二异丙氧基磷酰化二肽甲酯及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了二异丙氧基磷酰化二肽甲酯及其制备方法和以其为活性成分的药物。此种药物的活性成分是二异丙氧基磷酰化二肽甲酯类化合物，其结构单元为通式（Ⅰ）的化合物。二异丙氧基磷酰化二肽甲酯类化合物的制备方法是将ＤＩＰＰ－Ｌ－氨基酸和Ｌ－氨基酸甲酯盐酸盐作用生成ＤＩＰＰ二肽甲酯。二异丙氧基磷酰化二肽甲酯类化合物的主要用途是通过诱导肿瘤细胞发生凋亡，从而达到抑制肿瘤细胞增殖，治疗癌症等作用。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及二异丙氧基磷酰化二肽甲酯及其制备方法和应用，特别是涉及二异丙氧基磷酰化二肽甲酯及其制备方法和以其为活性成分的药物。
技术介绍
细胞凋亡，也叫程序性细胞死亡，是由发育生物学家Lockshin和Williams在1965年首先提出的，它是指多细胞有机体为调控有机体发育，维护内环境稳定，由基因控制的细胞主动死亡过程。作为一种生理性细胞消亡方式，凋亡普遍存在于生物界。癌症的发生发展与细胞凋亡失衡有密切关系，它不仅是细胞增殖失控和细胞分化异常的结果，同时也与肿瘤细胞凋亡失衡有关，已有证据表明细胞凋亡受阻可能是癌症发病机制之一。随着凋亡研究的逐步深入，人们发现目前使用的化疗药物除了通过作用于核酸、微管蛋白和其他靶点来杀伤肿瘤细胞外，也可以通过诱导细胞凋亡来杀伤肿瘤细胞，特异性地诱导肿瘤细胞凋亡可能是癌症治疗中最具有广阔前景的尝试。近年来，肿瘤细胞凋亡诱导剂已成为癌症研究领域的热点，有报道二肽甲酯类化合物可以诱导人类U937细胞、HL60，THP-1脊髓瘤等细胞系的凋亡，但机理尚不十分明确。磷酰基是一种具有较高生物活性的基团，在肽类原有的结构上引入磷酰基可能会出现新的生物活性或者是使原有的生物活性提高。N-磷酰肽具有重要的生物活性和药用价值。但是到目前为止，尚没有关于其能够抑制癌症细胞增殖的报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种新型的肿瘤细胞凋亡诱导剂二异丙氧基磷酰化二肽甲酯。本专利技术所提供的二异丙氧基磷酰化二肽甲酯由通式(I)所示的结构单元构成。 其中aa1，aa2既可为L-氨基酸，也可为D-氨基酸。例如，当aa1为L-Val，aa2为L-Phe，本专利技术化合物的结构式为 本专利技术的第二个目的是提供一种合成二异丙氧基磷酰化二肽甲酯类化合物的方法。一种制备二异丙氧基磷酰化二肽甲酯类化合物的方法，是将二异丙基亚磷酸酯(DIPPH)-氨基酸和氨基酸甲酯盐酸盐反应生成二异丙氧基磷酰化二肽甲酯类化合物。所述二异丙基亚磷酸酯-氨基酸和氨基酸甲酯盐酸盐的反应步骤是向4mmol L-氨基酸甲酯盐酸盐、4mmol NMM和10ml四氢呋喃的混合物中加入4.2mmol N-磷酰氨基酸和4.2mmol HOBt，冰水浴下滴加4.2mmol DCC与5ml四氢呋喃的混合溶液，反应后过滤，残余物用THF洗涤，除去溶剂，残余物加饱和NaHCO3溶液，搅拌后用氯仿萃取，合并萃取液依次用饱和NaHCO3溶液、10％柠檬酸、饱和NaCl溶液洗涤，干燥，过滤、洗涤、旋蒸除去氯仿，残余物用硅胶柱层析或重结晶方法纯化，得到所需产物。具体说是在50ml烧瓶中加入4mmol L-氨基酸甲酯盐酸盐、4mmol NMM和10ml干燥的四氢呋喃，搅拌下加入4.2mmol N-磷酰氨基酸和4.2mmol HOBt，冰水浴下滴加4.2mmol DCC与5ml干燥的四氢呋喃的混合溶液，室温反应过夜后过滤，残余物用THF洗涤三次，合并滤液和洗液，旋蒸除去溶剂，残余物加饱和NaHCO3溶液，充分搅拌后用氯仿萃取，合并萃取液依次用饱和NaHCO3溶液、10％柠檬酸、饱和NaCl溶液洗涤三次，无水Na2SO4干燥，过滤、洗涤、旋蒸除去氯仿，残余物用硅胶柱层析或重结晶方法纯化，得到所需产物。所述二异丙基亚磷酸酯-氨基酸的合成包括以下步骤1)酸碱中和法合成二异丙基亚磷酸酯；2)合成二异丙基亚磷酸酯-氨基酸。其中所述酸碱中和法合成二异丙基亚磷酸酯是向230ml异丙醇及100ml CCl4混合液中滴加87ml PCl3，反应后调pH至6～7，分液，萃取水相，合并有机相，收集80℃/10mmHg馏分。具体的说是在1000ml三颈瓶中加入3mol异丙醇(230ml)及100mlCCl4，装上回流冷凝管和配有干燥管的气体吸收装置，室温下不断搅拌，中速滴加1molPCl3(87ml)，约需1小时，加入过程中自动放热使CCl4回流，继续反应30分钟。用饱和NaHCO3溶液调节pH至6～7，分液，用100ml CCl4萃取水相，合并有机相，无水MgSO4干燥，旋去低沸物，减压蒸馏，收集80℃/10mmHg馏分。所述合成二异丙基亚磷酸酯-氨基酸是将10mmol二异丙基亚磷酸酯与5ml CCl4的混合液滴入由10mmol氨基酸、5ml乙醇、10ml H2O及10ml三乙胺组成的混合液中，反应后除去有机溶剂，加入10ml水，用有机溶剂洗涤，弃去有机相，将水相酸化至pH＝3～4，用乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗涤，除去有机溶剂，得到产品，具体步骤的说是在冰盐浴及搅拌下，将10mmol DIPPH与5ml CCl4的混合液滴入由10mmol氨基酸、5ml乙醇、10ml H2O及10ml三乙胺组成的混合液中，约10分钟滴完，继续于冰浴下搅拌反应30分钟，室温下反应20分钟，在35℃旋蒸除去有机溶剂，然后加入10ml水，用石油醚、乙醚、乙酸乙酯各洗涤两次，弃去有机相。冰盐浴下用1N HCl将水相酸化至pH＝3～4，用乙酸乙酯萃取三次，合并萃取液，用饱和食盐水洗涤2次，无水硫酸镁干燥，于35℃旋蒸除去有机溶剂，再用油泵抽干得到产品。若产品不纯，固体可用乙酸乙酯～石油醚(30～60℃)重结晶，油状液体可用柱层析纯化。所述氨基酸甲酯盐酸盐的合成方法有两种，一种是50mmol氨基酸和50ml甲醇，搅拌下通入HCl气体直至固体全部溶解，反应后减压浓缩至干，残余物用甲醇-乙醚重结晶，得到产品。另一种是向-10℃的50ml甲醇中滴加二氯亚砜13ml，搅拌加入50mmol L-氨基酸，室温下搅拌反应，减压旋蒸至干，残余物用甲醇-乙醚重结晶，得到产品。这两种方法具体的说，第一种为在100ml烧瓶中加入50mmol L-氨基酸和50ml干燥甲醇，搅拌下通入干燥HCl气体直至固体全部溶解，室温放置过夜。减压浓缩至干，再加入适量甲醇，反复浓缩三次以除去HCl，残余物用甲醇～乙醚(30～60℃)重结晶，得到产品；第二种为在100ml烧瓶中加入干燥甲醇50ml，冰盐浴冷却至-10℃，滴加二氯亚砜13ml。滴加过程中维持温度在0℃以下，继续搅拌10分钟，加入50mmol L-氨基酸。半小时后撤去冰浴，室温下搅拌反应，用TLC(硅胶GF254，展开剂叔丁醇∶乙醇∶25％氨水∶水＝5∶6∶1∶3)跟踪监测，直至原料点消失。减压旋蒸至干，再加入适量甲醇，反复浓缩三次以除去HCl，残余物用甲醇～乙醚(30～60℃)重结晶，得到产品。本专利技术的第三个目的是提供一种治疗癌症的药物。本专利技术提供的治疗癌症的药物，其活性成分是二异丙氧基磷酰化二肽甲酯类化合物。需要的时候，在上述药物中还可以加入一种或多种药学上可接受的载体。所述载体包括药学领域常规的稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂等，必要时还可以加入香味剂、甜味剂等。本专利技术的药物可以制成注射液、片剂、粉剂、粒剂、胶囊、口服液、膏剂、霜剂等多种形式。上述各种剂型的药物均可以按照药学领域的常规方法制备。本专利技术药物的用量一般为20-50mg/kg体重。二异丙氧基磷酰化二肽甲酯类化合物可以通过诱导肿瘤细胞凋亡，达到抑制肿瘤细胞增殖，治疗癌症的目的。实验表明，二异丙氧基磷酰化二肽甲酯类化合物具有细胞增殖抑制活性，例如，(DIPP-L-L本文档来自技高网...

【技术保护点】
二异丙氧基磷酰化二肽甲酯类化合物，由通式（Ⅰ）所示的结构单元构成，其中ａａ↓［１］、ａａ↓［２］为氨基酸残基。＊＊＊（Ⅰ）。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：蒋宇扬，杜伟，牛艳玲，曹胜利，赵玉芬，
申请(专利权)人：清华大学，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]