一种脐带血来源的干细胞的制备方法技术

本发明专利技术公开一种脐带血来源的干细胞的制备方法，包括以下步骤：沉淀细胞；选择新鲜的脐带血，经过低速离心沉淀血红细胞；分离细胞；高速离心，并加入分离液来获得干细胞；提取细胞；用吸管提取干细胞；洗涤细胞；提取后的干细胞用PBS溶液反复洗涤离心；孵育细胞；洗涤后的干细胞，加入培养液，放培养箱中孵育一定的时间；收获细胞；离心之后用生理盐水悬浮细胞，再进行细胞计数；分装细胞；将制备得到的脐带血来源的干细胞进行分装，制成最终产品。本发明专利技术所述方法制备得到的干细胞液体制剂的纯度高，杂质少，对人体无副作用，安全可靠。

【技术实现步骤摘要】
一种脐带血来源的干细胞的制备方法
本专利技术属于生物医药
，具体涉及一种脐带血来源的干细胞的制备方法。
技术介绍
随着社会的进步，工作生活压力的增大，越来越多的中青年人群都处于亚健康状态，特别是一些爱美的白领丽人，对自己的容颜渐渐老去也是忧心忡忡，这也就催生了一些保健品和抗衰产品的问世。目前市场上的相关产品鱼龙混杂，良莠不齐，许多打着保健抗衰旗号的干细胞产品，大多是在挂羊头卖狗肉，效果不尽如人意，因为这些产品只是从表面上来做文章，并未从根本上解决问题。脐血干细胞是一种可以重新激活身体免疫系统的细胞，由于这种细胞是一种原始新生的细胞，因此它可以使处于亚健康的身体焕发新的活力，同时也可以改变皮肤细胞的活性，达到抗衰老的目的，使40岁年纪拥有20岁的肌肤，但是目前市场上缺少脐带血来源的干细胞的良好制备方法。
技术实现思路
针对上述技术问题，本专利技术提供一种安全可靠、纯度高的脐带血来源的干细胞的制备方法。本专利技术的技术方案如下：一种脐带血来源的干细胞的制备方法，包括以下步骤：步骤a、沉淀细胞；首先选择新鲜的脐带血，经过低速离心沉淀血红细胞；步骤b、分离细胞；再进行高速离心，并加入分离液来获得干细胞；步骤c、提取细胞；用吸管提取干细胞；步骤d、洗涤细胞；提取后的干细胞用PBS溶液反复洗涤离心；步骤e、孵育细胞；洗涤后的干细胞，加入培养液，放培养箱中孵育一定的时间；步骤f、收获细胞；离心之后用生理盐水悬浮细胞，再进行细胞计数；步骤g、分装细胞；将制备得到的脐带血来源的干细胞进行分装，首先将细胞转移至生理盐水袋中，加入稳定剂，然后分装制成最终产品。优选地，所述步骤a中的脐带血来源于剖腹产新生儿的脐带血，脐带血无菌保存于采血袋中。优选地，所述步骤b中的分离细胞时的高速离心转数为2500rpm，离心30分钟。优选地，所述步骤c中的提取细胞，采用的吸管是3ml吸管。优选地，所述步骤d中的洗涤细胞时采用的离心转速为1500rpm，离心5分钟。优选地，所述步骤e中的孵育细胞的孵育温度是37℃，并且在5％二氧化碳培养箱中进行，孵育时间为3-4小时。优选地，所述步骤f中的收获细胞时的细胞计数，细胞数大约在1×107至1×108范围内。优选地，所述步骤g中的生理盐水袋为100ml生理盐水袋，所述稳定剂为人血白蛋白。本专利技术的有益效果是通过采用所述脐带血来源的干细胞的制备方法，制备得到这种多能修复功能的干细胞，从而通过改变人体内免疫系统的大环境，提高机体的免疫力，改善亚健康人群的体质，增强身体的免疫力，延缓衰老；本专利技术所述方法制备得到的干细胞液体制剂的纯度高，杂质少，对人体无副作用，安全可靠，制备和回输能在一天之内完成。具体实施方式下面对本专利技术做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。本专利技术公开一种脐带血来源的干细胞的制备方法，包括以下步骤：步骤a、沉淀细胞；首先选择新鲜的脐带血，经过低速离心沉淀血红细胞；步骤b、分离细胞；再进行高速离心，并加入分离液来获得干细胞；步骤c、提取细胞；用吸管提取干细胞；步骤d、洗涤细胞；提取后的干细胞用PBS溶液反复洗涤离心；步骤e、孵育细胞；洗涤后的干细胞，加入培养液，放培养箱中孵育一定的时间；步骤f、收获细胞；离心之后用生理盐水悬浮细胞，再进行细胞计数；步骤g、分装细胞；将制备得到的脐带血来源的干细胞进行分装，首先将细胞转移至生理盐水袋中，加入稳定剂，然后分装制成最终产品。所述步骤a中的脐带血来源于剖腹产新生儿的脐带血，脐带血无菌保存于采血袋中。所述步骤b中的分离细胞时的高速离心转数为2500rpm，离心30分钟。所述步骤c中的提取细胞，采用的吸管是3ml吸管。所述步骤d中的洗涤细胞时采用的离心转速为1500rpm，离心5分钟。所述步骤e中的孵育细胞的孵育温度是37℃，并且在5％二氧化碳培养箱中进行，孵育时间为3-4小时。所述步骤f中的收获细胞时的细胞计数，细胞数大约在1×107至1×108范围内。所述步骤g中的生理盐水袋为100ml生理盐水袋，所述稳定剂为人血白蛋白。实施例一：一种脐带血来源的干细胞的制备方法，包括以下步骤：步骤a、沉淀细胞；首先选择新鲜的脐带血，经过低速离心沉淀血红细胞；脐带血来源于剖腹产新生儿的脐带血，脐带血无菌保存于采血袋中；正常剖腹产新生儿脐带血大约100ml，经检测合格无HIV病毒方可使用；离心：脐带血放入离心管中，放入离心机中，低速(500-1000转/分)离心8分钟；离心之后收集全血，将全血加入到新的离心管中，弃掉红细胞沉淀。步骤b、分离细胞；再进行高速离心，并加入分离液来获得干细胞；将25ml分离液加入到50ml离心管中；取装有全血的离心管，用PBS稀释，比例为1∶1；吸取稀释好的全血25ml，取过有分离液的离心管，将血液缓缓加入到分离液的上层，加好之后轻轻放到试管架上；将加好血液和分离液的离心管中放入离心机中，转速：2000rpm-2500rpm，时间：30min。步骤c、提取细胞；用吸管提取干细胞；离心之后取出离心管，可看到离心管分了四层：分别是：血浆层、细胞层(可见到白色的圆环)、分离液层和红细胞层(有少量红细胞残留)；把离心后的离心管打开，再拿一根3ml吸管，将吸管伸到细胞层吸取细胞，将吸出的细胞放入一个干净的50ml离心管中，取完之后加入PBS溶液至50ml制成混悬液。步骤d、洗涤细胞；提取后的干细胞用PBS溶液反复洗涤离心；取出的干细胞混悬液需要经过三次洗涤；第一次洗涤：将装有细胞的离心管放入离心机转速：1500rpm离心10分钟，离心后弃去上清，沉淀为干细胞；第二次洗涤：用PBS溶液将干细胞吹起，加入PBS溶液再次制成混悬液，继续离心1500rpm离心10分钟，离心后弃去上清；第三次洗涤：用PBS溶液将干细胞吹起，加入PBS溶液再次制成混悬液，继续离心1500rpm离心10分钟，离心后弃去上清。步骤e、孵育细胞；洗涤后的干细胞，加入培养液，放培养箱中孵育一定的时间；取来第三次的沉淀细胞，用10ml无血清培养基将细胞吹起，制成混悬液，放入37℃，5％CO2培养箱中孵育2.5-3小时。步骤f、收获细胞；离心之后用生理盐水悬浮细胞，再进行细胞计数；先将孵育好的细胞经过0.22um的晒网过滤，然后进行高速离心，离心转速是2500rpm，离心10min连续离心三次每次10分钟。去除培养液，最后用PBS吹起沉淀；混匀之后进行细胞计数，细胞总数大约在1X107-1X108。步骤g、分装细胞；取来100ml生理盐水袋，先打入10ml人血白蛋白作为稳定剂，混匀后用10ml一次性注射器吸取细胞，将细胞打入生理盐水袋中，混匀封口，即为成品。实施例二：一种脐带血来源的干细胞的制备方法，包括以下步骤：步骤a、沉淀细胞；选择正常脐带血：正常剖腹产新生儿脐带血大约100ml，经检测合格无HIV病毒的方可使用。离心：脐带血放入离心管中，放入离心机中，低速1000转/分，离心8分钟。离心之后收集全血，将全血加入到新的离心管中，弃掉红细胞沉淀。步骤b、分离细胞；将25ml分离液加入到50ml离心管中；取装有全血的离心管，用PBS稀释，比例为1∶1；吸取稀释好的全血25ml，取过有分离液的离心管，将血液缓缓加入到分离液的上层，加好之后轻轻放到试管架上；将加好本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种脐带血来源的干细胞的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤a、沉淀细胞；首先选择新鲜的脐带血，经过低速离心沉淀血红细胞；步骤b、分离细胞；再进行高速离心，并加入分离液来获得干细胞；步骤c、提取细胞；用吸管提取干细胞；步骤d、洗涤细胞；提取后的干细胞用PBS溶液反复洗涤离心；步骤e、孵育细胞；洗涤后的干细胞，加入培养液，放培养箱中孵育一定的时间；步骤f、收获细胞；离心之后用生理盐水悬浮细胞，再进行细胞计数；步骤g、分装细胞；将制备得到的脐带血来源的干细胞进行分装，首先将细胞转移至生理盐水袋中，加入稳定剂，然后分装制成最终产品。

【技术特征摘要】
1.一种脐带血来源的干细胞的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤a、沉淀细胞；首先选择新鲜的脐带血，经过低速离心沉淀血红细胞；步骤b、分离细胞；再进行高速离心，并加入分离液来获得干细胞；步骤c、提取细胞；用吸管提取干细胞；步骤d、洗涤细胞；提取后的干细胞用PBS溶液反复洗涤离心；步骤e、孵育细胞；洗涤后的干细胞，加入培养液，放培养箱中孵育一定的时间；步骤f、收获细胞；离心之后用生理盐水悬浮细胞，再进行细胞计数；步骤g、分装细胞；将制备得到的脐带血来源的干细胞进行分装，首先将细胞转移至生理盐水袋中，加入稳定剂，然后分装制成最终产品。2.根据权利要求1所述的脐带血来源的干细胞的制备方法，其特征在于：所述步骤a中的脐带血来源于剖腹产新生儿的脐带血，脐带血无菌保存于采血袋中。3.根据权利要求1所述的脐带血来源的干细胞的制备方法，其特征在于：所述步骤...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵钢，赵晓芳，施琦，
申请(专利权)人：江苏苏博生物医学股份有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32