The invention provides a preparation method of Streptococcus lactis type specific antiserum, which comprises the preparation of antigens, the screening of rabbits, the immunization, the harvesting and identification of serum. The invention first uses the inactivated inactivated Streptococcus vaccine to immunize rabbits, and then uses inactivated vaccine and inactivated antigen to strengthen immunity to prepare Streptococcus lactis type specific antiserum. Streptococcus agalactiae type specific antisera to the preparation, compared with non adjuvanted Streptococcus agalactiae antigen, has the advantages of high antibody titer; compared with Freund's adjuvant, has a low price, the advantages of higher safety; compared with live bacteria challenged to strengthen immunity, has the advantages of simple, high safety, preparation of positive serum of rabbits were used at the same time, low cost, with large-scale application prospects outstanding.
【技术实现步骤摘要】
一种无乳链球菌型特异性抗血清的制备方法
本专利技术涉及生物制品
,具体涉及一种无乳链球菌型特异性抗血清的制备方法。
技术介绍
无乳链球菌(S.agalactiae)是引起奶牛乳房炎的主要病原体之一,具有高传染性,常存在于奶牛的皮肤、乳头及乳房内,通过挤乳人员的手或挤乳机械以及蝇类的机械携带而传播,附着在乳腺管壁并将其破坏,引起慢性乳房炎,潜伏期可达数周或数月,不易发现。同时,无乳链球菌还是造成孕妇产褥期脓毒血症和新生儿脑膜炎的一个重要原因。它寄生在产妇生殖道,可致婴儿感染的发生。也可引起产后感染、菌血症、心内膜炎、皮肤和软组织感染及骨髓炎。无乳链球菌以荚膜分型,共有10个血清型(Ⅰa、Ⅰb、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ型),各个血清型之间无交叉保护力。血清型的鉴定对于无乳链球菌性奶牛乳房炎流行病学调查和疫苗的研制至关重要。但目前国内并没有商品化的无乳链球菌型特异性抗血清供应,虽然国外有B组链球菌的阳性参考血清,但多分离自人,且价格昂贵、供货周期期长,远远不能满足需要。荚膜分型血清的制备的关键在于保证荚膜的完整性,否则抗体滴度会显著不同。因此,菌液培养的方法也尤为重要。传统制备分型血清的方法为采用无佐剂法耳静脉免疫家兔制备,其产生的抗体低,不能满足规模化生产的要求;近年来,有报道采用弗氏佐剂免疫家兔制备分型血清,但其价格较高,副反应大,易造成兔子背部出现破溃等副反应,且使用活菌攻毒的方法制备阳性血清,易造成免疫动物发病死亡,且短期多次免疫注射,需要不断制备新鲜的菌液,费时费力。因此,有必要建立一种安全、实用、产生效价高的制备无乳链球菌型特异性抗血清的 ...
【技术保护点】
一种无乳链球菌型特异性抗血清的制备方法,其特征在于包括以下步骤:1)制备无乳链球菌菌液;2)取步骤1)所得的菌液分别制备无乳链球菌灭活疫苗和无乳链球菌灭活抗原;3)取步骤2)所述疫苗和抗原对家兔进行免疫接种;4)从步骤3)免疫接种后的家兔体内收获血清。
【技术特征摘要】
1.一种无乳链球菌型特异性抗血清的制备方法,其特征在于包括以下步骤:1)制备无乳链球菌菌液;2)取步骤1)所得的菌液分别制备无乳链球菌灭活疫苗和无乳链球菌灭活抗原;3)取步骤2)所述疫苗和抗原对家兔进行免疫接种;4)从步骤3)免疫接种后的家兔体内收获血清。2.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于步骤3)所述的家兔是2.0~4.0kg清洁级,日本大耳白兔或新西兰大白兔。3.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于步骤3)所述的免疫接种包括以下步骤:A)基础免疫:取步骤2)制备的无乳链球菌灭活疫苗,每次以2~4ml的剂量皮下多点注射2次,2次的时间间隔为10~15d;B)灭活疫苗强化免疫:步骤A)完成7~10d后,取步骤2)制备的无乳链球菌灭活疫苗皮下和腿部肌肉多点注射2次,第1次剂量为4~6ml,第2次剂量为第1次剂量的1~2倍,2次的时间间隔为5~7d;C)灭活抗原强化免疫:步骤B)完成5~8d后,取步骤2)制备的无乳链球菌灭活抗原皮下注射1~2次,第1次剂量为10~20ml,第2次剂量为第1次剂量的1~2倍。4.根据权利要求3所述的制备方法,其特征在于步骤A)中所述无乳链球菌灭活疫苗中活菌浓度为0.5×1010~1×1010CFU。5.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于步骤4)中所述血清的抗体效价不低于1:320。6.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于步骤1)所述菌液...
【专利技术属性】
技术研发人员:丁旭娜,吕茂杰,杨保收,付旭彬,梁武,
申请(专利权)人:天津瑞普生物技术股份有限公司,
类型:发明
国别省市:天津,12
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