一种鸡新城疫病毒单克隆抗体制备方法技术

本发明专利技术提供了一种鸡新城疫病毒单克隆抗体制备方法，该技术方案利用鸡新城疫病毒制备出鸡新城疫病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株，其所分泌的抗体为只针对鸡新城疫病毒，与其他病毒均不发生反应，从而保证了单抗的特异性。在此基础上，可以利用单抗直接针对鸡新城疫进行治疗，也可以进一步开放相关检测试剂盒，具有较为广泛的应用前景。

A method for preparing monoclonal antibody of Newcastle disease virus

The present invention provides a method for preparing monoclonal antibody against Newcastle disease virus, the technical scheme of Newcastle disease virus were prepared using monoclonal antibody against Newcastle disease virus of hybridoma cell lines, the monoclonal antibody is only for Newcastle disease virus and other viruses have no reaction, so as to ensure the specificity of monoclonal antibody. On this basis, can be treated directly to Newcastle disease using monoclonal antibody, can also further open the relevant test kit, which has widely application prospect.

【技术实现步骤摘要】
一种鸡新城疫病毒单克隆抗体制备方法
本专利技术涉及免疫
，具体涉及一种鸡新城疫病毒单克隆抗体制备方法。
技术介绍
鸡新城疫病毒在分类上是属于副粘病毒科(Paramyxoviridae)副粘病毒属(Paramyxovirus)。成熟的病毒粒子近圆形，多数呈蝌蚪状，直径为120-300nm。具有囊膜，内含有一长螺旋状核衣壳，直径17-18nm，囊膜外有长约8-12nm的糖蛋白(HN和F)纤突。螺旋形核衣壳是由一个与蛋白相联结的单股RNA所形成，具有RNA聚合酶活性，它被一个双层脂质膜所包裹，脂质膜内衬有一层特殊的M蛋白，而脂质膜的外层又被具有纤突的糖蛋白所覆盖，使外形呈花穗状。现有技术中对鸡新城疫病毒的免疫主要依靠疫苗实现，而接种疫苗一方面难以保证完全的防护率，同时也存在着发生不良反应的可能。而现有技术的抗鸡新城疫病毒单克隆抗体又存在着特异性不佳的技术缺陷。
技术实现思路
本专利技术旨在针对现有技术的技术缺陷，提供一种鸡新城疫病毒单克隆抗体制备方法，以解决现有技术中相关方法所制备的单克隆抗体特异性不佳。为实现以上技术目的，本专利技术采用以下技术方案：一种鸡新城疫病毒单克隆抗体制备方法，包括以下步骤：1)取鸡新城疫疫苗免疫小鼠；2)取免疫后小鼠的脾脏细胞与造血干细胞按5:1的细胞量比混合在一支融合管中，1000rpm离心10min，混匀，在37℃水浴中45s内加入1mLPEG到融合管中，混匀，而后在90s内滴加30mL的DMEM培养基，用60mLHAT培养基悬浮沉淀细胞，再加入腹腔巨噬细胞，置37℃5％CO2培养箱内培养；3)取小鼠，以0.5mL/只的剂量腹腔注射灭菌液体石蜡，1周后以1×106CFU/只的剂量对小鼠腹腔注射步骤3)得到的杂交瘤细胞，而后从小鼠腹腔采集腹水，离心取上清，即得到鸡新城疫病毒单克隆抗体。2、根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤2)中所述PEG的温度是37℃。3、根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤2)中所述DMEM培养基的温度是37℃。本专利技术技术方案利用鸡新城疫病毒制备出鸡新城疫病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株，其所分泌的抗体为只针对鸡新城疫病毒，与其他病毒均不发生反应，从而保证了单抗的特异性。与此同时，本专利技术利用该株单克隆抗体的特性，建立ELISA方法和免疫胶体金的方法，其特异性和敏感性好。可用于临床检测。此外，本专利技术制备的单抗效价高、特异性较好，尤其适用于进一步制备鸡新城疫病毒抗原诊断试剂盒或鸡新城疫病毒抗原诊断胶体金试纸。本专利技术以创新性的技术改进实现了突出的技术效果，同时成本较低、易于实现，因此具有突出的推广前景。具体实施方式以下将对本专利技术的具体实施方式进行详细描述。为了避免过多不必要的细节，在以下实施例中对属于公知的结构或功能将不进行详细描述。实施例1一种鸡新城疫病毒单克隆抗体制备方法，包括以下步骤：1)取鸡新城疫疫苗免疫小鼠；2)取免疫后小鼠的脾脏细胞与造血干细胞按5:1的细胞量比混合在一支融合管中，1000rpm离心10min，混匀，在37℃水浴中45s内加入1mLPEG到融合管中，混匀，而后在90s内滴加30mL的DMEM培养基，用60mLHAT培养基悬浮沉淀细胞，再加入腹腔巨噬细胞，置37℃5％CO2培养箱内培养；3)取小鼠，以0.5mL/只的剂量腹腔注射灭菌液体石蜡，1周后以1×106CFU/只的剂量对小鼠腹腔注射步骤3)得到的杂交瘤细胞，而后从小鼠腹腔采集腹水，离心取上清，即得到鸡新城疫病毒单克隆抗体。在以上技术方案的基础上，满足以下条件：步骤2)中所述PEG的温度是37℃。步骤2)中所述DMEM培养基的温度是37℃。实施例2一种鸡新城疫病毒单克隆抗体制备方法，包括以下步骤：1)取鸡新城疫疫苗免疫小鼠；2)取免疫后小鼠的脾脏细胞与造血干细胞按5:1的细胞量比混合在一支融合管中，1000rpm离心10min，混匀，在37℃水浴中45s内加入1mLPEG到融合管中，混匀，而后在90s内滴加30mL的DMEM培养基，用60mLHAT培养基悬浮沉淀细胞，再加入腹腔巨噬细胞，置37℃5％CO2培养箱内培养；3)取小鼠，以0.5mL/只的剂量腹腔注射灭菌液体石蜡，1周后以1×106CFU/只的剂量对小鼠腹腔注射步骤3)得到的杂交瘤细胞，而后从小鼠腹腔采集腹水，离心取上清，即得到鸡新城疫病毒单克隆抗体。以上对本专利技术的实施例进行了详细说明，但所述内容仅为本专利技术的较佳实施例，并不用以限制本专利技术。凡在本专利技术的申请范围内所做的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本专利技术的保护范围之内。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种鸡新城疫病毒单克隆抗体制备方法，其特征在于包括以下步骤：1)取鸡新城疫疫苗免疫小鼠；2)取免疫后小鼠的脾脏细胞与造血干细胞按5:1的细胞量比混合在一支融合管中，1000rpm离心10min，混匀，在37℃水浴中45s内加入1mL PEG到融合管中，混匀，而后在90s内滴加30mL的DMEM培养基，用60mL HAT培养基悬浮沉淀细胞，再加入腹腔巨噬细胞，置37℃5％CO

【技术特征摘要】
1.一种鸡新城疫病毒单克隆抗体制备方法，其特征在于包括以下步骤：1)取鸡新城疫疫苗免疫小鼠；2)取免疫后小鼠的脾脏细胞与造血干细胞按5:1的细胞量比混合在一支融合管中，1000rpm离心10min，混匀，在37℃水浴中45s内加入1mLPEG到融合管中，混匀，而后在90s内滴加30mL的DMEM培养基，用60mLHAT培养基悬浮沉淀细胞，再加入腹腔巨噬细胞，置37℃5％CO2...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘鼎阔，王立红，张凤洪，张俊霞，
申请(专利权)人：鼎正生物药业天津有限公司，
类型：发明
国别省市：天津,12