一种灵芝三萜的提取方法及灵芝保健品技术

本发明专利技术涉及一种灵芝三萜的提取方法及灵芝保健品，属于天然药物领域。该提取方法包括以下步骤：粉碎灵芝子实体，与纤维素酶、半纤维素酶和木瓜蛋白酶混合后酶解，得酶解物；向酶解物中加入93‑97wt％的乙醇‑水溶液并于75‑85℃条件下回流提取1‑3h，过滤，浓缩滤液得上样物，于D101大孔吸附树脂层析柱中对上样物进行脱盐和洗脱，收集洗脱后的液体，去除有机相，得灵芝三萜。该方法简单、条件温和、易操作且得率高。含有上述灵芝三萜的灵芝保健品，毒副作用小，保健效果好。

Method for extracting ganoderma lucidum three terpene and glossy ganoderma health-care product

The invention relates to a method for extracting ganoderma lucidum three terpene and a glossy ganoderma health-care product, belonging to the field of natural medicine. The extraction method comprises the following steps: crushing Ganoderma Lucidum with cellulase, hemicellulase and papain mixed enzymolysis, enzyme hydrolysis; enzymatic hydrolysis to water ethanol solution into 93 97wt% in and extracting 1 3H to 75 under 85 DEG C filtering, concentrating the filtrate to obtain the sample, on D101 macroporous adsorption and elution were desalted on sample resin column, collecting the eluted liquid, the removal of the organic phase, three triterpenoids of Ganoderma lucidum. The method is simple, mild in condition, easy to operate and high in yield. The Ganoderma lucidum health-care product containing the three terpene of Ganoderma lucidum has the advantages of little toxicity and side effect and good health care effect.

【技术实现步骤摘要】
一种灵芝三萜的提取方法及灵芝保健品
本专利技术涉及天然药物领域，且特别涉及一种灵芝三萜的提取方法及灵芝保健品。
技术介绍
灵芝(Ganodermalucidum)是担子菌纲、多孔菌科、灵芝属(Ganoderma)真菌，常用其子实体，是我国传统的名贵中药材和药用真菌。药理研究表明，灵芝具有调节免疫、抗肿瘤、抗衰老、提高机体耐缺氧能力等活性，其主要功效成分为灵芝三萜和灵芝多糖。灵芝三萜是其中一种主要的成分，具有明显的护肝排毒、抗氧化、抗菌抗炎、抗HIV病毒、抗肿瘤、镇痛、抑制血管紧张素转化酶、抑制胆固醇合成、降低血小板聚集、抑制组胺释放和调节免疫等作用，可以广泛应用于医药和保健品中。由于灵芝三萜存在于灵芝的细胞壁中，灵芝子实体细胞壁成分主要是几丁质，结构复杂、坚硬，且耐酸碱，造成细胞内有效物质的充分吸收受到很大程度上的阻碍。目前，通常采用有机溶剂法提取灵芝三萜，通常需要较长的提取时间并消耗大量的提取溶剂，同时大量有机溶剂的使用会给人体和环境带来不利的影响。另外，由于灵芝子实体结构紧密，活性成分附着在细胞内侧，传统的热水浸提法时间长、耗能高，活性成分提取物得率低。而单纯的使用超声辅助提取或者乙醇回流提取等方法提取的三萜得率也较低；采用超临界CO2萃取所需的设备投入较大、操作难度和生产成本也较高。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种灵芝三萜的提取方法，此提取方法操作简单，易于实现，且灵芝三萜的提取率较高。本专利技术的另一目的在于提供一种灵芝保健品，包括由上述提取方法提取而得的灵芝三萜，该灵芝保健品的保健效果好，且原料为天然产物，毒副作用小。本专利技术解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的：本专利技术提出一种灵芝三萜的提取方法，其包括以下步骤：粉碎灵芝子实体，与纤维素酶、半纤维素酶和木瓜蛋白酶混合后酶解，得酶解物；向酶解物中加入93-97wt％的乙醇-水溶液并于75-85℃条件下回流提取1-3h，过滤，浓缩滤液得上样物，于D101大孔吸附树脂层析柱中对上样物进行脱盐和洗脱，收集洗脱后的液体，去除有机相，得灵芝三萜。本专利技术还提出一种灵芝保健品，包括由上述提取方法提取所得的灵芝三萜。本专利技术较佳实施例的灵芝三萜的提取方法和灵芝保健品的有益效果是：通过对灵芝子实体进行粉碎，增加了原料与酶和提取剂之间的接触面积，提高酶解和提取速度。以纤维素酶、半纤维素酶和木瓜蛋白酶共同作为酶解过程中的酶，不仅利于细胞壁输送、破裂，使细胞内的化合物游离出来，还能水解植物中的蛋白，促使细胞释放更多的三萜物质。以乙醇-水溶液为提取剂，既能保证浸出速度快、浸出物的纯度高、杂质少，而且还能降低成本。回流温度和回流时间分别为75-85℃和1-3h，不仅可避免因回流时间过短或温度过低造成的有效物质溶出率低，回流时间过长或温度过高又会使得植物细胞中的油脂、鞣质等杂质过多的溶出，增大分离纯化的难度等缺陷，还可进一步提高三萜物质的提取率并保持三萜物质的活性最佳。过滤后用D101大孔吸附树脂层析柱对上样物进行脱盐和洗脱，该类型层析柱吸附量高、填料颗粒均匀、机械强度好、不易破碎且残留物少，对有机物选择性好，分离、纯化、除杂的效果佳，故可提高灵芝三萜的纯度。该提取方法简单、条件温和、易操作、成本低、耗时短且得率高。含有上述灵芝三萜的灵芝保健品，毒副作用小，保健效果好。具体实施方式为使本专利技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。下面对本专利技术实施例的灵芝三萜及其提取方法进行具体说明。本专利技术实施例提供的灵芝三萜的提取方法，以灵芝子实体为原料，提取过程中可先对原料进行前处理，即灵芝子实体粉碎，以增加原料与酶和提取剂之间的接触面积，提高酶解和提取速度。粉碎粒度例如可以为30-50目，该粒度范围内原料中的有效成分溶出率较大。原料优选采自新鲜灵芝的子实体，此条件下的灵芝子实体中的有效成分含量最高，有利于提高后续提取物中有效成分的含量。作为优选的，在粉碎步骤之前，还可以对灵芝子实体进行除杂、清洗和干燥等工序。其中除杂和清洗可避免其它杂质对提取效果的干扰，干燥可部分破坏原料的细胞膜和细胞壁，利于提取。其中，干燥的温度例如可以选择为20-45℃，优选为37℃。在此优选条件下，原料中的活性成分可最大程度的保留并不被高温破坏。较佳的，本专利技术实施例采用酶解法对灵芝子实体进行酶解，即利用活性酶的特异性来水解酶所对应的特定物质。因灵芝三萜存在于灵芝的细胞壁中，灵芝子实体细胞壁成分主要是几丁质，结构复杂及坚硬，且耐酸碱，造成细胞内有效物质的充分吸收受到很大程度上的阻碍。近年来，酶工程技术在中草药活性成分的提取中得到显著应用，选用适当的酶作用于中药材料，可以通过酶反应温和地分解细胞壁及细胞间质中的纤维素、半纤维素、果胶质等成分，破坏细胞壁的致密构造，引起细胞壁及细胞间质结构产生局部疏松、膨胀、崩溃等变化，减小细胞壁及细胞间质等传质屏障对有效成分从胞内向提取介质扩散的传质阻力，从而有利于有效成分的溶出。又因纤维素和半纤维素是细胞壁的主要成分，用纤维素酶和半纤维素酶处理，能使其细胞壁疏松、破裂，有利于细胞内的化合物游离出来。此外，蛋白酶能水解植物中的蛋白，促使细胞释放更多的三萜，故本专利技术实施例中优选采用复合酶对原料进行酶解，以在固定时间内对多种物质同时进行酶解，提高酶解效率。其中复合酶例如可以包括纤维素酶、半纤维素酶和木瓜蛋白酶，也可以包括菠萝蛋白酶和果胶酶中的至少一种。具体的，例如可以将粉碎后的灵芝子实体与纤维素酶、半纤维素酶和木瓜蛋白酶混合，并于pH为5-6、温度为36-45℃的条件下酶解1-3h。为了提高酶解效率，本专利技术实施例中优选酶活分别为45000-55000u/g、150000-250000u/g、750000-850000u/g的纤维素酶、半纤维素酶和木瓜蛋白酶。在提高酶解效率的同时为了避免出现酶浪费的现象，优选的，酶解过程中加入的纤维素酶与灵芝子实体的重量比为2-4:100，半纤维素酶与灵芝子实体的重量比为3-5:100，木瓜蛋白酶与灵芝子实体的重量比为2-4:100。此外，因酶解时间过短或酶解温度过低会造成有效物质溶出率低，酶解时间过长或酶解温度过高又会使得植物细胞中的油脂、鞣质等杂质过多的溶出，增大分离纯化的难度，故酶解时间优选为2h，酶解温度优选为37℃。此外，在酶解过程中，还可以对酶解体系进行适当搅拌，以提高有效物质的溶出率。因本专利技术实施例中所用酶的最适pH在5-6范围内，为了调节酶解体系的pH，还可以向该体系中加入磷酸缓冲液进行调节。作为优选的，本专利技术实施例中例如可以采用高温灭酶活方法停止酶解反应，即可以将酶解体系置于85-100℃的水中加热8-15min，较佳的，可以将酶解体系置于90℃的水中加热10min，此条件下，可以使酶解产物的得率最高，避免酶解不充分的情况。为了避免灵芝子实体中脂肪类物质对提取三萜物质的影响，还可以在酶解前对灵芝子实体进行脱脂处理，即于粉碎后的灵芝子实体中加入乙醚或石油醚进行脱脂，脱脂后再与纤维素酶、半纤维素酶和木瓜蛋白酶混合，较佳的，灵芝子实体与乙醚或石油醚的比例为本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种灵芝三萜的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：粉碎灵芝子实体，与纤维素酶、半纤维素酶和木瓜蛋白酶混合后酶解，得酶解物；向所述酶解物中加入93‑97wt％的乙醇‑水溶液并于75‑85℃条件下回流提取1‑3h，过滤，浓缩滤液得上样物，于D101大孔吸附树脂层析柱中对所述上样物进行脱盐和洗脱，收集洗脱后的液体，去除有机相，得灵芝三萜。

【技术特征摘要】
1.一种灵芝三萜的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：粉碎灵芝子实体，与纤维素酶、半纤维素酶和木瓜蛋白酶混合后酶解，得酶解物；向所述酶解物中加入93-97wt％的乙醇-水溶液并于75-85℃条件下回流提取1-3h，过滤，浓缩滤液得上样物，于D101大孔吸附树脂层析柱中对所述上样物进行脱盐和洗脱，收集洗脱后的液体，去除有机相，得灵芝三萜。2.根据权利要求1所述的灵芝三萜的提取方法，其特征在于，酶解过程在pH为5-6、温度为36-45℃的条件下进行。3.根据权利要求1所述的灵芝三萜的提取方法，其特征在于，洗脱所用的洗脱剂为94-96wt％的乙醇-水溶液，所述洗脱剂与所述上样物的比例为400-1000mL:1g。4.根据权利要求3所述的灵芝三萜的提取方法，其特征在于，所述洗脱剂的流速为0.5-0.8mL/min。5.根据权利要求1所述的灵芝三萜的提取方法，其特征在于，所述纤维素酶的酶活为45000-55000u/g...

【专利技术属性】
技术研发人员：李凤伟，余晓红，李锋，薛锋，李雨珊，林欣文，魏天祥，
申请(专利权)人：盐城工学院，
类型：发明
国别省市：江苏,32