本发明专利技术提供高山被孢霉在饲料添加剂中应用，所述高山被孢霉是重组高山被孢霉(Mortierella alpina)MA‑oPpFADS17‑4(它同样被命名为CCFM698)。本发明专利技术的高山被孢霉干燥菌体的总脂肪酸含量为以干燥菌体重量计30％‑40％，其中EPA含量为以总脂肪酸重量计24％或以上。本发明专利技术的干燥菌体在饲料中的用量是基础饲料总重量的0.5‑1.5％，该菌体饲料添加剂的脂肪酸组成合理，EPA含量很高，能用于生产有利于食用者身体健康的高DHA鸡蛋。饲喂含有本发明专利技术的饲料添加剂的饲料的蛋鸡，所产鸡蛋DHA含量达到了约120mg/个鸡蛋，显著高于现有技术。
【技术实现步骤摘要】
高山被孢霉CCFM698菌体的制备及其在饲料添加剂中的应用
本专利技术涉及饲料添加剂，特别涉及一种高总脂肪酸含量、高EPA含量的高山被孢霉菌体，其生产方法及作为饲料添加剂的应用。
技术介绍
多不饱和脂肪酸可分为ω-3，ω-6和ω-9等系列，ω-3系列PUFAs主要有α-亚麻酸(ALA)、二十碳五烯酸(EPA)、二十二碳五烯酸(DPA)以及二十二碳六烯酸(DHA)。EPA具有抗凝血、抗癌、抗炎、防心血管病、降血脂等特殊生理功能，在医药保健品、食品和饲料行业均有较多的应用。EPA的生物来源主要包括海洋鱼类和微生物发酵生产，微生物发酵法生产EPA原料丰富、周期短、价格便宜、占地面积小、不受气候影响等，越来越受关注。目前通过微生物发酵法生产EPA的商业化产品是杜邦公司报道的NewHarvestTMEPAoil和salmon，所用菌株是解脂耶氏酵母基因工程菌。高山被孢霉油脂含量丰富，野生型高山被孢霉需在低温下能合成EPA，高山被孢霉MA-oPpFADS17是通过在野生型高山被孢酶中过表达来源于寄生疫霉的ω-3脂肪酸脱饱和酶，最终得到成功表达候选ω-3脂肪酸脱饱和酶的高山被孢霉重组菌株。将其发酵条件优化后，使得该菌株在廉价碳氮源的培养基中可以合成大量的EPA，将其制得的菌粉作蛋鸡饲料的添加剂，可以大幅提高蛋黄DHA含量，改善饮食中ω-3和ω-6比例。高山被孢霉应用于饲料添加剂属于现有技术，例如中国专利技术专利申请CN104630077A公开的高山被孢霉CCFM442及其在生产菌体饲料添加剂中的应用。其中，根据其说明书的记载，干燥菌体中PUFAs含量占总脂肪酸含量的45.76％，其中AA含量占总脂肪酸含量24.43％，EPA含量占总脂肪酸含量的6.09％。将该菌体饲料添加剂(即干燥菌体)以基础饲料总重量计5％与基础饲料混合造粒饲喂蛋鸡，所产鸡蛋蛋黄中的DHA占总脂肪酸为1.06％，AA占总脂肪酸比例为3.26％，即，AA含量占全蛋0.32％，DHA含量占全蛋0.11％，均高于普通鸡蛋。然而，仍然期望通过对饲料的改进而进一步提高DNA在鸡蛋中的含量。
技术实现思路
本专利技术的目的是克服现有技术缺陷，提供一种能够提高鸡蛋中DNA含量的饲料添加剂。为了实现上述目的，本专利技术的原理是通过优化高山被孢霉的菌株选择和发酵工艺，实现在常温条件下大量积累EPA的高山被孢霉，以应用于饲料添加剂。为此，本专利技术提供高山被孢霉在饲料添加剂中应用，所述高山被孢霉是重组高山被孢霉(Mortierellaalpina)MA-oPpFADS17-4(它同样被命名为CCFM698)。高山被孢霉CCFM698是通过过表达来源于寄生疫霉的ω-3脱饱和酶oPpFADS17基因的重组高山被孢霉，根据中国专利技术专利申请CN201610184669X(一株过表达来源于寄生疫霉的ω-3脱饱和酶的重组高山被孢霉、其构建方法及应用)的记载，该菌株于2016年1月18日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCCNo.11820。中国专利技术专利申请CN201610184669X所述的高山被孢霉MA-oPpFADS17-4也被命名为高山被孢霉CCFM698。在本专利技术中，优选地，所述高山被孢霉是干燥菌体。在本专利技术中，所述干燥菌体的总脂肪酸含量为以干燥菌体重量计30％-40％，其中EPA含量为以总脂肪酸重量计24％或以上。所述干燥菌体在饲料中的用量是基础饲料总重量的0.5-1.5％。进一步地，本专利技术还通过改进高山被孢霉(Mortierellaalpina)CCFM698的发酵工艺，以实现在常温条件下大量积累EPA。为此，本专利技术提供高山被孢霉菌体的生产方法，所述方法包括以下步骤：(1)将活化两代的高山被孢霉CCFM698菌株按1％重量的接种量接种到发酵培养基中，然后在温度28℃的条件下，以200rpm的转速发酵7天；所述发酵培养基组成如下：余量为水；所述发酵培养基的pH值为6.0-8.0；所述磷酸盐选自磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠中的一种；(2)将步骤(1)中发酵完成的菌体用200目的标准样筛过滤后，清水洗涤，获得湿菌体；(3)将步骤(2)得到的湿菌体烘干后得到所述干燥菌体。在本专利技术中，所述豆粕提取物的制备方法是：以重量计，取豆粕1份，加入5份水，煮沸并保持沸腾10-30min；所得产物用双层纱布过滤，弃去滤渣，所得滤液冷却至室温，即为所述豆粕提取物。在本专利技术中，豆粕应当理解为大豆提取豆油后得到的副产品，其呈不规则碎片状，颜色为浅黄色至浅褐色，味道具有烤大豆香味。豆粕是市场上能够购买获得的产品，例如中储粮镇江粮油有限公司销售的豆粕产品。在本专利技术中，步骤(3)的烘干可以是在将湿菌体置于50-60℃下5-10小时实现的。可选地，步骤(3)中，可以以冷冻干燥替代烘干步骤从而得到所述高山被孢霉的冻干菌体；所述的冷冻干燥是用冷冻干燥机实现的，其程序为：将湿菌体至于-40℃下4h；然后在-30℃下冷冻15h；然后在-10℃下冷冻15h；然后在10℃下放置4h；最后在20℃下放置4h，得到所述冻干菌体。本专利技术的高山被孢霉(Mortierellaalpina)CCFM698菌体饲料添加剂的脂肪酸组成合理，EPA含量很高，能用于生产有利于食用者身体健康的高DHA鸡蛋。该添加剂具有使用安全性高、PUFAs含量高、脂肪酸组成合理等优点，在不降低产蛋性能参数的情况下，使ω-3和ω-6比例维持在合理范围内，对人体健康产生有益作用。此外，本专利技术的菌体饲料添加剂安全性高，该菌种的野生型菌株已通过正式安全性评估，其生产安全性得到保证。所得饲料添加剂的EPA含量在常温下可达占总脂24％，总脂肪酸含量达菌体总重40％，是目前文献报道的在常温下EPA产量最高的高山被孢霉菌株。另一方面，本专利技术对发酵工艺进行了改进，该菌体饲料添加剂生产所用培养基为廉价葡萄糖和豆粕，二者市场价格较低且容易获得，因此生产成本低，且该菌体饲料添加剂的发酵是在常温而非低温下进行的，发酵成本大大降低。【附图说明】图1为实施例7中0.5％高山被孢霉菌体补充喂养期各主要脂肪酸的变化；图2为实施例7中1％高山被孢霉菌体补充喂养期各主要脂肪酸的变化；图3为实施例7中1.5％高山被孢霉菌体补充喂养期各主要脂肪酸的变化。【具体实施方式】通过下述实施例将能够更好地理解本专利技术。在本专利技术中，如无特殊说明，用于表示浓度的“％”均为重量百分比，或“份”均为重量份。本专利技术使用的培养设备是上海知楚仪器有限公司销售的振荡培养箱(型号:ZQZY-70B)。在本专利技术中，冷冻干燥步骤是使用LABCONCO公司的冻干机(型号：FreeZone6)实现的。实施例1：发酵培养基中葡萄糖浓度的确定将高山被孢霉CCFM698以1％接种量接种到活化培养基中，在28℃200rpm转速条件下活化36h，活化两代；基础发酵培养基的组成为：葡萄糖、5g/L酵母提取物(Yeastextract)、10g/L硝酸钾、1g/L磷酸二氢钾、0.25g/L七水合硫酸镁，采用1MHCl和1MNaOH水溶液将pH调节至6.0，再在温度115℃下灭菌20min，得到所述的活化培养基。将基础发酵培养基中的本文档来自技高网...
【技术保护点】
高山被孢霉在饲料添加剂中应用，所述高山被孢霉是重组高山被孢霉(Mortierella alpina)CCFM698。
【技术特征摘要】
1.高山被孢霉在饲料添加剂中应用，所述高山被孢霉是重组高山被孢霉(Mortierellaalpina)CCFM698。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述高山被孢霉是干燥菌体。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述干燥菌体的总脂肪酸含量为以干燥菌体重量计30％-40％，其中EPA含量为以总脂肪酸重量计24％或以上。4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于所述干燥菌体在饲料中的用量是基础饲料总重量的0.5-1.5％。5.高山被孢霉菌体的生产方法，所述方法包括以下步骤：(1)将活化两代的高山被孢霉CCFM698菌株按1％重量的接种量接种到发酵培养基中，然后在温度28℃的条件下，以200rpm的转速发酵7天；所述发酵培养基组成如下：所述发酵培养基的pH值为6.0；所述磷酸盐选自磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠中的一种；(2)将步骤...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈海琴，陈永泉，陈卫，葛程凤，唐鑫，杨芹，顾震南，张灏，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32
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