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一种快速生产除虫菊酯的方法技术

技术编号:15498904 阅读:89 留言:0更新日期:2017-06-03 20:32
本发明专利技术公开了一种快速生产除虫菊酯的方法,直接利用除虫菊花药培养出愈伤组织,再从愈伤组织中结合涡旋振荡和超声萃取提取出除虫菊酯,本发明专利技术培养速度快,萃取时间短,可快速、高效地生产除虫菊酯。

Method for rapidly producing Pyrethroid

The invention discloses a method for the rapid production of pyrethrum, the direct use of pyrethrum medicine to cultivate callus from callus with vortex oscillation and ultrasonic extraction to extract the pyrethrins, the training speed, short extraction time, can produce rapid and efficient pyrethroid.

【技术实现步骤摘要】
一种快速生产除虫菊酯的方法
本专利技术涉及农药
,特别是一种快速生产除虫菊酯的方法。
技术介绍
除虫菊(PyrethrumcinerariifoliumTrev.)原产欧洲,对它的研究和利用已有近百年历史(Casida,1973),本世纪初除虫菊在世界各地广泛栽培,40年代起曾在我国华东、新疆、贵州和云南等省区引种,近期出现品种退化,直接影响干花的产量和质量。在50年代至70年代世界除虫菊干花的主产国一度受到人工合成杀虫剂的冲击,80年代以来随着人们对环境保护意识的增强,除虫菊的应用研究又重新得到亲睐,利用除虫菊的头状花序(简称花头)经抽提和加工后获得的除虫菊酯,因除虫菊酯对人体(包括哺乳动物)无毒、无积累,而使得除虫菊干花再次赢得市场,但近期世界原除虫菊干花生产国,因受多种因素干扰产量直线下降(Casida,1973),重新寻找新的生产基地已势在必行。除虫菊一般以种子、扦插繁殖为主,但目前品种分化严重,含量降低,同时如果植株受根结线虫及病毒的侵染,还会成为带毒植株,不能使用,综合上述原因,目前依靠除虫菊干花抽提和加工获得的除虫菊酯的方法已不能满足生产需要。除虫菊酯的提取方法,主要有超临界萃取、微波萃取,沙氏提取法和超声波法等。超临界萃取和微波萃取现已成功广泛应用于工业除虫菊酯的提取,如云南红河森菊生物有限公司利用超临界CO2萃取,其产品纯度高达75%。除虫菊花在超声波法萃取过程中,使细胞内部的压力增大,当内部压力超过细胞壁可承受的能力时,细胞壁破裂,于是位于除虫菊花细胞内的除虫菊酯Ⅰ、除虫菊酯Ⅱ、瓜叶菊酯Ⅰ、瓜叶菊酯Ⅱ、茉酮菊酯Ⅰ、茉酮菊酯Ⅱ的有效成分自由流出,进入萃取溶剂而被溶解,过滤去残渣,即可达到从除虫菊花内萃取除虫菊酯的目的。用超声波协助萃取技术应用于天然除虫菊花中提取杀虫活性成分,具有快速安全、节省能源、降低劳力消耗、降低溶剂用量的优点,因此,开发一种结合超声波萃取技术快速生产除虫菊酯的方法是极有必要的。
技术实现思路
本专利技术提供了快速生产除虫菊酯的方法,直接利用除虫菊花蕾培养出愈伤组织,再从愈伤组织中提取出除虫菊酯,该方法可快速、高效地获得除虫菊酯,且除虫菊酯的品质少受种植环境和病虫害的影响。为实现上述目的,本专利技术的技术方案为:一种快速生产除虫菊酯的方法,包括以下步骤:(1)选无性系个体为母株,取其花蕾作外植体,当花蕾长至长度为0.4~0.8cm时,将花蕾用70~80%的乙醇水溶液浸泡20~60s,取出再放入0.1~0.3wt%的消毒水浸泡15min,再用无菌水冲洗3~5次;(2)在无菌条件下,从花蕾中剥取花药接种于诱导培养基中诱导愈伤组织,先在20~25℃暗培养13~16d,然后在20~28℃下进行光照培养13~16d,光照14~16h/d,光强2000~3000lx;(3)待愈伤组织长到花药重量的50~100倍时,取出愈伤组织捣碎,加入正己烷作为提取剂,涡旋振荡40~120s,静置25~60min,超声萃取10~30min,离心,取上清液,加入2~3%的硫酸钠水溶液,振摇,收集上层有机相,经吸水的干燥剂干燥后,浓缩,浓缩液加入PSA和C18涡旋振荡,离心,取上清液,获得除虫菊酯产品。进一步的,所述步骤(1)中,消毒水为升汞水溶液。进一步的,所述步骤(2)中,所述诱导培养基为:MS+2,4-D1.0mg/L+BA1.0mg/L+IAA0.5mg/L+NAA0.25mg/L+蔗糖50g/L+琼脂7g/L,pH值为5.4~5.6。进一步的,所述步骤(2)中,花药接种于诱导培养基中诱导愈伤组织,先在25℃暗培养14d,然后在28℃下进行光照培养14d,光照16h/d,光强2000lx。进一步的,所述步骤(3)中,所述吸水的干燥剂为无水硫酸钠。进一步的,所述步骤(3)中,所述愈伤组织、PSA和C18的质量比为100:2~5:2~5。以上所述的快速生产除虫菊酯的方法,具有以下优点:(1)本专利技术以长度为0.4~0.8cm的除虫菊花蕾为原料,取其花药培养出愈伤组织,使得最终获得的除虫菊酯少受除虫菊生长过程中种植环境和病虫害的影响,且除虫菊花蕾含有较多地除虫菊酯这一有效成分,通过其花药的培养获得除虫菊酯,可有效保证除虫菊酯的产量。(2)本专利技术选用适宜的培养基以及培养条件来诱导愈伤组织,使得愈伤组织生长速度快,加快除虫菊酯的生产速度。(3)本专利技术以正己烷作为提取剂,通过涡旋振荡、超声萃取,快速获得了目标产物除虫菊酯,与其他工艺相比,本专利技术萃取工艺时间短,避免了其他工艺长时间萃取,引起除虫菊酯杀虫活性的分解,有利于除虫菊酯的稳定获取。(4)本专利技术培养速度快,萃取时间短,可快速、高效地生产除虫菊酯,获得的除虫菊酯纯度达到95%以上,且本方法只需一种溶剂进行萃取,萃取溶剂用量少,有利于降低生产成本和保护环境。具体实施方式以下将结合具体的实施例对本专利技术作进一步说明,但本专利技术的保护范围不限于以下实施例:一种快速生产除虫菊酯的方法,包括以下步骤:(1)选无性系个体为母株,取其花蕾作外植体,当花蕾长至长度为0.4~0.8cm时,即花药处于单核中后期时,将花蕾用75%的乙醇水溶液浸泡30s,取出再放入0.1wt%的升汞水溶液15min,再用无菌水冲洗4次;(2)在无菌条件下,从花蕾中剥取1g花药接种于诱导培养基中诱导愈伤组织,诱导培养基为:MS+2,4-D1.0mg/L+BA1.0mg/L+IAA0.5mg/L+NAA0.25mg/L+蔗糖50g/L+琼脂7g/L,常规高压灭菌,pH值为5.4~5.6,先在25℃下暗培养14d,然后在28℃下进行光照培养14d,光照16h/d,光强2000lx;(3)待愈伤组织长到7.5g时,称取5g愈伤组织置于150ml具塞三角瓶中,加入30ml正己烷作为提取剂,涡旋振荡60s后,静置30min,超声萃取15min,5000r/min离心5min,取上清液,将上清液转移至125ml分液漏斗中,向分液漏斗中加入50ml2%硫酸钠水溶液并振摇200次,收集上层有机相,经无水硫酸钠干燥后,旋转蒸发浓缩至2ml,将浓缩液转移到10ml离心管中,加入各PSA和C18各150mg涡旋振荡1min,5000r/min离心2min,取上清液,获得除虫菊酯产品。上述获得的除虫菊酯的检测方法:色谱柱为DB-5MS(30m×0.32mm×0.25μm),检测器为电子捕获检测器ECD,柱前压为50kPa,载气为99.999%高纯氮气,流速40ml/min,进样口和检测器的温度分别为270℃和320℃,一级升温程序:初始温度210℃,保持1min,以10℃/min升至285℃,保持285℃温度10min;进样方式采用恒压方式,不分流进样,进样量为1μl。经检测,获得的除虫菊酯纯度为95%。本文档来自技高网
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【技术保护点】
一种快速生产除虫菊酯的方法,其特征在于包括以下步骤:(1)选无性系个体为母株,取其花蕾作外植体,当花蕾长至长度为0.4~0.8 cm时,将花蕾用70~80%的乙醇水溶液浸泡20~60s,取出再放入0.1~0.3wt%的消毒水浸泡15min,再用无菌水冲洗3~5次;(2)在无菌条件下,从花蕾中剥取花药接种于诱导培养基中诱导愈伤组织,先在20~25 ℃暗培养13~16 d,然后在20~28℃下进行光照培养13~16d,光照14 ~16h/d,光强2000 ~3000lx;(3)待愈伤组织长到花药重量的50~100倍时,取出愈伤组织捣碎,加入正己烷作为提取剂,涡旋振荡40~120s,静置25~60min,超声萃取10~30 min,离心,取上清液,加入2~3%的硫酸钠水溶液,振摇,收集上层有机相,经吸水的干燥剂干燥后,浓缩,浓缩液加入PSA和C

【技术特征摘要】
1.一种快速生产除虫菊酯的方法,其特征在于包括以下步骤:(1)选无性系个体为母株,取其花蕾作外植体,当花蕾长至长度为0.4~0.8cm时,将花蕾用70~80%的乙醇水溶液浸泡20~60s,取出再放入0.1~0.3wt%的消毒水浸泡15min,再用无菌水冲洗3~5次;(2)在无菌条件下,从花蕾中剥取花药接种于诱导培养基中诱导愈伤组织,先在20~25℃暗培养13~16d,然后在20~28℃下进行光照培养13~16d,光照14~16h/d,光强2000~3000lx;(3)待愈伤组织长到花药重量的50~100倍时,取出愈伤组织捣碎,加入正己烷作为提取剂,涡旋振荡40~120s,静置25~60min,超声萃取10~30min,离心,取上清液,加入2~3%的硫酸钠水溶液,振摇,收集上层有机相,经吸水的干燥剂干燥后,浓缩,浓缩液加入PSA和C18涡旋振荡,离心,取上清液,获得除虫菊酯产品。2.根据权利要求1所述的快速生产除虫菊酯的方法,其特征在于:所述步...

【专利技术属性】
技术研发人员:龙明华巫桂芬唐璇李朋欣张会敏
申请(专利权)人:广西大学
类型:发明
国别省市:广西,45

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