检测WRAP53基因突变的引物及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种检测先天性角化不良症患者WRAP53基因突变的引物及其应用。检测WRAP53基因突变情况的引物包括扩增WRAP53基因全外显子序列的引物和检测WRAP53基因的测序引物。利用本发明专利技术的引物可快速地将先天性角化不良症患者体内WRAP53基因全外显子的突变检测出来。利用本发明专利技术完成的检测结果准确，可快速检测先天性角化不良症患者体内WRAP53基因全外显子序列的突变情况，对早期干预及早期治疗有重要的参考意义。

Primer for detecting WRAP53 gene mutation and application thereof

The present invention discloses a primer for detecting WRAP53 gene mutation in congenital keratosis patients and its application. Primers for detecting mutations in WRAP53 genes include primers for amplifying full exon sequences of WRAP53 genes and sequencing primers for detecting WRAP53 genes. By using the primers of the invention, the mutation of the WRAP53 gene exon in a patient with congenital hyperkeratosis can be detected rapidly. By using the invention to complete the accurate detection results, the mutation can rapid detection of dyskeratosis congenita in vivo in patients with WRAP53 gene exon sequence, which has important reference significance to early intervention and early treatment.

【技术实现步骤摘要】
检测WRAP53基因突变的引物及其应用
本专利技术涉及生命科学和生物
，具体涉及检测WRAP53基因突变的引物及其应用。
技术介绍
先天性角化不良症(dyskeratosiseongenita，DC)是一种具有遗传异质性的骨髓衰竭综合征，发病率约为1/100万。典型的DC患者约80％～90％具有皮肤黏膜异常三联征，表现为皮肤网状色素沉着、指(趾)甲萎缩、口腔黏膜白斑。目前文献报道可引起DC的突变基因主要有CTC1，DKC1，TERC，TERT，TINF2，NHP2，NOP10及WRAP53。文献报道，这些基因有3种遗传方式，分别为X-连锁隐性遗传、常染色体显性遗传、常染色体隐性遗传。但目前仍约50％患者遗传特征不明确。X-连锁隐性遗传包括DKC1，常染色体显性遗传包括TERC及TINF2，常染色体隐性遗传包括CTC1，WRAP53，NHP2，NOP10，既可以作为常染色体显性遗传又可以作为隐性遗传的有TERT。端粒酶卡扎尔体蛋白1(telomerasecajalbodyprotein1，TCAB1又名WRAP53、WDR79)是2009年新发现的端粒酶关键核心蛋白组分，其主要存在于卡扎尔体蛋白中。WRAP53基因定位于染色体17p13上，与P53基因重叠，是P53的反义转录基因，它不仅能调节p53基因的表达还能调节端粒的合成。WRAP53表达的缺失不会影响端粒酶活性及TERC水平，但可在细胞的S期阻止端粒酶与端粒结合，最终导致端粒变短。有研究者发现WRAP53的突变阻止了端粒酶定位于卡扎尔体蛋白，导致了先天性角化不良症的发生。近年来，通过全基因组测序，发现WRAP53基因突变在先天性角化不良症患者中非常常见。目前文献报道在两个先天性角化不良症的家族中发现WRAP53基因存在突变点较多。目前国内文献报道的DC病例绝大多数为30岁左右皮肤受累的临床病例，病例数较少，且较少进行基因检测。因此有必要进行相关基因的突变检测，有必要先对患者进行WRAP53基因进行全外显子突变筛选，有助于对先天性角化不良症的早期诊断，减少误诊、漏诊，并进行治疗。
技术实现思路
本专利技术目的是提供一种检测WRAP53基因突变的引物及其应用，所述引物可快速检测先天性角化不良症患者体内WRAP53基因多态位点的突变情况。本专利技术采用以下技术方案：本专利技术第一方面，提供了检测WRAP53基因突变情况的引物，包括：扩增WRAP53基因的引物，其碱基序列为：WRAP53-1aF：TGTAAAACGACGGCCAGTGGGAACGGGAAACCTTCTAAWRAP53-1aR：AACAGCTATGACCATGGACAGCAGTCCGGAGCTAACWRAP53-1bF：TGTAAAACGACGGCCAGTCTAATCTCCGCTGTGCTTCCWRAP53-1bR：AACAGCTATGACCATGTCTTCTGCAGGAAGGCTTGTWRAP53-1cF：TGTAAAACGACGGCCAGTGGGACCCAGTTTCTCTCTCCWRAP53-1cR：AACAGCTATGACCATGCTGGAGAAGTGGGTCTCAGGWRAP53-2F：TGTAAAACGACGGCCAGTGTGGAGTCTGGGGAGATGAAWRAP53-2R：AACAGCTATGACCATGGGGCATCCCTCTCCTAGAAAWRAP53-3F：TGTAAAACGACGGCCAGTCAGCCCTAGCCCTACACTTGWRAP53-3R：AACAGCTATGACCATGTGCTGCCACAAGAAATTCACWRAP53-4F：TGTAAAACGACGGCCAGTTCTGAGCTCACCCTTGAACAWRAP53-4R：AACAGCTATGACCATGCTGACCAGCCCCTCTGATAAWRAP53-5F：TGTAAAACGACGGCCAGTACACCCAGCCTCATTTTTGTWRAP53-5R：AACAGCTATGACCATGGGAAGGAAAGGGCTGAAAACWRAP53-6F：TGTAAAACGACGGCCAGTTCATATCTGGGACGCATTCAWRAP53-6R：AACAGCTATGACCATGGTACAGAGGACGGCGTGAACWRAP53-7aF：TGTAAAACGACGGCCAGTGCTTGTGACAGACAGCATGGWRAP53-7aR：AACAGCTATGACCATGTCTCAGGGTGTGACCCCTACWRAP53-7bF：TGTAAAACGACGGCCAGTTCTGTATGCCTGGGATGATGWRAP53-7bR：AACAGCTATGACCATGATTGGTGGTCACCTCTCGACWRAP53-8F：TGTAAAACGACGGCCAGTCTGAAGGAGTGCCTGGAGACWRAP53-8R：AACAGCTATGACCATGACCCTACAGCTGGGCTCTGWRAP53-9F：TGTAAAACGACGGCCAGTCCTCTGCCAGCAAATCTCTCWRAP53-9R：AACAGCTATGACCATGTCTCTGTGGGCTCAGGAAACWRAP53-10F：TGTAAAACGACGGCCAGTAGAGGGAGCAAGTGTCCTCAWRAP53-10R：AACAGCTATGACCATGGCCTGGTTTCAGGACCAATA。进一步地，还包括测序引物，其碱基序列为：检测WRAP53基因的测序引物碱基序列为：M13F：TGTAAAACGACGGCCAGTM13R：AACAGCTATGACCATG。进一步地，引物序列WRAP53-1aF、WRAP53-1bF、WRAP53-1cF和WRAP53-1aR、WRAP53-1bR、WRAP53-1cR是扩增WRAP53基因第1外显子序列的引物，引物序列WRAP53-2F和WRAP53-2R是扩增WRAP53基因第2外显子序列的引物，引物序列WRAP53-3F和WRAP53-3R是扩增WRAP53基因第3外显子序列的引物，引物序列WRAP53-4F和WRAP53-4R是扩增WRAP53基因第4外显子序列的引物，引物序列WRAP53-5F和WRAP53-5R是扩增WRAP53基因第5外显子序列的引物，引物序列WRAP53-6F和WRAP53-6R是扩增WRAP53基因第6外显子序列的引物，引物序列WRAP53-7aF、WRAP53-7bF和WRAP53-7aR、WRAP53-7bR是扩增WRAP53基因第7外显子序列的引物，引物序列WRAP53-8F和WRAP53-8R是扩增WRAP53基因第8外显子序列的引物，引物序列WRAP53-9F和WRAP53-9R是扩增WRAP53基因第9外显子序列的引物，引物序列WRAP53-10F和WRAP53-10R是扩增WRAP53基因第10外显子序列的引物。进一步地，引物序列M13-F和M13-R是测序WRAP53基因扩增产物全外显子序列的引物。本专利技术第二方面，提供了上述检测WRAP53基因突变情况的引物在制备检测WRAP53基因突变情况的诊断试剂或药物中的应用。本专利技术第三方面，提供了一种检测WRAP53基因突变本文档来自技高网...

【技术保护点】
检测WRAP53基因突变情况的引物，其特征在于，包括：扩增WRAP53基因的引物，其碱基序列为：WRAP53‑1a F：TGTAAAACGACGGCCAGTGGGAACGGGAAACCTTCTAAWRAP53‑1a R：AACAGCTATGACCATGGACAGCAGTCCGGAGCTAACWRAP53‑1b F：TGTAAAACGACGGCCAGTCTAATCTCCGCTGTGCTTCCWRAP53‑1b R：AACAGCTATGACCATGTCTTCTGCAGGAAGGCTTGTWRAP53‑1c F：TGTAAAACGACGGCCAGTGGGACCCAGTTTCTCTCTCCWRAP53‑1c R：AACAGCTATGACCATGCTGGAGAAGTGGGTCTCAGGWRAP53‑2 F：TGTAAAACGACGGCCAGTGTGGAGTCTGGGGAGATGAAWRAP53‑2 R：AACAGCTATGACCATGGGGCATCCCTCTCCTAGAAAWRAP53‑3 F：TGTAAAACGACGGCCAGTCAGCCCTAGCCCTACACTTGWRAP53‑3 R：AACAGCTATGACCATGTGCTGCCACAAGAAATTCACWRAP53‑4 F：TGTAAAACGACGGCCAGTTCTGAGCTCACCCTTGAACAWRAP53‑4 R：AACAGCTATGACCATGCTGACCAGCCCCTCTGATAAWRAP53‑5 F：TGTAAAACGACGGCCAGTACACCCAGCCTCATTTTTGTWRAP53‑5 R：AACAGCTATGACCATGGGAAGGAAAGGGCTGAAAACWRAP53‑6 F：TGTAAAACGACGGCCAGTTCATATCTGGGACGCATTCAWRAP53‑6 R：AACAGCTATGACCATGGTACAGAGGACGGCGTGAACWRAP53‑7a F：TGTAAAACGACGGCCAGTGCTTGTGACAGACAGCATGGWRAP53‑7a R：AACAGCTATGACCATGTCTCAGGGTGTGACCCCTACWRAP53‑7b F：TGTAAAACGACGGCCAGTTCTGTATGCCTGGGATGATGWRAP53‑7b R：AACAGCTATGACCATGATTGGTGGTCACCTCTCGACWRAP53‑8 F：TGTAAAACGACGGCCAGTCTGAAGGAGTGCCTGGAGACWRAP53‑8 R：AACAGCTATGACCATGACCCTACAGCTGGGCTCTGWRAP53‑9 F：TGTAAAACGACGGCCAGTCCTCTGCCAGCAAATCTCTCWRAP53‑9 R：AACAGCTATGACCATGTCTCTGTGGGCTCAGGAAACWRAP53‑10 F：TGTAAAACGACGGCCAGTAGAGGGAGCAAGTGTCCTCAWRAP53‑10 R：AACAGCTATGACCATGGCCTGGTTTCAGGACCAATA。...

【技术特征摘要】
1.检测WRAP53基因突变情况的引物，其特征在于，包括：扩增WRAP53基因的引物，其碱基序列为：WRAP53-1aF：TGTAAAACGACGGCCAGTGGGAACGGGAAACCTTCTAAWRAP53-1aR：AACAGCTATGACCATGGACAGCAGTCCGGAGCTAACWRAP53-1bF：TGTAAAACGACGGCCAGTCTAATCTCCGCTGTGCTTCCWRAP53-1bR：AACAGCTATGACCATGTCTTCTGCAGGAAGGCTTGTWRAP53-1cF：TGTAAAACGACGGCCAGTGGGACCCAGTTTCTCTCTCCWRAP53-1cR：AACAGCTATGACCATGCTGGAGAAGTGGGTCTCAGGWRAP53-2F：TGTAAAACGACGGCCAGTGTGGAGTCTGGGGAGATGAAWRAP53-2R：AACAGCTATGACCATGGGGCATCCCTCTCCTAGAAAWRAP53-3F：TGTAAAACGACGGCCAGTCAGCCCTAGCCCTACACTTGWRAP53-3R：AACAGCTATGACCATGTGCTGCCACAAGAAATTCACWRAP53-4F：TGTAAAACGACGGCCAGTTCTGAGCTCACCCTTGAACAWRAP53-4R：AACAGCTATGACCATGCTGACCAGCCCCTCTGATAAWRAP53-5F：TGTAAAACGACGGCCAGTACACCCAGCCTCATTTTTGTWRAP53-5R：AACAGCTATGACCATGGGAAGGAAAGGGCTGAAAACWRAP53-6F：TGTAAAACGACGGCCAGTTCATATCTGGGACGCATTCAWRAP53-6R：AACAGCTATGACCATGGTACAGAGGACGGCGTGAACWRAP53-7aF：TGTAAAACGACGGCCAGTGCTTGTGACAGACAGCATGGWRAP53-7aR：AACAGCTATGACCATGTCTCAGGGTGTGACCCCTACWRAP53-7bF：TGTAAAACGACGGCCAGTTCTGTATGCCTGGGATGATGWRAP53-7bR：AACAGCTATGACCATGATTGGTGGTCACCTCTCGACWRAP53-8F：TGTAAAACGACGGCCAGTCTGAAGGAGTGCCTGGAGACWRAP53-8R：AACAGCTATGACCATGACCCTACAGCTGGGCTCTGWRAP53-9F：TGTAAAACGACGGCCAGTCCTCTGCCAGCAAATCTCTCWRAP53-9R：AACAGCTATGACCATGTCTCTGTGGGCTCAGGAAACWRAP53-10F：TGTAAAACGACGGCCAGTAGAGGGAGCAAGTGTCCTCAWRAP53-10R：AACAGCTATGACCATGGCCTGGTTTCAGGACCAATA。2.根据权利要求1所述的检测WRAP53基因突变情况的引物，其特征在于，还包括测序引物，其碱基序列为：检测WRAP53基因的测序引物碱基序列为：M13F：TGTAAAACGACGGCCAGTM13R：AACAGCTATGACCATG。3.根据权利要求1所述的检测WRAP53基因突变情况的引物，其特征在于，引物序列WRAP53-1aF、WRAP53-1bF、WRAP53-1cF和WRAP53-1aR、WRAP53-1bR、WRAP53-1cR是扩增WRAP53基因第1外显子序列的引物，引物序列WRAP53-2F和WRAP53-2R是扩增WRAP53基因第2外显子序列的引物，引物序列WRAP53-3F和WRAP53-3R是扩增WRAP53基因第3外显子序列的引物，引物序列WRAP53-4F和WRAP53-4R是扩增WRAP53基因第4外显子序列的引物，引物序列WRAP53-5F和WRAP53-5R是扩增WRAP53基因第5外显子序列的引物，引物序列WRAP53-6F和WRAP53-6R是扩增WRAP53基因第6外显子序列的引物，引物序列WRAP53-7aF、WRAP53-7bF和WRAP53-7aR、WRAP53-7bR是扩增WRAP53基因第7外显子序列的引物，引物序列WRAP53-8F和WRAP53-8R是扩增WRAP53基因第8外显子序列的引物，引物序列WRAP53-9F和WRAP53-9R是扩增WRAP53基因第9外显子序列的引物，引物序列WRAP53-10F和WRAP53-10R是扩增WRAP53基因第10外显子序列的引物。4.根据权利要求2所述的检测WRAP53基因突变情况的引物，其特征在于，引物序列M13-F和M13-R是测序WRAP53基因扩增产物全外显子序列的引物。5.权利要求1-4任一权利要求所述的检测WRAP53基因突变情况的引物在制备检测WRAP53基因突变情况的诊断试剂或药物中的应用。6.一种检测WRAP53基因突变情况的试剂盒，其特征在于，包括：(i)血液DNA抽提试剂；(ii)检测体系PCR扩增反应液；(iii)测序体系试剂；其中PCR扩增反应液引物为：扩增WRAP53基因的引物，其碱基序列为：WRAP53-1aF：TGTAAAACGACGGCCAGTGGGAACGGGAAACCTTCTAAWRAP53-1aR：AACAGCTATGACCATGGACAGCAGTCCGGAGCTAACWRAP53-1bF：TGTAAAACGACGGCCAGTCTAATCTCCGCTGTGCTTCCWRAP53-1bR：AACAGCTATGACCATGTCTTCTGCAGGAAGGCTTGTWRAP53-1cF：TGTAAAACGACGGCCAGTGGGACCCAGTTTCTCTCTCCWRAP53-1cR：AACAGCTATGACCATGCTGGAGAAGTGGGTCTCAGGWRAP53-2F：TG...

【专利技术属性】
技术研发人员：单战，陈奕磊，徐建成，刘岩琦，
申请(专利权)人：杭州华硕医学检验所有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33