一种丙型肝炎病毒融合抗原蛋白及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种重组丙型肝炎病毒融合抗原蛋白，本发明专利技术通过构建丙型肝炎病毒蛋白Core,E1和E2的全长及截短突变体表达载体和融合上述三种病毒蛋白的强免疫原性区域的融合抗原HCV

Hepatitis C virus fusion antigen protein and application thereof

The invention discloses a recombinant hepatitis C virus antigen fusion protein, the invention through the construction of hepatitis C virus protein Core, full-length and truncated mutant E1 and expression of E2 fusion antigen HCV vector and fusion of the three viral proteins are highly immunogenic region

【技术实现步骤摘要】
一种丙型肝炎病毒融合抗原蛋白及其应用
本专利技术属于基因工程疫苗
，具体涉及一种丙型肝炎病毒融合抗原蛋白、基于该丙型肝炎病毒融合抗原蛋白的丙型肝炎病毒基因工程疫苗及其制备方法与用途。
技术介绍
丙型肝炎病毒是丙型肝炎的致病因子，该病毒感染的世界总人数超过1.7亿，我国感染人数超过4000万。大多数丙型肝炎病毒感染者为持续性感染，进而引起慢性肝炎、肝硬化和肝细胞癌。据报道，全球40％的慢性肝病和80％的肝细胞癌与丙型肝炎病毒有关，每年全球用于丙型肝炎治疗费用超过1000亿美元。现有的治疗药物只对部分丙型肝炎肝病毒感染者有效，且治疗时间长，成本高和有副作用。疫苗是防治，特别是预防病毒性疾病的一种极其经济、简单和有效的手段。近年来，针对丙型肝炎病毒的疫苗包括灭活疫苗，重组蛋白疫苗，DNA疫苗，融合抗原疫苗等研制工作虽然取得了一些进展。但是，迄今为止，尚没有一种疫苗已经完成临床试验，并能够应用于人类的丙型肝炎预防和治疗(AbdelwahabandAhmed,2016)。丙型肝炎病毒基因组具有高变异性，采取多种方式逃避宿主免疫反应。自愈的丙肝患者和黑猩猩在急性期可检测到高滴度的多种中和抗体、强烈而广泛的T细胞免疫应答。而进入到慢性期的丙肝感染者和黑猩猩则产生中和抗体较晚、细胞免疫应答微弱且特异性过于集中。因此，成功的丙型肝炎病毒疫苗应该诱导产生高滴度的多种中和抗体和强烈而广泛的T细胞免疫应答(Torresietal.,2011)。基因工程融合抗原疫苗同时携带多个抗原表位，一方面可以避免传统的灭活或减毒疫苗存在的生物危害性和毒力返祖等问题,另一方面因为也可以诱导产生多种中和抗体应答、以及广泛的细胞免疫应答。因此，重组基因工程融合抗原疫苗成为获得成功的丙型肝炎病毒病毒疫苗的一个热点和发展方向。现有技术中尚没有临床可用的丙肝疫苗，本专利提供了一种新的植物生产的丙型肝炎病毒融合抗原蛋白，该融合抗原蛋白具有较强的中和抗体诱导能力，与丙肝病人血清有广泛反应性，体外可抑制丙型肝炎病毒感染，为丙肝疫苗或诊断试剂盒提供了新的解决方案。与本专利技术有关的
技术介绍
如下文献所示：Abdelwahab,K.S.andAhmed,S.Z.(2016)StatusofhepatitisCvirusvaccination:Recentupdate.WorldJGastroenterol22(2),862-73.Baulcombe,D.C.,Chapman,S.andSanta,C.S.(1995)Jellyfishgreenfluorescentproteinasareporterforvirusinfections.PlantJ7(6),1045-53.Kong,L.,Fujimoto,A.,Nakamura,M.,Aoyagi,H.,Matsuda,M.,Watashi,K.,Suzuki,R.,Arita,M.,Yamagoe,S.,Dohmae,N.,Suzuki,T.,Sakamaki,Y.,Ichinose,S.,Suzuki,T.,Wakita,T.andAizaki,H.(2016)ProlactinRegulatoryElementBindingProteinIsInvolvedinHepatitisCVirusReplicationbyInteractionwithNS4B.JVirol90(6),3093-111.Torresi,J.,Johnson,D.andWedemeyer,H.(2011)ProgressinthedevelopmentofpreventiveandtherapeuticvaccinesforhepatitisCvirus.JHepatol54(6),1273-85.Xiang,Z.H.,Cai,W.J.,Zhao,P.,Kong,L.B.,Ye,L.B.andWu,Z.H.(2006)PurificationandapplicationofbacteriallyexpressedchimericproteinE1E2ofhepatitisCvirus.ProteinExprPurif49(1),95-101.
技术实现思路
为了解决现有技术的不足，本专利技术提供了一种丙型肝炎病毒融合抗原蛋白，所述丙型肝炎病毒融合抗原蛋白融合了丙型肝炎病毒的衣壳蛋白Core、包膜蛋白E1和包膜蛋白E2的强免疫原性区域。所述丙型肝炎病毒融合抗原蛋白的氨基酸序列可源自丙型肝炎病毒基因型1b，所述丙型肝炎病毒基因型1b的GenBank登录号为:AEJ86549.1。所述丙型肝炎病毒融合抗原蛋白可由丙型肝炎病毒Core蛋白的1-92氨基酸,E1蛋白的55-122氨基酸和E2蛋白的63-218氨基酸共同组成。所述丙型肝炎病毒融合抗原蛋白的蛋白质序列可如SEQIDNO.1所示的蛋白序列，或具有同SEQIDNO.1所示序列的蛋白诱导交叉免疫反应的免疫原。本专利技术还提供了一种丙型肝炎病毒融合抗原蛋白表达载体，所述表达载体能够借助宿主表达上所述的任一种丙型肝炎病毒融合抗原蛋白。所述丙型肝炎病毒融合抗原蛋白表达载体可以是马铃薯X病毒载体PVX201，以能够编码上所述任一种丙型肝炎病毒融合抗原蛋白的核酸序列为编码序列，以烟草为表达宿主。所述的丙型肝炎病毒融合抗原蛋白的克隆可使用核酸序列为如SEQIDNO.26所示的序列，其组成从5’端至3’端依次为：保护碱基CAT，ClaI酶切位点，烟草偏爱Kozak序列，6个组氨酸组成的组氨酸标签编码序列，丙型肝炎病毒融合抗原编码序列，终止密码子，SalI酶切位点和保护碱基CTC。本专利技术还提供了如上所述任一种丙型肝炎病毒融合抗原蛋白、或如上所述任一种丙型肝炎病毒融合抗原蛋白表达载体表达的丙型肝炎病毒融合抗原蛋白在制备丙型肝炎病毒疫苗或丙型肝炎病毒引起的疾病的治疗制剂或预防制剂中的应用。本专利技术还提供了如上所述任一种丙型肝炎病毒融合抗原蛋白、或如上所述任一种丙型肝炎病毒融合抗原蛋白表达载体表达的丙型肝炎病毒融合抗原蛋白在制备丙型肝炎病毒诊断制剂或诊断试剂盒中的应用。本专利技术还提供了如上所述任一种丙型肝炎病毒融合抗原蛋白、或如上所述任一种丙型肝炎病毒融合抗原蛋白表达载体表达的丙型肝炎病毒融合抗原蛋白作为丙型肝炎病毒感染抑制剂的应用。为了本专利技术的目的，更为具体地，本专利技术做了如下一些实验：(1)构建丙型肝炎病毒基因型1b(GenBank登录号为:AEJ86549.1)Core,E1和E2蛋白的全长及截短突变体基因表达载体，构建的截短突变体基因表达载体转染烟草表达Core,E1和E2蛋白的系列截短突变体蛋白，烟草表达的截短突变体蛋白免疫小鼠，ELISA实验测定Core,E1和E2蛋白中具备强免疫原性的区域。实验结果表明：Core1-92疫原性强于Core93-190，E155-122免疫原性强于E11-54和E1123-199，E263-218免疫原性强于E21-62和E2219-344。(2)构建包含强免疫原性的Core1-92，E155-122和E263-218的融合抗原表达载体，转染烟草表达融合抗原Core1-92/E155-122/E263-218(命名为HCVles)。表达的融合抗原HCVles皮下多本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种丙型肝炎病毒融合抗原蛋白，其特征在于，所述丙型肝炎病毒融合抗原蛋白融合了丙型肝炎病毒的衣壳蛋白Core、包膜蛋白E1和包膜蛋白E2的强免疫原性区域。

【技术特征摘要】
1.一种丙型肝炎病毒融合抗原蛋白，其特征在于，所述丙型肝炎病毒融合抗原蛋白融合了丙型肝炎病毒的衣壳蛋白Core、包膜蛋白E1和包膜蛋白E2的强免疫原性区域。2.如权利要求1所述的丙型肝炎病毒融合抗原蛋白，其特征在于，所述丙型肝炎病毒融合抗原蛋白的氨基酸序列源自丙型肝炎病毒基因型1b，所述丙型肝炎病毒基因型1b的GenBank登录号为:AEJ86549.1。3.如权利要求1所述的丙型肝炎病毒融合抗原蛋白，其特征在于，所述丙型肝炎病毒融合抗原蛋白由丙型肝炎病毒Core蛋白的1-92氨基酸,E1蛋白的55-122氨基酸和E2蛋白的63-218氨基酸共同组成。4.如权利要求1所述的丙型肝炎病毒融合抗原蛋白，其特征在于，所述丙型肝炎病毒融合抗原蛋白的蛋白质序列是如SEQIDNO.1所示的蛋白序列，或具有同SEQIDNO.1所示序列的蛋白诱导交叉免疫反应的免疫原。5.一种丙型肝炎病毒融合抗原蛋白表达载体，其特征在于，所述表达载体能够借助宿主表达如权利要求1-4中任一项所述的丙型肝炎病毒融合抗原蛋白。6.如权利要求5所述的丙型肝炎病毒融合抗原蛋白表达载体，其特征在于，所述丙型肝炎病毒融合抗原蛋白表达载体是马铃薯X病毒载体PVX201，以能够编码如权利要求1-4中任一项所述的丙型肝炎病毒融合抗原蛋白的核酸序列为编码序...

【专利技术属性】
技术研发人员：孔令保，徐晶，郭韫丽，
申请(专利权)人：江西农业大学，
类型：发明
国别省市：江西,36