一种抗RA33抗体IgG化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法技术

技术编号:15450326 阅读:219 留言:0更新日期:2017-05-31 12:00
本发明专利技术公开了一种抗RA33抗体IgG化学发光免疫检测试剂盒,所述试剂盒包括:RA33抗原包被的磁微粒、鼠抗人IgG单克隆抗体包被的吖啶酯、抗RA33抗体IgG定标品、预激发液、激发液。另外本发明专利技术还公开了一种抗RA33抗体IgG化学发光免疫检测试剂盒的制备方法。本发明专利技术所述试剂盒与现有试剂盒相比操作简便,灵敏度高,检测范围广等优点。

IgG chemiluminescence immunoassay kit for resisting RA33 antibody and preparation method thereof

The invention discloses an anti RA33 antibody IgG chemiluminescence immunoassay kit, the kit includes: RA33 antigen, the magnetic particles were anti human IgG monoclonal antibodies acridiniumester, anti RA33 antibody was IgG calibration products, prespark fluid, fluid excitation. In addition, the invention also discloses a preparation method of an anti RA33 antibody IgG chemiluminescence immunoassay detection kit. Compared with the existing reagent box, the kit has the advantages of simple and convenient operation, high sensitivity and wide detection range.

【技术实现步骤摘要】
一种抗RA33抗体IgG化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法
本专利技术涉及体外诊断免疫检测领域,具体地,本专利技术提供了一种化学发光免疫检测抗RA33抗体IgG试剂盒及其制备方法。
技术介绍
类风湿关节炎(RheumatoidArthritis,RA)是一常见的自身免疫性疾病,以慢性、进行性、对称性关节炎为主要临床特点。1989年,奥地利学者Hassfeld等利用Hela细胞核提取物为抗原,采用免疫印迹法在36%的RA患者血清中检测到一种分子量33KD的抗体,特异性为99.6%,认为一定程度上具有标记物的特性,命名为抗RA33抗体。Hassfeld等研究发现RA33/36本质为蛋白质。1992年,Steiner等提纯并分析RA33的氨基酸序列,并与异质性核糖核蛋白体(hnRNP)比较发现,RA33与hnRNPA2蛋白等同。在各项RA早期诊断指标中,抗RA33抗体特异性最高,在RA中的阳性率为27%~45%,尤其在RA早期出现。此外,抗RA33抗体除见于部分RA患者外,约20%的系统性红斑狼疮(SLE)患者和40%-60%的混合性结缔组织病(MCTD)患者中也存在该抗体。但有文献报道,SLE患者和MCTD患者中抗RA33抗体常常与另外两种自身抗体U1-RNP和Sm抗体同时出现,所以只要同时检查U1-RNP和Sm抗体即可排除SLE和MCTD。临床检测抗RA33抗体IgG的常见方法有免疫印迹法、酶联免疫吸附法、化学发光法,但这些方法都存在着一些不足之处。一、免疫印迹法免疫印迹是将蛋白质转移到膜上,然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白,可用相应抗体作为一抗进行检测,对新基因的表达产物,可通过融合部分的抗体检测。其不足之处在于:(1)只能进行定性和半定量分析,无法得出被检物质具体的量;(2)操作步骤繁琐,试验用时较长;(3)检测的灵敏度还有待提高。二、酶联免疫吸附法酶联免疫吸附法(ELISA)被广泛应用,但该方法也存在着下述的不足之处:(1)使用12×8型、6×8型、8×12型或整板型96孔专用微孔板作为抗原包被用具和反应容器,在使用时只能分成12批次、6批次、8批次或整板一次使用,无法进行独立的、单人份的检测;(2)定量测定所用的试剂种类较多,每一种检测试剂都要用试剂瓶来盛装,并且每使用一种试剂时都需要更换吸液嘴来分别加注到微孔板的微孔中,不但试剂瓶种类多,加注试剂的操作也极为繁琐;(3)缺少对检测信息的相应标注,只能通过查看试剂盒外包装盒的标识才能了解或知悉检测试剂的生产批号及有效期信息,而且所知悉的信息在检测过程中不受控,具有很大的随意性;(4)检测试剂在检测过程中处于开放的空间,容易引起各种试剂之间的交叉污染而影响检测结果的准确性;(5)检测过程多采用手工操作,试剂或样本的加量不很精确,操作过程极为繁琐和复杂,容易发生操作差错,检测结果的准确度和精密度较差;(6)在检测项目成套试剂的数量配置及使用上均为项目数×48/96人份,如果需要检测10个项目,则试剂的配置及使用数须为10×48/96人份,如果只有一份样本需要检测10个不同的项目,也需要配置10×48/96人份的试剂,存在着不够经济合理的缺点。三、化学发光法化学发光法按发光原理可分为直接化学发光和酶促化学发光。酶促化学发光主要有辣根过氧化物酶(HRP)和碱性磷酸酶两种,但都有一定的局限性,辣根过氧化物酶主要缺点为:鲁米诺在没有辣根过氧化物酶存在情况下,也会被H2O2氧化自身发光,本底相对较高,影响信噪比,反应动力学复杂,影响因素多,结果不够稳定,要得到灵敏度高且平台期长的底物不容易。碱性磷酸酶主要缺点为:底物达到平台期的时间长,底物成本高,导致检测成本高,患者负担重。吖啶酯作为标记物的直接化学发光相比酶促化学发光具有明细优势,主要表现在:反应不需要催化剂,只要碱性环境即可进行,反应迅速,背景发光低,信噪比高,干扰因素少,试剂稳定性好,可以两点定标,体系简单,激发液成本低,吖啶酯易与蛋白质联结,且联结后光子产率不减少。
技术实现思路
目前抗RA33抗体IgG检测技术存在以下缺点:检测成本高、检测灵敏度低、检测线性范围窄、重现性低、不能定量、操作复杂等。本专利技术正是为了克服以上所述缺点,公开了一种检测成本低、灵敏度高、检测线性范围广、重现性高、可以定量、操作简单的抗RA33抗体IgG试剂盒及其制备方法。本专利技术首先制备化学发光免疫分析试剂盒,主要包括:RA33抗原包被的磁颗粒、鼠抗人IgG单克隆抗体包被的吖啶酯以及抗RA33抗体IgG定标品;然后利用全自动化学发光免疫分析仪对定标品进行检测,绘制标准曲线,内置于电脑软件,测试实际样本,根据样本发光值计算样本浓度;最后对抗RA33抗体IgG全自动化学发光免疫分析系统进行性能(灵敏度、线性、精密度、干扰性)的评价。本专利技术与目前技术相比,具有以下优点:1、本专利技术选择吖啶酯作为标记材料,并应用于化学发光免疫分析系统,该发光体系为直接化学发光,与传统的酶促化学发光相比,该反应不需要酶的参与,更加节约成本;2、本专利技术选用的吖啶酯化学发光免疫分析系统检测灵敏度高,能够达到1AU/mL,相比其它的抗RA33抗体IgG检测方法灵敏度至少提高了10倍;3、本专利技术选用的吖啶酯化学发光免疫分析系统线性范围宽,能达到3-165AU/mL,其它的抗RA33抗体IgG化学发检测方法的检线性范围为20-135AU/mL;4、本专利技术选用的吖啶酯化学发光免疫分析系统重复性高,批内及批间差均在5%以内,这是其它化学发光免疫分析系统难以达到的;5、本专利技术的化学发光免疫分析系统已实现样本的定量,通过内置标准曲线到测试软件,只需测试样本就可直接得到样本的浓度值;6、本专利技术的化学发光免疫分析系统已实现全自动化,试剂及样本的添加全有仪器完成,操作更加简便,减少了人为的误差。附图说明图1为实施例3得到的抗RA33抗体IgG标准曲线图。具体实施方式实施例1:抗RA33抗体IgG化学发光免疫检测试剂盒制备方法(1)RA33抗原包被的纳米磁珠制备:取50mg羧基化的磁微粒(粒径为0.05-1um)悬浮液,磁分离去上清,用0.02M,pH为5.5MES缓冲液重悬,加入0.5-2mL新配置的10mg/mL的EDC水溶液,活化磁珠表面羧基,加入3-5mgRA33抗原包,室温下混悬2-10h,磁分离,去除上清,用含2%BSA的0.1MpH为8.0的Tris缓冲液重悬到1mg/mL,得到RA33抗原包包被的磁颗粒,每瓶5mL分装保存于4℃备用。(2)鼠抗人IgG单克隆抗体标记的吖啶酯的制备:取50uL25mg/mL的鼠抗人IgG单克隆抗体,加入150uL0.1-0.2MpH9.0-9.5的碳酸盐缓冲液,混匀,然后加入1-2uL5mg/mL的吖啶酯混匀,室温下避光反应,1-2h后取出,用2mL的zeba离心脱盐柱脱盐处理,脱盐过程中首先分别用纯净水及TBS缓冲液进行处理,最后加入得到的鼠抗人IgG单克隆抗体标记的吖啶酯溶液,收集离心管中的液体至保存管得到鼠抗人IgG单克隆抗体标记的吖啶酯,每瓶5mL分装保存于4℃备用。(3)抗RA33抗体IgG定标品的制备:用标准品缓冲液(40mMTris-HCl,0.5%BSA,1%NaCl,pH8.0)将抗RA33抗体IgG配置成浓度本文档来自技高网
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一种抗RA33抗体IgG化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法

【技术保护点】
一种抗RA33抗体IgG化学发光免疫检测试剂盒,所述试剂盒包括:RA33抗原包被的‑纳米磁微球、化学发光标记物、化学发光底物液、抗RA33抗体IgG定标品。

【技术特征摘要】
2016.06.30 CN 20162068056681.一种抗RA33抗体IgG化学发光免疫检测试剂盒,所述试剂盒包括:RA33抗原包被的-纳米磁微球、化学发光标记物、化学发光底物液、抗RA33抗体IgG定标品。2.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,所述RA33抗原包被的固相载体为磁微粒。3.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,所述RA33抗原包被的固相载体为羧基化的粒径为0.05-1um磁微粒。4.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,所述化学发光标记物为吖啶酯、吖啶酯磺酰胺、吖啶酯甲苯磺酰胺、吖啶酯对甲基磺酰胺、吖啶酯三氟甲基磺酰胺。5.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,所述化学发光标记物优选吖啶酯。6.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,所述化学发光底物液包括化学发光激发液、化学发光预激发液。7.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,所述化学发光预激发液为质量分数0.005%~0.5%的双氧水(H2O2)溶液,激发液为0.005mol/L~0.025mol/L的氢氧化钠(NaOH)溶液。8.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,所述抗RA33抗体IgG定标品为用标准品缓冲液将抗RA33抗体IgG配制成浓度为0AU/mL、5AU/mL、20AU/mL、50AU/mL、90AU/mL、165AU/mL,4℃保存备用。9.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒的制备方法,其特征在于包括RA33抗原包被的磁微粒的制备、鼠抗人IgG单克隆抗体标记的吖啶酯的制备、化学发光底物液的制备、抗RA33抗体IgG定标品的制备。10.根据权利要求1和权利要求9所述试剂盒...

【专利技术属性】
技术研发人员:张光辉李爽张昭姜儒曾旭玲
申请(专利权)人:深圳市亚辉龙生物科技股份有限公司
类型:发明
国别省市:广东,44

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