色谱柱和蛋白A免疫吸附介质专用溶液配制方法技术

一种色谱柱和蛋白Ａ免疫吸附介质专用溶液，其特征在于：它包括贮存液、洗脱液、平衡液和预冲液，所述贮存液为０．０１％～１％的叠氮钠水溶液，所述洗脱液为ｐＨ１．０～ｐＨ３．０的柠檬酸－氯化钠溶液，所述平衡液为ｐＨ６．４～ｐＨ７．４的磷酸盐缓冲液，所述预冲液为ｐＨ７．０的０．９％的氯化钠溶液。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物医学工程领域。具体涉及一套色谱分析柱和免疫吸附介质使用溶液的配制方法。
技术介绍
葡萄球菌蛋白A(Staphlococal Protein A，SPA)是一种从金黄色葡萄球菌细胞壁分离的蛋白质。SPA分子包括A、B、C、D、E五个同源结构域，每个结构域都可以和IgG自主结合。由于葡萄球菌蛋白A具有与大多数哺乳动物IgG的Fc片段结合的能力，因此被广泛地应用于单克隆抗体、多克隆抗体的分离纯化，并且已应用到医学治疗中对体内抗体水平过高的各种自身免疫性疾病患者进行免疫吸附治疗。目前有的产品包括Sepharose-rPA和Sepharose-SPA。这两种免疫吸附介质在吸附呈饱和状态后即不能再利用，我们的专利技术针对这两种色谱的分析材料和蛋白A免疫吸附介质，提供一套更为合理、简捷的再生利用的专用溶液的配制方法。
技术实现思路
本专利技术提供一套色谱柱和蛋白A免疫吸附介质专用溶液，它包括储存液、洗脱液、平衡液和预冲液，所述储存液为0.01％～1％的叠氮钠水溶液，所述洗脱液为PH1.0～PH3.0的柠檬酸-氯化钠溶液，所述平衡液为PH6.4～PH7.4的磷酸盐缓冲液，所述预冲液为PH7.0的0.9％的氯化钠溶液。平衡液即PH6.4～PH7.4的磷酸盐缓冲液的配制方法为每升平衡液中含柠檬酸25～33克，乙酸钠54.5～60克，氯化钠49～54克，磷酸氢二钠29.1克，磷酸二氢钾2.6克。洗脱液即PH1.0～PH3.0的柠檬酸-氯化钠溶液的配制方法为每升注射用生理盐水中含6.6～10克柠檬酸，调节PH至1.0～3.0。具体实施例方式1、实施例一色谱柱和蛋白A免疫吸附介质专用溶液的具体配制方法如下(1)贮存液(0.01％～1％，1L)称取0.1g～10g叠氮钠溶于1升注射用水中。(2)平衡液(pH6.4～pH7.4，1L)称取柠檬酸三钠25g～33g；乙酸钠54.5g～60g；氯化钠49g～54g；磷酸氢二钠29.1g；磷酸二氢钾2.6g。定容至1L，调节pH至6.4～7.4。(3)洗脱液(pH1.0～pH3.0，1L)称取6.6g～10g柠檬酸溶解于1L注射用生理盐水中，调节pH至1.0～pH3.0。(4)预冲液(1L)选用0.9％注射用生理盐水。将贮存液注入色谱分析柱或蛋白A免疫吸附介质中，可以保证色谱柱和蛋白A免疫吸附介质在2～8℃环境中保存1年。色谱柱和蛋白A免疫吸附介质吸附性能没有降低。该贮存液功能是稳定色谱柱和蛋白A免疫吸附介质中的SPA和rPA，另一方面保证其中的无菌环境。试验表明0.01％叠氮钠可以有效杀灭细菌和酵母，并且抑制真菌的生长。将黑曲霉(A.niger)、大肠杆菌(E.coli.)、白色念珠菌(C.albicans)、绿脓杆菌(P.aeruginosa.)、金黄色葡萄球菌(S.aureus)在0.1％叠氮钠培养，接种密度为105/mL培养，在0，12，24小时和4，7，14，21和28天对菌群密度进行检测。0.01％叠氮钠可以直接杀灭其中的大肠杆菌和金黄色葡萄球菌，并且有效降低其他菌群的生长密度。预冲液主要功能是将色谱柱和蛋白A免疫吸附介质中的贮存液中冲洗掉。同时确保不破坏色谱柱和蛋白A免疫吸附介质结构，为色谱柱和蛋白A免疫吸附介质将要进行的吸附工作做准备。由于0.9％NaCl与人体内血液环境的pH环境，离子强度接近，进行免疫吸附治疗操作时，不会因为预冲液的使用失误引起病人的危险。洗脱液的目的是通过降低pH值使色谱柱和免疫吸附介质中的SPA和IgG或IgG复合物的结合力下降以达到洗脱目的。PH1.0～pH3.0的柠檬酸-氯化钠可以在较短的时间内完成洗脱。同时不会对SPA的结构有很大的影响，保证色谱柱和免疫吸附介质的高效再利用。本专利技术方案的平衡液是pH6.4～pH7.4的磷酸盐缓冲液。(1)选用此缓冲液可以在较短时间内平衡SPA的带电基团，使其迅速恢复活性；(2)同时不会对SPA和其载体的结构有影响；(3)同时此平衡液模拟了人体液内环境的离子强度和pH值，加强了操作的安全性。2、实施例二色谱柱和蛋白A免疫吸附介质专用溶液的具体配制方法如下(1)贮存液(0.1％，1L)称取1g叠氮钠溶于1升注射用水中。(2)平衡液(pH7.4，1L)称取柠檬酸三钠25g；乙酸钠60g；氯化钠49g；磷酸氢二钠29.1g；磷酸二氢钾2.6g。定容至1L，调节pH至7.4。(3)洗脱液(pH3.0，1L)称取6.6g柠檬酸溶解于1L注射用生理盐水中，调节pH至3.0。(4)预冲液(1L)选用0.9％注射用生理盐水。使用本实施例的贮存液0.1％叠氮钠贮存免疫吸附介质SPA-Sepharose在2～8℃条件下1年，SPA-Sepharose活力保持100％，未发生微生物污染。选用pH7.4平衡液，pH3.0洗脱液和0.9％氯化钠溶液做预冲液，经过预冲→洗脱→平衡过程，循环使用999次，没有发生SPA-Sepharose介质活力下降，没有发生SPA脱落。3、实施例三色谱柱和蛋白A免疫吸附介质专用溶液的具体配制方法如下(1)贮存液(0.01～1％，1L)称取1g～10g叠氮钠溶于1升注射用水中。(2)平衡液(pH6.4，1L)称取柠檬酸三钠33g；乙酸钠54.5g；氯化钠49g；磷酸氢二钠29.1g；磷酸二氢钾2.6g。定容至1L，调节pH至6.4。(3)洗脱液(pH1.0，1L)称取10g柠檬酸溶解于1L注射用生理盐水中，调节pH至1.0。(4)预冲液(1L)选用0.9％注射用生理盐水。权利要求1.一种色谱柱和蛋白A免疫吸附介质专用溶液，其特征在于它包括贮存液、洗脱液、平衡液和预冲液，所述贮存液为0.01％～1％的叠氮钠水溶液，所述洗脱液为pH1.0～pH3.0的柠檬酸—氯化钠溶液，所述平衡液为pH6.4～pH7.4的磷酸盐缓冲液，所述预冲液为pH7.0的0.9％的氯化钠溶液。2.根据权利要求1所述色谱柱和蛋白A免疫吸附介质专用溶液，其特征在于所述平衡液即pH6.4～pH7.4的磷酸盐缓冲液的配方为每升平衡液中含柠檬酸钠25～33克，乙酸钠54.5～60克，氯化钠49～54克，磷酸氢二钠29.1克，磷酸二氢钾2.6克。3.根据权利要求1所述色谱柱和蛋白A免疫吸附介质专用溶液，其特征在于所述洗脱液即pH1.0～pH3.0的柠檬酸—氯化钠溶液的配制方法为每升注射用生理盐水中含6.6～10克柠檬酸，调节pH至1.0～3.0。全文摘要本专利技术属于生物医学工程
本专利技术针对色谱柱和免疫吸附介质的特征，为之提供了一套贮存、预冲、洗脱、平衡的溶液，以达到最大限度地重复利用色谱柱和免疫吸附介质，使之产生更为高效的分析结果和使用效果。文档编号C07K1/00GK1544459SQ20031010867公开日2004年11月10日 申请日期2003年11月12日 优先权日2003年11月12日专利技术者肖海军 申请人:浙江科锐生物科技有限公司本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：肖海军，
申请(专利权)人：浙江科锐生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：