一种用于预防和治疗阿尔兹海默氏病的具有免疫原性的肽组合物制造技术

本发明专利技术涉及一种组合物，其包含用于预防和治疗阿尔兹海默氏病的肽免疫原。更具体地，该肽免疫原包含一个主要的功能／调控位点，与具有多个ＩＩ类ＭＨＣ结合基序的辅助Ｔ细胞表位（Ｔｈ）连接的淀粉样蛋白β（Ａβ）肽的Ｎ－末端片段。该肽免疫原引发抗Ａβ肽的主要功能／调控位点的定点免疫反应并产生抗体，所述抗体与阿尔兹海默氏病患者脑中形成的可溶性Ａβ＃－［１－４２］肽及淀粉样蛋白斑高度交叉反应。所产生的与可溶性Ａβ＃－［１－４２］肽交叉反应的抗体促进原纤维解聚并抑制原纤维聚集，导致“可溶性Ａβ衍生的毒素”的免疫中和；而且与淀粉样蛋白斑交叉反应，促进从脑中清除这些斑块。因此，本发明专利技术的包含该肽免疫原的组合物可用于预防和治疗阿尔兹海默氏病。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种包含肽免疫原的用于预防和治疗阿尔兹海默氏病的组合物。更具体地，该肽免疫原包含一个主要的功能/调控位点，一个与具有多个二类MHC结合基序的辅助T细胞表位(Th)连接的淀粉样蛋白β(Aβ)肽的N末端片段。该肽免疫原引发针对Aβ肽的主要功能/调控位点的定点免疫反应并产生抗体，所述抗体与在阿尔兹海默氏病患者脑中形成的可溶性Aβ1-42肽及淀粉样蛋白斑高度交叉反应。引发的对可溶性Aβ1-42肽交叉反应的抗体促进原纤维解聚，抑制原纤维聚集，导致“可溶性Aβ衍生的毒素”的免疫中和；而且与淀粉样蛋白斑交叉反应，促进从脑中清除这些斑块。因此，本专利技术的包含该肽免疫原的组合物可用于预防和治疗阿尔兹海默氏病。
技术介绍
阿尔兹海默氏病(AD)是一种慢性神经变性疾病，其特征表现为患者丧失认知能力并具有严重的行为异常，从而导致患者的最终死亡。目前在美国有250万到400万AD患者，全世界有1700万到2500万AD患者。该病在西方国家已经成为继心脏病、癌症和中风之后第四位导致死亡的疾病。ARICEPT是一种乙酰胆碱酯酶抑制剂，已被FDA批准用于减缓阿尔兹海默氏病患者的恶化速率。然而，该药仅对限定的时期和某些患者有效。至今还没有明确的治疗或治愈该破坏性疾病。两种微观的沉淀物即神经原纤维缠结(NFT)和老年淀粉样蛋白斑由Alois Alzheimer鉴定为该病的病理标记。神经原纤维缠结由两条10nm宽称为成对螺旋丝(PHFs)的细丝相互缠绕而成，其主要组成部分是磷酸化的tau蛋白。tau蛋白262位氨基酸丝氨酸的磷酸化是一个关键步骤，导致tau蛋白生理上的功能紊乱。PHFs存在于胞内，并且在许多异常的树突和轴突过程中或组成老年淀粉样蛋白斑外围的神经突中有发现。老年淀粉样蛋白斑由横截面面积高达150μm的紊乱的神经嗜细丝(neurophil filament)和一个淀粉样沉积物的胞外核组成。脑淀粉样蛋白斑在超微结构上不同于PHFs，由4-8nm宽的不成对缠绕在一起的细丝组成。斑核由最初命名为A4的相对分子量(M)约为4,000的肽聚集物组成(Masters等.，Proc Natl Acad Sci USA，1985，824245-4249)。现在被重新命名为淀粉样蛋白β肽(或Aβ1-42)的A4的部分氨基酸序列显示与从阿尔兹海默氏病或唐氏综合症的患者脑血管中分离的淀粉样β蛋白相似(Glenner和Wong，Biochem Biophys Res Comm，1984；120885-890；1221131-1135)。因许多原因已推测Aβ1-42与AD相关。首先，在外周淀粉样变性病中，如初级轻链疾病或次级AA淀粉样变性，大量的淀粉样蛋白负荷与组织和器官功能紊乱强烈相关。第二，淀粉样蛋白斑的密度与AD中XX痴呆值(premortem dementia score)正相关。第三，Aβ1-42沉淀物是AD和相关疾病，如唐氏综合症中最早出现的神经病理标志物，比NFT的形成早20-30年。第四，β-淀粉样变性对AD和相关疾病是相对特异的。第五，Aβ1-42对神经元有毒性作用(Yankner等.，Science，1990；250279-282)。最后，在淀粉样前体蛋白(APP)结构基因中的错义突变导致家族性AD的早期发作(Goate等.，Nature，1991；349704-706；Mullan等.，NatureGenetics，1992；1345-347)。显然，这样的一个突变造成Aβ1-42的惊人的超量产生(Citron等.，Nature，1992；360672-674)。1987年，Kang等(Nature，1987；325733-737)和其他三个研究组(见1987 Anderton的现状文献(status reports)，Nature，1987；325658-659和Barnes，Science，1987；235846-847)独立地克隆到编码Aβ1-42的基因。该基因编码695个氨基酸残基的MW约为79,000的蛋白质，该蛋白现在被命名为淀粉样前体蛋白(APP)，并事实上在所有的组织中都有表达。APP至少有五种剪接变异体，其中四种包含β-淀粉样蛋白肽序列。在家族性形式的AD中已涉及四种基因。其中的三个基因，βAPP，presenilin 1和presenilin 2发生突变时，造成常染色体显性早期形式的AD。第四个基因载脂蛋白E具有天然存在的多态形式，ApoE4，它代表该病发展的一个主要遗传危险因子。可获得的证据支持下述观点几个独特基因的改变可导致Aβ1-42产生和其清除之间的长期不平衡，从而引起前42个残基和随后40个残基肽聚集成细胞毒素斑。已有证据确切表明这些四个基因每个的缺陷通过(1)增加Aβ1-42肽的产生和/或沉淀或(2)通过减少ApoE4从组织中的清除来倾向于产生AD表型(Selkoe，JBiol Chem，1996；27118295-18298)。从可获得的数据显示，似乎聚集的而非单体形式的Aβ1-42肽能在体外通过一系列推测的相关机制诱导细胞功能紊乱和死亡。这些包括氧化损伤(Thomas等.，Nature，1996；380168-171；Behl等.，Cell，1994；77817-827)，胞内钙稳态改变(Arispe等.，Proc Natl Acad Sci USA，1993；90567-571)和细胞骨架重组(Busciglio等.，Neuron，1995；14879-888)。即使级联反应假说仍处在激烈的争论中，对淀粉样蛋白诱导的级联反应的一些基本步骤已形成了足够的认识。目前正充分开展鉴定可抑制淀粉样蛋白诱导的级联反应的一个或另一个步骤的小分子的药学方法。特别感兴趣的是以下两个方法试图通过降低Aβ1-42肽从神经细胞和神经胶质细胞中的分泌来干扰Aβ1-42肽的聚集，或抑制这些胞外聚集物作用于神经细胞和神经胶质细胞以及它们的产生过程的毒性。第三种方法尝试控制似乎由聚集的Aβ1-42引发的特定炎性反应(包括小胶质细胞性刺激，激活典型的补体级联反应，细胞因子释放和反应性星形细胞增生)，可能证明对阿尔兹海默氏病患者是有利的。除了上述药学方法对AD进行干涉外，也已尝试进行了免疫干涉。Soloman等(Proc Natl Acad.Sci，1996；93452-455；Proc Natl Aca.Sci，1997；944109-4112)表明直接针对人Aβ1-42肽的N末端区一个位点的三种特异单克隆抗体可以在各种程度上与预先形成的原纤维结合，从而导致它们解聚，并抑制它们的神经毒性作用。而且还发现这些抗体防止纤维性Aβ1-42的形成。Solomon等(WO 01/18169)也尝试制备噬菌体展示的Aβ1-42肽的表位，并通过腹腔注射将噬菌体展示的表位或包含该表位的肽对小鼠给药，以引发针对Aβ1-42肽的抗体。通过大鼠嗜铬细胞瘤(phenochromocytoma)的体外实验表明，以1∶5稀释的抗血清防止Aβ1-42的神经毒性。1∶5和1∶20稀释的抗血清也表明由于广泛破坏纤维形态体外破坏Aβ的纤维结构。然而，在第一次注射中所用的佐剂是弗氏完全佐剂，而第二次注射中所使用的是弗氏不完全佐剂。所用本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种长约２０－１００个氨基酸的肽免疫原，包含：　　　　（ｉ）一种选自ＳＥＱ　　ＩＤ　　Ｎｏｓ：１－６４的辅助Ｔ细胞（Ｔｈ）表位；　　　　（ｉｉ）一个Ａβ↓［１－４２］肽Ｎ末端片段，ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：６５，由１０－２８个氨基酸残基组成，其中每个片段包含Ａβ↓［１－４２］肽或Ａβ↓［１－４２］肽Ｎ末端片段的免疫功能类似物的氨基酸残基１；和　　　　（ｉｉｉ）任选地，一个由至少一种氨基酸组成的间隔臂以隔离免疫结构域。

【技术特征摘要】
...

【专利技术属性】
技术研发人员：王长怡，
申请(专利权)人：美国联合生物医学公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]