一种苹果酵素及其制备方法技术

一种苹果酵素，以苹果为主要原料，经榨汁、过滤后与纯净水混匀，所得原料混合物中再加入为原料混合物总重量3%的葡萄糖，然后调pH值为6.0‑7.0，灭菌，得到的发酵原料液中接种毕赤酵母亚种

Apple enzyme and preparation method thereof

An apple to ferment apple as main raw material, the juice, filtered and purified water mix, then add the mixture of raw materials as raw material mixture of 3% of the total weight of glucose, and then adjust the pH value of 6 7, sterilization, fermentation liquid obtained by inoculating yeast Pichia subspecies

【技术实现步骤摘要】
一种苹果酵素及其制备方法
本专利技术涉及一种苹果酵素及其制备方法，属于生物工程

技术介绍
根据中国生物发酵产业协会的定义，酵素是指以果蔬或其他动、植物等为原料，采用自然或人工接种微生物发酵工艺，后经提取所制得的具有某些特定功能的发酵制品。酵素不仅保存了发酵原料中原有的营养物质，如多酚类、黄酮类、花青素等，而且通过有益菌的发酵代谢产生了一些新的生物活性成分，如有机酸，氨基酸等。与发酵前相比，微生物的转化使得这些小分子物质更易于人体吸收。近十年，微生物酵素功能性制品产业在全球开始大规模兴起，产业规模不断扩大。日本、台湾等地区开始采用纯种发酵进行生产。纯种发酵是在成分单一的发酵基质中，仅接入一种或几种微生物，通过对该微生物的培养，得到纯度较高的单一性产物。不同于自然发酵，其发酵时间短，易控制，十分适合酵素的产业化生产。但是为使发酵顺利进行，要求人工扩大的菌种不得被污染。因而对发酵设备和环境要求较高，要有严格的灭菌措施和空气净化系统。发酵用菌种也必须是经严格研究后筛选出的最适合生产的菌种。苹果酵素不仅保持了苹果原初营养和风味，还将赋予其益生菌所产生的抗氧化活性，为消费者提供新的功能性产品。但目前的水果酵素制作主要存在：发酵时间长，影响水果原料稳定性；发酵菌种性能和稳定性差，影响酵素中天然的活性物质等问题；发酵菌种酒精产量较高，不适合应用于饮料和化妆品领域。相关文献[1]勾明玥，刘梁，张春枝.采用DPPH法测定26种植物的抗氧化活性[J].食品与发酵工业，2010（03）：148-150.[2]孙海彦，刘恩世，赵平娟，黎娟华等.气相色谱法和蒸馏-酒精计法测定木薯发酵液中酒精含量的比较[J].酿酒科技，2012（11）：105-107.
技术实现思路
本专利技术的目的之一是为了解决现有水果酵素生产过程中发酵时间过长影响酵素活性，酒精产量高，菌种性能不稳定等问题而提供一种苹果酵素的制备方法，该苹果酵素的制备方法具有发酵时间短，最终所得的苹果酵素抗氧化活性高，酒精含量低，适合应用于饮料和化妆品领域。本专利技术的目的之二是提供上述制备方法所得的苹果酵素。本专利技术的技术方案一种苹果酵素，即以新鲜成熟度好的苹果为主材料，用毕赤酵母PichiakudriavzeviiPKD3001进行发酵制备而成，其制备过程具体包括如下步骤：（1）、菌种的选取所用的菌种，是2016年9月29日于中国典型培养物保藏中心保藏的，其保藏编号为CCTCCNO:M2016537的毕赤酵母亚种PichiakudriavzeviiPKD3001冷冻干燥管，保藏机构地址：武汉市武昌珞珈山中国典型培养物保藏中心(武汉大学)，邮编：430072；（2）、发酵原料液的制备将新鲜、成熟度好、天然酵素含量高的陕西红富士苹果用自来水清洗干净后经吹干、去核、用榨汁机进行榨汁、用100目纱布过滤得到纯苹果汁，然后与纯净水混合，得到原料混合物，其中纯苹果汁与纯净水的比例，按体积百分比计算，纯苹果汁：纯净水为10%:90%；在上述所得的原料混合物中再加入为原料混合物总重量3%的葡萄糖，经1mol/L食用碳酸钠水溶液调pH值为6.0-7.0，然后于105℃灭菌10min得到发酵原料液；（3）、菌种活化用接种环取无菌水溶解的冷冻干燥管保存的毕赤酵母亚种PichiakudriavzeviiPKD3001菌种一环在马铃薯葡萄糖琼脂培养基平板上划线，在培养箱中30℃培养24h，得到平板活化菌种；（4）、种子培养用接种环取步骤（3）所得的平板活化菌种一环接入装有50mL麦芽浸粉肉汤液体培养基的250mL规格的三角瓶中，准备若干份，置于温度30℃的培养箱中，然后控制转速为120rpm，恒温培养36h，得到培养液；将上述所得的培养液控制转速为5000r/min进行离心20min,离心所得的沉淀用0.01mol/L无菌磷酸缓冲盐溶液清洗3次，然后在清洗后的沉淀中加入50mL0.01mol/L无菌磷酸缓冲盐溶液经500rpm下漩涡震荡重悬菌体，得到种子液，所得的种子液中，每毫升种子液中含毕赤酵母亚种PichiakudriavzeviiPKD3001为1×108-1×1010cfu；（5）、发酵培养在步骤（2）所得的发酵原料液中，按1×105cfu/mL接种量将步骤（4）得到的种子液接入步骤（2）所得的发酵原料液中，然后控制转速为120r/min，温度为25-35℃进行发酵24-72h，得到发酵液；（6）、综合调配在步骤（5）所得的发酵液中，按每升发酵液计算，在发酵液中依次添加蔗糖40-80g，柠檬酸5-10g，稳定剂羧甲基纤维钠2-4g，混匀后于121℃杀菌20min，然后罐装，即得苹果酵素成品。本专利技术的有益效果本专利技术的一种苹果酵素，由于采用的原料苹果是纯天然的，利用低温杀菌、严格控制发酵温度，有效的降低了酵素营养成分的损失，最大限度保留了酵素活性。进一步，本专利技术的一种苹果酵素，由于制备过程所用的发酵时间控制在80h以内，避免了苹果本身含有的风味物质和酵素物质的损失。进一步，本专利技术的一种苹果酵素，是采用毕赤酵母PichiakudriavzeviiPKD3001进行发酵而成，所得苹果酵素与自然发酵所得的苹果酵素相比，其抗氧化活性指标提高75%，酒精产量低于1%，因此可广泛应用于饮料和化妆品领域。附图说明图1、实施例1，2，3，4通过添加毕赤酵母亚种PichiakudriavzeviiPKD3001进行发酵所得的苹果酵素样品和对照实施例1按自然发酵的方法所得的苹果酵素样品中的酒精度柱状图；图2、实施例1，2，3，4通过添加毕赤酵母亚种PichiakudriavzeviiPKD3001进行发酵所得的苹果酵素样品和对照实施例1按自然发酵的方法所得的苹果酵素样品的清除率柱状图。具体实施方式下面通过具体实施例对本专利技术进一步阐述，但并不限制本专利技术。以下各实施例中所用的原材料苹果购自上海联华超市。以下各实施例中所用的马铃薯葡萄糖琼脂培养基和麦芽浸粉肉汤液体培养基是本
的技术人员熟知的，均购自北京陆桥技术股份有限公司。以下各实施例中所用的0.01mol/L无菌磷酸缓冲盐溶液是本
的技术人员熟知的，具体配制方法为：称取8gNaCl、0.2gKCl、1.44gNa2HPO4和0.24gKH2PO4，溶于800mL蒸馏水中，用盐酸调节溶液的pH值至7.4，最后用蒸馏水定容至1L，121℃灭菌20min。本专利技术各实施例中所用的毕赤酵母亚种PichiakudriavzeviiPKD3001冷冻干燥管，保藏编号CCTCCNO:M2016537，是本专利技术人于2016年9月29日保存于中国典型培养物保藏中心保藏，保藏机构地址：武汉市武昌珞珈山中国典型培养物保藏中心(武汉大学)，邮编：430072。实施例1一种苹果酵素，即以新鲜成熟度好的苹果为主材料，应用毕赤酵母PichiakudriavzeviiPKD3001进行发酵制备而成，其制备过程具体包括如下步骤：（1）、菌种的选取所用的菌种，是毕赤酵母亚种PichiakudriavzeviiPKD3001冷冻干燥管；（2）、发酵原料液的制备将新鲜、成熟度好、天然酵素含量高的陕西红富士苹果用自来水清洗干净后经吹干、去核、用榨汁机进行榨汁、用100目纱布过滤得到纯苹果汁，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种苹果酵素的制备方法，其特征在于该制备方法，即以新鲜成熟度好的苹果为主材料，用毕赤酵母亚种

【技术特征摘要】
1.一种苹果酵素的制备方法，其特征在于该制备方法，即以新鲜成熟度好的苹果为主材料，用毕赤酵母亚种PichiakudriavzeviiPKD3001进行发酵制备而成，其制备过程具体包括如下步骤：（1）、菌种的选取所用的菌种，是2016年9月29日于中国典型培养物保藏中心保藏的，其保藏编号为CCTCCNO:M2016537的毕赤酵母亚种PichiakudriavzeviiPKD3001冷冻干燥管；（2）、发酵原料液的制备将新鲜、成熟度好、天然酵素含量高的苹果用自来水清洗干净后经吹干、去核、用榨汁机进行榨汁、用100目纱布过滤得到纯苹果汁，然后与纯净水混合，得到原料混合物，其中纯苹果汁与纯净水的比例，按体积百分比计算，纯苹果汁：纯净水为10%:90%；在上述所得的原料混合物中再加入原料混合物总重量3%的葡萄糖，经1mol/L食用碳酸钠水溶液调pH值为6.0-7.0，然后于105℃灭菌10min得到发酵原料液；（3）、菌种活化用接种环取无菌水溶解的冷冻干燥管保存的毕赤酵母亚种PichiakudriavzeviiPKD3001菌种一环在马铃薯葡萄糖琼脂培养基平板上划线，在培养箱中30℃培养24h，得到平板活化菌种；（4）、种子培养用接种环取步骤（3）所得的平板活化菌种一环接入装有50mL麦芽浸粉肉汤液体培养基的250mL规格的三角瓶中，置于温度30℃的培养箱中，然后控制转速为120rpm，恒温培养36h，得到培养液；将上述所得的培养液控制转速为5000r/min进行离心20min,离心所得的沉淀用0.01mol/L无菌磷酸缓冲盐溶液清洗3次，然后在清洗后的沉淀中加入50mL0.01mol/L无菌磷酸缓冲盐溶液经500rpm下漩涡震荡重悬菌体，得到种子液，所得的种子液中，每毫升种子液中含毕赤酵母亚种PichiakudriavzeviiPKD3001为1×108-1×1010cfu；（5）、发酵培养在步骤（2）所得的发酵原料液中，按1×105cfu/mL接种量将步骤（4）得到的种子液接入步骤（2）所得的发酵原料液中，然后控制转速为120r/min，温度为25-35℃进行发酵24-72h，得到发酵液；（6）、综合调配在步骤（5）所得的发酵液中，按每升发酵液计算，在发酵液中依次添加蔗糖40-80g，柠檬酸5-10g，稳定剂羧甲基纤维钠2-4g，混匀后于121℃杀菌20min，然后罐装，即得苹果酵素成品。2.如权利要求1所述的一种苹果酵素的制备方法，其特征在于步骤（2）发酵原...

【专利技术属性】
技术研发人员：田怀香，申永波，陈臣，于海燕，卢艳青，史雨桦，卢卓彦，
申请(专利权)人：上海应用技术大学，
类型：发明
国别省市：上海,31