一种渗透压稳定剂及其用途制造技术

本发明专利技术涉及一种组合物，其中包含：渗透压维持剂、保湿剂和pH缓冲剂，该组合物的pH值为6.5～7.5。该组合物作为渗透压稳定剂，对原生质体具有保护作用，能够防止原生质体失活。采用该组合物渗透压稳定剂时，对原生质体进行ARTP诱变，能够提高突变效率。本发明专利技术还涉及一种应用本发明专利技术组合物作为渗透压稳定剂诱变原生质体的方法。

【技术实现步骤摘要】
一种渗透压稳定剂及其用途
本专利技术属于生物
，涉及一种组合物及其用途。该组合物作为渗透压稳定剂，对原生质体具有保护作用，能够防止原生质体失活。本专利技术还涉及一种应用该组合物作为渗透压稳定剂诱变原生质体的方法。
技术介绍
原生质体诱变是用诱变方法直接处理原生质体，经过繁殖再生培养，从中选育获得突变株的过程。由于原生质体没有细胞壁屏障，诱变剂容易进入细胞内，发生变异的概率更大、时间更短、效率更高。常压室温等离子体(AtmosphericRoomTemperaturePlasma，简称ARTP)诱变是一种新型高效的物理诱变方法。ARTP诱变技术采用大气压射频辉光放电等离子体源，激发具有高浓度活性粒子的等离子体射流作用于核酸、蛋白质，细胞整体结构等，能够使微生物细胞壁、膜的结构及通透性改变，并引起基因损伤，进而使微生物基因序列及其代谢网络发生显著变化，最终导致微生物产生突变。根据DNA损伤强度和突变率大小评价不同诱变方法的优劣，发现最大突变率与对应的DNA损伤强度呈正相关，ARTP能够引起更多AT-GC之间的突变。ARTP诱变技术的DNA损伤强度、突变率明显高于其它传统诱变方法。ARTP诱变育种技术广泛应用于细菌、真菌、放线菌、霉菌、藻类、大型真菌、植物及动物细胞。ARTP诱变技术直接作用于原生质体时，渗透压稳定剂扮演着重要的角色。首先，渗透压稳定剂对去除细胞壁后的原生质体起着至关重要的保护作用，防止原生质体失活。其次，渗透压稳定剂提供原生质体ARTP诱变时的样品处理环境，对ARTP高能活性离子的作用能力的强弱有着一定的影响。渗透压稳定剂的组成在ARTP作用时对突变效果的影响在于：ARTP诱变，要求样品层薄、分散均一，处理量小(μL级)，以便于ARTP等离子射流集中、高效作用于诱变材料，远远小于传统原生质诱变方法中5mL的样品处理量。随着作用时间的延长，微量体系中水分挥发会对原生质体稳定性造成较大影响，渗透压增高，失去保护后的原生质体可能造成不可挽救性皱缩、脱水失活。因此，ARTP作用条件下，微量体系的稳定性直接影响到ARTP对原生质体的作用效果。如何保证微量体系中原生质体的稳定性，使ARTP等离子体更好的应用于原生质体材料，从而提高ARTP诱变技术的突变效率，成为本领域需要解决的技术问题。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是提供一种组合物，该组合物作为渗透压稳定剂，对原生质体具有保护作用，能够防止原生质体失活。采用该组合物渗透压稳定剂时，对原生质体进行ARTP诱变，能够提高突变效率。本专利技术的另一个目的是提供一种应用本专利技术组合物作为渗透压稳定剂诱变原生质体的方法。具体地，本专利技术涉及一种组合物，其包含：渗透压维持剂0.5～1.0wt％(例如0.6wt％、0.7wt％、0.8wt％或0.9wt％)，保湿剂5～40wt％，优选为8～35wt％，进一步优选为10～30wt％(例如15wt％、16wt％、18wt％、20wt％、22wt％、25wt％或28wt％)，余量为pH缓冲剂，该组合物的pH值为6.5～7.5(例如6.8、7.0、7.1、7.2或7.4)。在一个实施方案中，本专利技术所述渗透压维持剂选自：氯化钠和氯化钾。所述保湿剂选自：海藻糖、透明质酸、甘油、聚乙二醇和葡萄糖。所述pH缓冲剂选自：PBS缓冲液和Tris-HCl缓冲液。在另一个实施方案中，本专利技术所述的组合物，其包含：渗透压维持剂0.5～1.0wt％，保湿剂15～25wt％，余量为pH缓冲剂，该组合物的pH值为6.5～7.5。在另一个实施方案中，本专利技术所述的组合物，其包含：渗透压维持剂0.6～0.9wt％，保湿剂15～25wt％，余量为pH缓冲剂，该组合物的pH值为6.5～7.5。在另一个实施方案中，本专利技术所述的组合物，其包含：氯化钠或氯化钾0.5～1.0wt％(例如0.6wt％、0.7wt％、0.8wt％或0.9wt％)，甘油3～8wt％(例如4wt％、5wt％、6wt％或7wt％)，海藻糖15～22wt％(例如16wt％、17wt％、18wt％、19wt％、20wt％或21wt％)，余量为Tris-HCl缓冲液，该组合物的pH值为6.8～7.2(例如6.9、7.0或7.1)。在另一个实施方案中，本专利技术所述的组合物，其包含：氯化钠或氯化钾0.5～1.0wt％(例如0.6wt％、0.7wt％、0.8wt％或0.9wt％)，透明质酸3～8wt％(例如4wt％、5wt％、6wt％或7wt％)，甘油3～8wt％(例如4wt％、5wt％、6wt％或7wt％)，聚乙二醇3～8wt％(例如4wt％、5wt％、6wt％或7wt％)，余量为Tris-HCl缓冲液，该组合物的pH值为7.0～7.5(例如7.1、7.2、7.3或7.4)。在另一个实施方案中，本专利技术所述的组合物，其包含：氯化钠或氯化钾0.5～1.0wt％(例如0.6wt％、0.7wt％、0.8wt％或0.9wt％)，葡萄糖8～12wt％(例如9wt％、10wt％或11wt％)，透明质酸0.5～1.2wt％(例如0.6wt％、0.7wt％、0.8wt％、1.0wt％或1.1wt％)，海藻糖3～8wt％(例如4wt％、5wt％、6wt％或7wt％)，余量为PBS缓冲液，该组合物的pH值为6.5～7.5(例如6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3或7.4)。本专利技术还涉及前述任一项所述的组合物作为原生质体的渗透压稳定剂的用途。本专利技术还涉及前述任一项所述的组合物在原生质体ARTP诱变中的应用。本专利技术还涉及一种诱变原生质体的方法，其包括：使用本专利技术前述任一项所述的组合物作为原生质体的渗透压稳定剂。在一个实施方案中，本专利技术所述的诱变原生质体的方法，其包括：(1)提供原生质体悬浮液；(2)将原生质体悬浮液置于本专利技术任一项所述的组合物中，得到待诱变原生质体样品；(3)对步骤(2)得到的待诱变原生质体样品进行诱变。在另一个实施方案中，本专利技术所述的诱变原生质体的方法，该方法采用常压室温等离子体对原生质体进行诱变。在另一个实施方案中，本专利技术所述的诱变原生质体的方法，包括以下步骤：a)用复合酶对细胞进行破壁处理，得到原生质体悬浮液；b)将原生质体悬浮液置于所述的组合物中，调整原生质体浓度为3×106～3×108CFU/mL，得到待诱变原生质体样品；c)采用常压室温等离子体育种仪对待诱变原生质体样品进行诱变，载样量为10～30μL，作用功率为100～200w，作用时间为15～50秒。在一个实施方案中，本专利技术所述的原生质体可以是细菌、真菌、放线菌、霉菌、藻类、大型真菌、植物及动物细胞的原生质体，优选为真菌原生质体。在一个实施方案中，本专利技术所述的聚乙二醇是指分子量小于2000的聚乙二醇，为常规市售试剂，其在本专利技术的组合物中作为保湿剂。本专利技术所述的PBS缓冲液为本领域常用的缓冲液，可以根据现有技术中记载的方法配制。本专利技术所述的Tris-HCl缓冲液为本领域常用的缓冲液，可以根据现有技术中记载的方法配制。本专利技术的有益效果：本专利技术提供的组合物，作为渗透压稳定剂，具有以下一个或多个优点：1)能够维持细胞内外渗透压平衡，保护原生质体形态，防止原生质体失活；2)使用本专利技术提供的组合物作为渗透压稳定剂，原生质体样本的存活状态好，在进行A本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种组合物，其包含：渗透压维持剂 0.5～1.0wt％，保湿剂 5～40wt％(例如10～30wt％)，余量为pH缓冲剂，该组合物的pH值为6.5～7.5，其中：所述渗透压维持剂选自：氯化钠和氯化钾，所述保湿剂选自：海藻糖、透明质酸、甘油、聚乙二醇和葡萄糖，所述pH缓冲剂选自：PBS缓冲液和Tris‑HCl缓冲液。

【技术特征摘要】
1.一种组合物，其包含：渗透压维持剂0.5～1.0wt％，保湿剂5～40wt％(例如10～30wt％)，余量为pH缓冲剂，该组合物的pH值为6.5～7.5，其中：所述渗透压维持剂选自：氯化钠和氯化钾，所述保湿剂选自：海藻糖、透明质酸、甘油、聚乙二醇和葡萄糖，所述pH缓冲剂选自：PBS缓冲液和Tris-HCl缓冲液。2.权利要求1所述的组合物，其包含：氯化钠或氯化钾0.5～1.0wt％，甘油3～8wt％，海藻糖15～22wt％，余量为Tris-HCl缓冲液。3.权利要求1所述的组合物，其包含：氯化钠或氯化钾0.5～1.0wt％，透明质酸3～8wt％，甘油3～8wt％，聚乙二醇3～8wt％，余量为Tris-HCl缓冲液。4.权利要求1所述的组合物，其包含：氯化钠或氯化钾0.5～1.0wt％，葡萄糖8～12wt％，透明质酸0.5～1.2wt％，海藻糖3～8wt％，余量为PBS缓冲液。5.一种诱变原生质体的方法，其包括：使用权利要求1至4...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄艳，童星，
申请(专利权)人：佛山市海天调味食品股份有限公司，佛山市海天高明调味食品有限公司，佛山市海天江苏调味食品有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44