗体；其中，所述抗苯巴比妥的抗体优选为由保藏编号为CGMCCNO.9203的杂交瘤细胞株分泌得到的单克隆抗体；优选地，在所述免疫吸附剂中，权利要求2所述的单克隆抗体与抗苯巴比妥的抗体的重量比为1:0.8-2，优选为1:1-2。5.装载有权利要求4所述的免疫吸附剂的免疫亲和柱。6.含有权利要求4所述的免疫吸附剂或含有权利要求5所述的免疫亲和柱的试剂盒；优选地，所述试剂盒中还包括洗脱液和/或保存液，所述洗脱液优选为甲醇、乙腈和丙酮中的至少一种，所述保存液优选为含有0.001-0.1重量％的NaN3的PBS缓冲液。7.权利要求4所述的免疫吸附剂、权利要求5所述的免疫亲和柱、或权利要求6所述的试剂盒在纯化和/或检测氟苯尼考和苯巴比妥中的...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈冬东，代汉慧，章骅，王伟，果旗，王雄，姚佳，王彦斐，陈旭光，
申请(专利权)人：中国检验检疫科学研究院，天津出入境检验检疫局动植物与食品检测中心，北京中检维康生物技术有限公司，中检维康湖北食品安全科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11