球孢白僵菌在玉米苗期的定殖方法及其应用技术

本发明专利技术涉及微生物定殖技术领域，具体而言，涉及一种球孢白僵菌在玉米苗期的定殖方法及其应用，该方法包括：将玉米种子表面消毒后经球孢白僵菌孢子悬液浸种；所述球孢白僵菌菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCC7192；保藏时间为：2013年01月23日。本发明专利技术提供的定殖方法简便易行，明确了最佳的浸种时间，以及球孢白僵菌在玉米苗期的定殖偏好性；虫生真菌在植物体内定殖可以使植物的抗性增强，一方面可以减缓病原菌对植物的危害程度，另一方面可以通过对植食性昆虫的间接调控保护植物免受害虫侵扰。

Colonization method of Beauveria bassiana in maize seedling stage and its application

The present invention relates to the technical field of microbial colonization, in particular, relates to a Beauveria bassiana colonization in Maize Seedling and its application method, the method comprises the following steps: corn seed surface sterilization after spore suspension soaking; the Beauveria bassiana strains preserved in general microbial center Chinese microbe preservation management committee and the preservation number is CGMCC7192; the preservation time: 2013 01 month 23 days. The colonization method provided by the invention, the optimal soaking time and Beauveria bassiana colonization in preference to maize seedling; entomogenous fungi colonization can make plants with enhanced resistance in plants, on the one hand can reduce the harm degree of plant pathogenic bacteria, on the other hand can through the indirect regulation of plant protection from insect pest infestation.

【技术实现步骤摘要】
球孢白僵菌在玉米苗期的定殖方法及其应用
本专利技术涉及微生物定殖
，具体而言，涉及一种球孢白僵菌在玉米苗期的定殖方法及其应用。
技术介绍
寄生在昆虫、蜘蛛等幼虫或成虫上的真菌，称为虫生真菌(entomogenousfungi或entomopathogenicfungi)虫生真菌在保护植物免受病虫害侵扰方面扮演着重要的角色，是近三十年来在国内外迅速受到关注的微生物类群。虫生真菌的植物内生性已得到众多研究者的验证，该类菌种可以存在于多种野生植株的组织内，如玉米、高粱、番茄、棉花、香蕉、加州山松、可可、罂粟等。此外，也可以通过人工接种的方式将菌种接种到寄主植物当中，主要接种方法有土壤灌溉、种子包衣、浸种、胚根敷料(土壤拌种)、根和根茎浸泡、茎部注射、叶面喷施和花朵喷施等，菌株能从接种部位向周围组织扩散并定殖在寄主植物组织中，但根据接种方法、接种部位及宿主植物不同，菌种定殖效率也存在一定差异。虫生真菌在植物中定殖对植物的生长有一定的促进作用，主要表现在增加生物量，提高自身抗性等。但有关虫生真菌促进植物生长的相关机制报道较少，植物自身生长状态的改变势必会带来植物体内相关防御酶活性的变化，这方面的研究目前未见报道。有鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种球孢白僵菌在玉米苗期的定殖方法，利用球孢白僵菌孢子悬液浸种法处理玉米种子，使其在玉米中定殖，其方法简便易行，本方法明确了最佳的浸种时间，以及球孢白僵菌在玉米苗期的定殖偏好性，同时检测了该种接种方法对玉米苗期生长状态的影响，并进一步研究了玉米抗性相关防御酶活性的变化情况，对虫生真菌促进植物生长的机制进行了初步探讨。为了实现本专利技术的上述目的，特采用以下技术方案：一种球孢白僵菌在玉米苗期的定殖方法，包括：将玉米种子表面消毒后经球孢白僵菌孢子悬液浸种；所述球孢白僵菌菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCC7192；保藏时间为：2013年01月23日。本专利技术使用的菌株为吉林省农业科学院植物保护研究所生物农药课题组分离保存的球孢白僵菌BeauveriabassianaD1-5菌株。该菌株分离自亚洲玉米螟，2008年采集于吉林省德惠市。本专利技术使用的玉米品种为垦粘一号(KN1)。该品种属于青食玉米，微甜，口感好，是主要的食用品种，在吉林省种植面积居首位。本专利技术利用球孢白僵菌孢子悬液浸种法处理玉米种子，使其在玉米中定殖，该种方法简便易行，旨在明确最佳的浸种时间，以及球孢白僵菌在玉米苗期的定殖偏好性，同时监测了该种接种方法对玉米苗期生长状态的影响，并进一步研究了玉米抗性相关防御酶活性的变化情况，对虫生真菌促进植物生长的机制进行了初步探讨。优选的，如上所述的球孢白僵菌在玉米苗期的定殖方法，所述表面消毒的方法为：用65％～75％乙醇溶液浸泡20s～40s，再使用0.8％～1.2％次氯酸钠溶液浸泡20s～40s，最后用无菌水清洗2～5次。优选的，如上所述的球孢白僵菌在玉米苗期的定殖方法，所述球孢白僵菌孢子的浓度为108～9个孢子/mL。优选的，如上所述的球孢白僵菌在玉米苗期的定殖方法，所述玉米种子和所述白僵菌孢子悬液的比例为：每100粒玉米种子浸泡在15～25mL白僵菌孢子悬液中。优选的，如上所述的球孢白僵菌在玉米苗期的定殖方法，所述白僵菌孢子悬液的溶剂为0.04％～0.06％的吐温-80溶液。优选的，如上所述的球孢白僵菌在玉米苗期的定殖方法，所述浸种的条件为：26℃～30℃，60r/min～100r/min浸种10h～14h。浸种时间会对苗期几种防御酶活性产生影响，是关键的参数之一。优选的，如上所述的球孢白僵菌在玉米苗期的定殖方法，将玉米种子表面消毒后经球孢白僵菌孢子悬液浸种后还包括：将种子铺于无菌滤纸上，吹干备用。优选的，如上所述的球孢白僵菌在玉米苗期的定殖方法，所述玉米的品种为垦粘一号。如上所述的球孢白僵菌在玉米苗期的定殖方法在提高玉米幼苗品质以及防治玉米害虫中的应用。优选的，如上所述的应用，所述玉米害虫包括玉米螟、松毛虫、小蔗螟、盲椿、谷象、柑桔红蜘蛛和蚜虫中的一种或多种。与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：本专利技术提供的定殖方法简便易行，明确了最佳的浸种时间，以及球孢白僵菌在玉米苗期的定殖偏好性；虫生真菌在植物体内定殖可以使植物的抗性增强，一方面可以减缓病原菌对植物的危害程度，另一方面可以通过对植食性昆虫的间接调控保护植物免受害虫侵扰。附图说明为了更清楚地说明本专利技术具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本专利技术的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1为浸种时间对球孢白僵菌在玉米中定殖偏好性的影响；图2为球孢白僵菌浸种对玉米生理生态指标的影响；图3为球孢白僵菌浸种对玉米叶片抗性相关酶活力的影响。本专利技术所采用的球孢白僵菌(Beativeriabassiana)，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所；保藏时间为：2013年01月23日，保藏编号CGMCC7192。经保藏中心于2013年01月23日检测为存活菌株。具体实施方式下面将结合实施例对本专利技术的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本专利技术，而不应视为限制本专利技术的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。实施例1本实施例提供了一种球孢白僵菌在玉米苗期的定殖方法，包括：本专利技术采取随机区组设计，盆栽控制实验。浸种时间和球孢白僵菌处理分别设置2个水平。实验设置4个处理，每个处理8株玉米，10个重复。实验处理分别为吐温-80浸种12h(T80-12h)，球孢白僵菌孢子悬液浸种12h(Bb-12h)，吐温-80浸种24h(T80-24h)，球孢白僵菌孢子悬液浸种24h(Bb-24h)。选取颗粒大小均一的玉米种子，将种子表面消毒(首先用70％乙醇溶液浸泡30s，其次使用1％次氯酸钠溶液浸泡30s，最后用无菌水清洗3次)，每100粒(约23g)玉米种子浸泡在20mL球孢白僵菌孢子悬液(使用0.05％吐温-80溶液，将球孢白僵菌孢子粉悬浮，采用血球计数板计悬浮液中孢子数，孢子悬液浓度为108个孢子/mL)或0.05％吐温-80溶液中，28℃，80r/min浸种。随后将种子铺于无菌滤纸上，吹干30min，备用。播种花盆规格为，直径20cm×高14.5cm，土壤选用丹麦进口泥炭土，每盆装土2kg，2株苗/盆(1株取样，1株测生物量)。实施例2本实施例提供了对实施例1效果的检测方法及结果。一、实验方法1.球孢白僵菌定殖偏好性调查取样时期为3次，分别为实施例1玉米出苗14d，21d，28d，每个时期各处理取幼苗10株，每株苗取根、茎、叶各9块，根茎长度为1cm，叶片面积1cm2。定殖率检测采用PDA检测法，样材料表面消毒(实施例1中种子消毒方法)，每种组织摆放在一个PDA选择培养皿中(每个平板9块样品)，28℃，培养箱中暗培养本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种球孢白僵菌在玉米苗期的定殖方法，其特征在于，包括：将玉米种子表面消毒后经球孢白僵菌孢子悬液浸种；所述球孢白僵菌菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCC7192；保藏时间为：2013年01月23日。

【技术特征摘要】
1.一种球孢白僵菌在玉米苗期的定殖方法，其特征在于，包括：将玉米种子表面消毒后经球孢白僵菌孢子悬液浸种；所述球孢白僵菌菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCC7192；保藏时间为：2013年01月23日。2.根据权利要求1所述的球孢白僵菌在玉米苗期的定殖方法，其特征在于，所述表面消毒的方法为：用65％～75％乙醇溶液浸泡20s～40s，再使用0.8％～1.2％次氯酸钠溶液浸泡20s～40s，最后用无菌水清洗2～5次。3.根据权利要求1所述的球孢白僵菌在玉米苗期的定殖方法，其特征在于，所述球孢白僵菌孢子的浓度为108～9个孢子/mL。4.根据权利要求3所述的球孢白僵菌在玉米苗期的定殖方法，其特征在于，所述玉米种子和所述白僵菌孢子悬液的比例为：每100粒玉米种子浸泡在15～25mL白僵菌孢子悬液中。5.根据权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：隋丽，徐文静，李启云，王永志，路扬，张正坤，
申请(专利权)人：吉林省农业科学院，
类型：发明
国别省市：吉林,22