重组的人源TNFα在制备药物中的用途制造技术

本发明专利技术公开了一种重组的人源TNFα在制备药物中的用途。本发明专利技术发现重组的人源TNFα能够激活猪内皮细胞中NF‑κB和MAPKs信号通路、上调猪内皮细胞中粘附分子、IL‑6和组织因子表达以及诱导猪内皮细胞中趋化因子和SLA‑I表达，因此重组的人源TNFα可以作为实现这些功能的药物的活性成分，用于制备药物。

Use of recombinant human source TNF alpha in the preparation of drugs

The present invention discloses the use of recombinant human source TNF alpha in preparing medicine. The present invention found human TNF recombinant alpha can activate the expression of tissue factor and 6 porcine endothelial cells in NF kappa B and MAPKs signaling pathways, upregulation of porcine endothelial cells adhesion molecules, IL and induced by porcine endothelial cells and SLA chemokine I expression, therefore TNF can be used as a source of recombinant alpha activity the drug composition of these functions, for the preparation of drugs.

【技术实现步骤摘要】
重组的人源TNFα在制备药物中的用途
本专利技术涉及细胞因子的用途
，尤其涉及重组的人源TNFα在制备药物中的用途。
技术介绍
器官移植是治疗器官功能衰竭的一种有效治疗方案，但是人类器官供体的缺少是其主要限制。由于病理学、解剖学、经济学和伦理学方面的因素，猪被认为是解决器官缺乏的一个最适宜的供体来源。但是，免疫排斥反应是异种移植的主要障碍。促炎细胞因子在细胞免疫反应中起重要的作用，所以我们推测一些促炎细胞因子在异种移植中有重要的病理学作用。然而，这些细胞因子在异种移植中的作用仍然不清楚。在炎症反应、凝血反应和细胞存活或者死亡中，内皮细胞具有重要调节作用。内皮细胞功能性紊乱与多种疾病有关，例如，肿瘤转移、动脉硬化和持久的慢性炎症。由于内皮细胞是被免疫细胞最先识别的，所以它们是最重要的一道防御线。在异种移植中，它们在炎症反应和凝血反应中具有重要作用的细胞。同时它们在同种和异种移植损伤中具有关键性的作用，作为异种移植研究领域中的相关研究的主要靶细胞。在异种移植的反应过程中，会产生许多促炎细胞因子。在猪-人的器官移植过程中，人源细胞因子是否能够刺激来自猪供体的细胞或者器官是一个需要弄清楚的问题。在各种异种移植的模型中，包括猪－狒狒的模型中，其他一些重要的细胞因子，例如白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素(IL-17)和白细胞介素-1β(IL-1β)的表达量也有所增加。这些细胞因子的生物学功能和它们的促炎反应在各种生理学中作用也都已经报到了。可是这些促炎细胞因子在异种移植中的效果仍然不清楚。
技术实现思路
为了弄清上述促炎细胞因子在异种移植中的效果，我们用这些细胞因子去刺激猪主动脉内皮细胞(PAEC)。我们检测了一些信号通路的激活情况和下游基因的表达，例如粘附分子(内皮细胞选择素(E-selectin)、血管细胞粘附分子-1(VCAM-1)和细胞间黏附分子-1(ICAM-1))，趋化因子(白细胞介素-8(IL-8)和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1))，促炎因子(IL-6)和促凝血反应有关的基因(组织因子)。并且对猪白细胞抗原I(SLA-I)和猪白细胞抗原II(SLA-IIDR)也进行检测。专利技术人发现人源的细胞因子IL-6、IL-17、IL-1β和TNFα以不同的通路激活猪内皮细胞。在猪主动脉内皮细胞，人源的细胞因子IL-6、IL-17、IL-1β和TNFα与来源于猪的细胞因子IL-6、IL-17、IL-1β和TNFα作用效果一致。人源的细胞因子rhIL-17、rhIL-1β和rhTNFα可以诱导粘附分子(E-selectin、VCAM-1和ICAM-1)、趋化因子(IL-8和MCP-1)、促炎因子(IL-6)和促凝血反应有关的基因(组织因子)的表达，而人源的细胞因子rhIL-6可以增加趋化因子MCP-1和促凝血因子(组织因子)的表达。人源的细胞因子rhIL-1β和rhTNFα可以上调表达猪白细胞抗原I(SLA-I)而人源的细胞因子rhIL-17或rhIL-6都不能。虽然人源的细胞因子rhIL-17不能使E-selectin、VCAM-1、ICAM-1、IL-8、MCP-1、IL-6和组织因子的表达量增加很多，但是它与人源的细胞因子rhTNFα的协同作用下，显著增加E-selectin、IL-6和IL-8的表达量。另外，在猪主动脉内皮细胞中，托珠单抗(tocilizumab)不能阻止由人源的IL-6激活的STAT3信号通路。专利技术人认为人源的细胞因子IL-6、IL-17、IL-1β和TNFα在异种移植中具有重要的病理学作用，能够成为潜在的治疗靶点。并且人源的细胞因子IL-6、IL-17、IL-1β和TNFα可以作为激活相关信号通路、诱导或上调相关基因表达的活性分子。进而，这些人源的细胞因子可以作为制备相关药物的活性成分。相关药物可以是包括人源的细胞因子IL-6、IL-17、IL-1β或TNFα作为活性成分，以及任选地药物载体——例如水等溶剂的药物组合物。基于以上发现，本专利技术提供一种重组的人源TNFα在制备药物中的用途。根据本专利技术的第一方面，本专利技术提供一种重组的人源TNFα在制备激活猪内皮细胞中NF-κB和MAPKs信号通路的药物中的用途。根据本专利技术的第二方面，本专利技术提供一种重组的人源TNFα在制备上调猪内皮细胞中粘附分子表达的药物中的用途。进一步地，上述粘附分子包括内皮细胞选择素(E-selectin)、VCAM-1和ICAM-1。根据本专利技术的第三方面，本专利技术提供一种重组的人源TNFα在制备上调猪内皮细胞中IL-6表达的药物中的用途。根据本专利技术的第四方面，本专利技术提供一种重组的人源TNFα在制备诱导猪内皮细胞中趋化因子表达的药物中的用途。进一步地，上述趋化因子是IL-8。进一步地，上述趋化因子是单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)。根据本专利技术的第五方面，本专利技术提供一种重组的人源TNFα在制备上调猪内皮细胞中组织因子表达的药物中的用途。根据本专利技术的第六方面，本专利技术提供一种重组的人源TNFα在制备诱导猪内皮细胞中SLA-I表达的药物中的用途。进一步地，上述猪内皮细胞是猪主动脉内皮细胞。本专利技术发现重组的人源TNFα能够激活猪内皮细胞中NF-κB和MAPKs信号通路、上调猪内皮细胞中粘附分子、IL-6和组织因子表达以及诱导猪内皮细胞中趋化因子和SLA-I表达，因此重组的人源TNFα可以作为实现这些功能的药物的活性成分。附图说明图1显示在PAEC中，IL-17、IL-1β和TNFα激活NF-κB和MAPK，而IL-6激活STAT3。(A)将PAEC暴露于rpIL-6(20ng/ml)或rhIL-6(20ng/ml)(指定的时间)，并将HUVEC暴露于rhIL-6(20ng/ml)(指定的时间)。裂解物通过针对p-STAT3、STAT3、p-AKT和肌动蛋白的抗体进行免疫印迹分析。p-STAT3和p-AKT的定量分析显示在右侧。(B)将PAEC暴露于rpIFNγ(40ng/ml)或rhIFNγ(40ng/ml)，将HUVEC暴露于rhIFNγ(40ng/ml)。裂解物通过针对p-STAT1、STAT1和肌动蛋白的抗体进行免疫印迹分析。p-STAT1的定量分析显示在右侧。(C-E)将PAEC暴露于rpIL-17(100ng/ml)，rhIL-17(100ng/ml)(C)，rpIL-1β(20ng/ml)，rhIL-1β(20ng/ml)(D)，rpTNFα(100ng/ml)或rhTNFα(20ng/ml)(E)，HUVEC暴露于rhIL-17(100ng/ml)(C)，rhIL-1β(20ng/ml)(D)或rhTNFα(20ng/ml)(E)。通过用所示抗体免疫印迹分析裂解物。p-P65、p-IκBα、p-P38和p-JNK的定量分析显示在右侧。数据代表至少三个独立实验(平均值±SEM)。通过Student'st检验，*p<0.05,**p<0.01,***p<0.001。图2显示在PAEC中，IL-17、IL-1β和TNFα增加粘附分子和促炎细胞因子IL-6的表达。PAEC不作处理或者使用rpIL-6(20ng/ml)或rhIL-6(20ng/ml)(A)，rpIFNγ(40ng/ml)，r本文档来自技高网...

【技术保护点】
重组的人源TNFα在制备激活猪内皮细胞中NF‑κB和MAPKs信号通路的药物中的用途。

【技术特征摘要】
1.重组的人源TNFα在制备激活猪内皮细胞中NF-κB和MAPKs信号通路的药物中的用途。2.重组的人源TNFα在制备上调猪内皮细胞中粘附分子表达的药物中的用途。3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于，所述粘附分子包括内皮细胞选择素、血管细胞粘附分子-1和细胞间黏附分子-1。4.重组的人源TNFα在制备上调猪内皮细胞中IL-6表达的药物中的用途。5.重组的人源TNFα在制备诱导猪内皮细胞中趋化因...

【专利技术属性】
技术研发人员：牟丽莎，蔡志明，高汉超，刘璐，陈鹏飞，徐佳，韦玲，
申请(专利权)人：深圳市第二人民医院，
类型：发明
国别省市：广东,44