使用膜STIM1筛选化合物的方法技术

本发明专利技术涉及位于细胞的质膜的STIM1蛋白的部分在以下方法中的用途，该方法用于筛选用于治疗慢性淋巴细胞白血病和/或系统性红斑狼疮的候选分子。本发明专利技术还涉及与位于细胞的质膜的STIM1蛋白的部分相互作用的物质，用于在治疗慢性淋巴细胞白血病和/或系统性红斑狼疮中作为药用产品使用，以及涉及包含至少一种根据本发明专利技术的物质的药物组合物。

Method for screening compounds using membrane STIM1

The present invention relates to the use of the STIM1 protein portion of the plasma membrane of the cell in the following methods for screening candidate molecules for the treatment of chronic lymphocytic leukemia and / or systemic lupus erythematosus. The invention also relates to the plasma membrane and cells in the STIM1 protein interaction material for use as medicinal products in the treatment of chronic lymphocytic leukemia and / or systemic lupus erythematosus, as well as to contain at least one compound according to the medicine material group.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】使用膜STIM1筛选化合物的方法
本专利技术涉及STIM1(基质相互作用分子1或GOK)蛋白的膜部分在筛选的方法中的用途，以及涉及与位于质膜的STIM1蛋白的部分相互作用的物质用于治疗用途，和包含至少这种物质的药物组合物。在下面给出的描述中，在方括号([])中的参考文献是指在文本的结尾处给出的参考文献。
技术介绍
系统性红斑狼疮(SLE)和慢性淋巴细胞白血病(CLL)仍然无法治愈。SLE是自身免疫性起源的异质性疾病，特征在于存在自身反应性淋巴细胞以及存在抗核自身抗体(ANA)。它是具有非常不同的临床表现的多系统疾病。患病率在不同的族群中是不同的，但估计为约1/10000，其中男/女比例为10:1。这种疾病的临床异质性反映了它的致病复杂性，这包括遗传和环境因素。SLE可能影响所有器官。最常见的表现是皮疹、关节炎和疲劳。最严重的表现包括肾炎、神经病症、贫血和血小板减少。90％以上的患者具有ANA，其被认为是高于1/160阳性的。SLE是具有发作性进展的疾病。目前治疗的目的是：治疗急性发作，其可能会影响重要的预后，最小化在相对稳定的时期爆发的风险，以及监测症状，这些症状虽然不危害重要的预后，但影响日常生活质量。羟氯喹和非甾体类抗炎药适用于SLE的温和形式；皮质激素类和免疫抑制剂被保留用于最严重的形式；靶向B淋巴细胞(B细胞)的抗CD20单克隆抗体(利妥昔单抗(rituximab)，)目前适用于受到更严重影响并且对通常治疗没有响应的患者([1])。尽管在引入皮质激素类和免疫抑制剂以后预后改善，但SLE继续对患者发病率和死亡率有显著的影响。CLL是慢性恶性血液病，其还影响B细胞。这些细胞在免疫系统水平上发挥重要作用。在CLL过程中，在它们的生命周期中当CLL的B细胞达到成熟时，它们被阻断，然而它们继续产生。因此，这些B细胞最终积累在血液、神经节、脾、肝和骨髓中，这导致次级淋巴器官的容积的增加。目前可用的针对CLL的治疗是当疾病处于晚期阶段时最常用的。在CLL的强化治疗中使用的化疗产品是单独使用的苯丁酸氮芥、单独使用的氟达拉滨、CHOP型的每月化疗(四种药剂的组合：环磷酰胺-(H)阿霉素(adryamycin)-硫酸长春新碱(长春新碱)-泼尼松)。就靶向治疗而言，因为白血病B细胞是CD20+，特异性地识别此靶点的单克隆抗体可以用于治疗(利妥昔单抗，)。另一个靶点是对于B细胞具有特异性的Bruton的酪氨酸激酶，其在白血病细胞中的表达增加。依鲁替尼(Ibrutinib)(其是此酶的抑制剂)导致白血病细胞的凋亡(死亡)，从而甚至在难治性或反复发作的形式中也给予更长的缓解。然而，上述治疗可能暴露于不良效应。在SLE和CLL的病理特征中，描述了在B细胞抗原受体(BCR)的刺激以后，在SLE和CLL中B细胞的钙信号通路收到干扰([2,3])。除钙信号通路的这些缺陷之外，SLE的B细胞特征还在于白细胞介素10(IL-10)的产生不足，其影响调节B淋巴细胞(Breg)的活性([4,5])。在SLE中Breg的活性的这种不足导致T淋巴细胞(T细胞)增殖的较少调节，其可能会再次有利于放大自身免疫过程([5])。CLL和SLE的诊断和预后是基于汇编的不完善的临床和生物学标准，因此需要开发新的、更有效的标准。在上述两种疾病中，B细胞是主要治疗靶。然而，一些患者并不响应现有治疗。因此，真正需要提供新的治疗解决方案，其克服现有技术的这些缺陷、缺点和障碍，并且尤其涉及治疗靶，其对于待治疗的疾病的受影响的细胞是易接近的，特异性的和选择性的。
技术实现思路
本专利技术通过使用STIM1蛋白(涉及钙通道的激活和调节的蛋白)的位于质膜的部分作为SLE和CLL的治疗靶，使得可以响应这些需求。令人惊讶地，本申请人还证明了用于直接或间接控制位于质膜的STIM1蛋白的活性的任何方式可以用于调节B细胞的细胞反应，从而提供SLE和CLL的新的治疗解决方案。本专利技术因此提出，在这种情况下，使用调节以下各项的任何工具：(i)位于质膜的STIM1蛋白的表达，(ii)这种蛋白的膜寻址(membraneaddressing)，或(iii)在淋巴细胞质膜处这种蛋白的生物活性。在本专利技术的上下文中，在狼疮患者的B细胞中令人惊讶地观测到：(1)STIM1蛋白的整体表达的增加，以及位于质膜的STIM1的部分的诱导，这在对照的B细胞中保持较低或甚至为零，(2)在具有位于质膜的STIM1的部分的SLE的B细胞(在静止时)中，尤其是在处于不成熟/过渡期的SLE的B细胞中，借助于Erk1/2激酶(细胞外信号调节激酶)的磷酸化，MAPK通路(促分裂原活化蛋白激酶)的激活，(3)细胞外Ca2+的增加的组成型进入，以及(4)在STIM1的表达的增加、细胞外Ca2+的组成型进入(持续进入，constitutiveentry)和MAPKERK1/2途径的激活的失调之间的相关性，其可以解释细胞的一般激活，自身反应性B细胞的存活，因而可以解释自身免疫过程。在本专利技术的上下文中，关于SLE的Breg的活性，首次令人惊讶地观测到：(x1)Breg的缺乏调节活性与在SLE的B细胞中的STIM1分子的表达的增加相关，(x2)位于质膜的STIM1分子的阻断(通过阻断抗体特异性地进行或者通过靶向在SLE的B细胞中STIM1的siRNA非特异性地进行的)恢复(i)通过SLE的Breg的IL-10的生产，(ii)T细胞的增殖的抑制，以及(iii)调节性T细胞的诱导。在健康的对照中，位于质膜的STIM1的阻断没有影响。对于CLL的B细胞，申请人还令人惊讶地观测到：(a)胞浆内钙的基线水平的增加与CLL的B细胞的存活的增加、MAPKErk1/2途径的激活、转录因子NFAT2(活化的T细胞的核因子)和STAT3(信号转导物和转录激活子3)的核转位、以及IL-10的合成的增加([5])相关，(b)通过位于质膜的STIM1蛋白的增加来调节细胞外Ca2+的组成型进入的增加。(c)STIM1蛋白在膜上存在(组I)或不存在(组II)允许区分两组患者。(d)针对在质膜处存在的STIM1分子的抗STIM1抗体能够极大减少细胞外Ca2+组成型进入组I的CLL的B细胞以及更弱进入组II的CLL的B细胞，(e)特异性靶向位于质膜的STIM1蛋白的部分的抗STIM1抗体和抗CD20抗体(利妥昔单抗：RTX)的组合能够恢复由组I患者的B细胞(在质膜处存在STIM1蛋白)中的RTX所诱导的凋亡效应。抗STIM1抗体的添加对组II患者(在膜处不存在STIM1蛋白)的抗CD20的凋亡效应没有影响。本专利技术提出，使用位于质膜的STIM1的部分作为在SLE和CLL中的新的治疗靶。本专利技术还提出，在这些疾病中使用位于质膜的STIM1的部分的调节物。本专利技术涉及位于质膜的STIM1的部分作为治疗靶通过调节它的存在或它的活性，在SLE和CLL中的用途。因此，本专利技术涉及(除了别的之外)(i)在细胞的质膜处，STIM1分子的表达的抑制，(ii)这种蛋白的膜寻址的抑制，以及(iii)在质膜处存在的STIM1蛋白的生物活性的抑制。提出了，特别是在耐RTX治疗的CLL患者中，通过特异性靶向位于质膜的STIM1蛋白的部分的抗STIM1抗体，来阻断位于质膜的STIM1的活性。事实上，本文档来自技高网...

【技术保护点】
位于细胞的质膜的STIM1蛋白的部分在一种方法中的用途，所述方法用于体外筛选用于治疗慢性淋巴细胞白血病和/或系统性红斑狼疮的候选分子。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.08.06 EP 14290232.91.位于细胞的质膜的STIM1蛋白的部分在一种方法中的用途，所述方法用于体外筛选用于治疗慢性淋巴细胞白血病和/或系统性红斑狼疮的候选分子。2.根据权利要求1所述的用途，其中，所述STIM1蛋白的肽序列是序列SEQIDNO:1。3.根据权利要求1或2所述的用途，其中，筛选的方法使用选自包括生物筛选和生物物理筛选的组中的技术。4.根据权利要求3所述的用途，其中，筛选使用选自包括以下各项的组中的技术：免疫荧光、蛋白印迹、免疫沉淀、表面等离子共振(SPR)、流式细胞术、视频显微术、钙流的研究、酶联免疫吸附测试(ELISA)、和共焦显微术。5.根据前述权利要求中任一项所述的用途，其中，所述细胞是分离的整个细胞。6.与位于细胞的质膜的STIM1蛋白的部分相互作用的物质，用于在治疗慢性淋巴细胞白血病和/或系统性红斑狼疮中作为药用产品的用途。7.根据权利要求6所述的用于用途的物质，所述物质是不进入细胞的物质。8.根据权利要求6或7中任一项所述的用于用途的物质，所述物质是针对序列SEQIDNO:3的所...

【专利技术属性】
技术研发人员：伊夫·勒诺迪诺，奥利维耶·米尼昂，米格尔·比尔戈斯，雅克·奥利维耶·佩斯，廷希南·法利，
申请(专利权)人：西布列塔尼大学，法国国家健康与医学研究院，布雷斯特大学医疗中心，
类型：发明
国别省市：法国,FR