包含纤连蛋白ＥＤ－Ｂ结构域的特异抗体的缀合物和其在检测和治疗肿瘤中的应用制造技术

本发明专利技术涉及用结合放射性核素的肽诊断和治疗肿瘤的方法。所述肽包含纤连蛋白的额外结构域Ｂ（ＥＤ－Ｂ）的抗原结合位点。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及使用结合放射性核素的新肽诊断和治疗肿瘤的新方法。
技术介绍
肿瘤如果不形成新的血管(血管发生)其重量在一定程度上不能再增加，针对许多肿瘤已经报道了微血管密度与肿瘤侵染力之间的关系(Folkman(1995)，Nature Med.1，27-31)。另外，血管发生参与导致失明的大多数眼部疾病(Lee等，Surv.Ophthalmol.43，245-269(1998)；Friedlander，M.等，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.93，9764-9769(1996))。能选择性定向血管发生标记物的分子产生诊断和治疗肿瘤及其它的特征在于血管增殖，如糖尿病视网膜病变及年龄相关性黄斑变性的疾病的临床机会。血管发生的标记物在与肿瘤相关血管的大多数侵润性实体肿瘤中表达，并由此易于受静脉内注入的特异性结合剂影响(Pasqualini等，(1997)，Nature Biotechnol.，15，542-546；Neir等(1997)，Nature Biotechnol.15，1271-1275)。定向闭塞新血管系可使肿瘤梗死及坏死(O′Reilly等(1996)，Nature Med.2，689-692；Huang等(1997)，Science 275，547-550)。纤连蛋白的ED-B结构域，是在小鼠，大鼠和人体内相同的一个91个氨基酸的序列，通过选择性剪接插入纤连蛋白分子中，特异性聚集在新血管结构周围(Castellani等(1994)，Int.J.Cancer 59，612-618)，可以作为分子干涉的目标。目前通过荧光技术确实已经示出抗ED-B单链Fv抗体片段(scFv)选择性聚集在携带肿瘤的小鼠的肿瘤血管周围，抗体亲和性指导了定向过程(Neri等(1997)，Nature Biotechnol.15，1271-1275；WO 97/45544)。另外，具有亚纳摩尔解离常数的特异结合纤连蛋白ED-B结构域的抗体和抗体片段及其放射标记的衍生物于WO 99/58570中描述。这些高亲和性人抗体片段之一称为L19的125I标记的抗体片段的生物分布已经在携带肿瘤的小鼠中加以研究(Tarli等，Blood，第94卷，No.1(1999)，p.192-198)。包含L19抗体的放射标记的缀合物及其在检测和处理血管发生中的应用于WO 01/62800中揭示。在甲醇酵母(Pichia pastoris)中与纤连蛋白的B同种型的ED-B结构域结合的功能化单链Fv抗体片段的重组生产已经加以描述(Marty等，Protein Expression and Purification 21，156-164(2001))。另外，用99mTc通过C末端半胱氨酰肽放射标记scFv抗体片段由George等，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.，第92卷pp.8358-8362，1995，及Verhaar等，J.Nuc.Med.，Vol.37(5)，pp.868-872，1996加以描述。然而，临床上仍需要提供具有改良的药物动力学性质的抗体片段，而且其可易于用放射性同位素标记，例如用锝或铼标记，因为这些放射性核素特别适合于放射性药物。专利技术目的本专利技术的一个目的是提供具有改良的药物动力学性质的抗体片段，特别是具有靶特异性和/或体内稳定性，并可以易于结合放射性核素例如锝或铼。专利技术概述本专利技术描述了包含一种肽的化合物，所述肽包含aa)纤连蛋白的额外结构域B(extra domain B，ED-B)的抗原结合位点的序列，包含表1所示互补决定区HCDR3和/或LCDR3或其变体，所述变体缺失，插入和/或取代HCDR3区的最多5个氨基酸及LCDR3区的最多6个氨基酸，其与SEQ ID NO1所示肽具有相同功能；ab)纤连蛋白的额外结构域B(ED-B)的抗原结合位点的序列，其包含表1所示互补决定区HCDR1，HCDR2，HCDR3，LCDR1，LCDR2和LCDR3及其变体，所述变体缺失，插入和/或取代HCDR1区的最多3个氨基酸、HCDR2区的最多8个氨基酸、HCDR3区的最多5个氨基酸、LCDR1区的最多6个氨基酸、LCDR2区的最多4个氨基酸及LCDR3区的最多6个氨基酸，其与SEQ ID NO1所示肽具有相同功能；或者ac)SEQ ID NO1(L19)的序列或SEQ ID NO1的变体，所述变体缺失，插入和/或取代最多30个氨基酸，其与SEQ IDNO1所示肽具有相同功能；及ba)一个氨基酸序列Xaa1-Xaa2-Xaa3-Cys(SEQ ID NO2)，其中Xaa1，Xaa2和Xaa3均单独代表任何天然发生的氨基酸，或者bb)一个氨基酸序列Xaa1-Xaa2-Xaa3-Cys-Xaa4(SEQ ID NO3)，其中Xaa1，Xaa2，Xaa3和Xaa4均单独代表天然发生的氨基酸，或者bc)一个氨基酸序列(His)n(SEQ ID NO4)，其中n表示4-6之间的一个整数，其中aa)，ab)或ac)的C末端通过一个肽键与SEQ ID NO2，SEQ ID NO3或SEQ ID NO4之一的序列的N末端结合。所述化合物优选是单链抗体片段，特别是scFv片段。另外，所述化合物优选与放射性同位素缀合，例如锝放射性同位素如94mTc，99mTc，铼如186Re，188Re，或其它同位素如203Pb，67Ga，68Ga，43Sc，44Sc，47Sc，110mIn，111In，97Ru，62Cu，64Cu，67Cu，68Cu，86Y，88Y，90Y，121Sn，161Tb，153Sm，166Ho，105Rh，177Lu，72As及18F。本专利技术还描述了一种药物组合物，其包含作为活性剂的上述化合物及生理学合适的佐剂，稀释剂和/或载体。本专利技术还描述了一种肽的应用，所述肽包含aa)纤连蛋白的额外结构域B(ED-B)的抗原结合位点的序列，包含表1所示互补决定区HCDR3和/或LCDR3或其变体，所述变体缺失，插入和/或取代HCDR3区的最多5个氨基酸及LCDR3区的最多6个氨基酸，其与SEQ ID NO1所示肽具有相同功能；ab)纤连蛋白的额外结构域B(ED-B)的抗原结合位点的序列，其包含表1所示互补决定区HCDR1，HCDR2，HCDR3，LCDR1，LCDR2和LCDR3及其变体，所述变体缺失，插入和/或取代HCDR1区的最多3个氨基酸、HCDR2区的最多8个氨基酸、HCDR3区的最多5个氨基酸、LCDR1区的最多6个氨基酸、LCDR2区的最多4个氨基酸及LCDR3区的最多6个氨基酸，其与SEQ ID NO1所示肽具有相同功能；ac)SEQ ID NO1(L19)所示序列或者SEQ ID NO1的变体，所述变体缺失，插入和/或取代最多30个氨基酸并与SEQ IDNO1所示肽具有相同功能，及ba)一个氨基酸序列Xaa1-Xaa2-Xaa3-Cys(SEQ ID NO2)，其中Xaa1，Xaa2和Xaa3均单独代表任何天然发生的氨基酸，或者 bb)一个氨基酸序列Xaa1-Xaa2-Xaa3-Cys-Xaa4(SEQ ID NO3)，其中Xaa1，Xaa2，Xaa3和Xaa4均单独代表任何天然发生的氨基本文档来自技高网...

【技术保护点】
包含一种肽的化合物，所述肽包含：ａａ）纤连蛋白的额外结构域Ｂ（ＥＤ－Ｂ）的抗原结合位点，其包含表１所示互补决定区ＨＣＤＲ３和／或ＬＣＤＲ３或其变体，所述变体缺失，插入和／或取代ＨＣＤＲ３区的最多５个氨基酸及ＬＣＤＲ３区的最多６个氨基酸，其与ＳＥＱＩＤＮＯ：１所示肽具有相同功能；ａｂ）纤连蛋白的额外结构域Ｂ（ＥＤ－Ｂ）的抗原结合位点，其包含表１所示互补决定区ＨＣＤＲ１，ＨＣＤＲ２，ＨＣＤＲ３，ＬＣＤＲ１，ＬＣＤＲ２和ＬＣＤＲ３及其变体，所述变体缺失，插入和／或取代ＨＣＤＲ１区的最多３个氨基酸、ＨＣＤＲ２区的最多８个氨基酸、ＨＣＤＲ３区的最多５个氨基酸、ＬＣＤＲ１区的最多６个氨基酸、ＬＣＤＲ２区的最多４个氨基酸及ＬＣＤＲ３区的最多６个氨基酸，其与ＳＥＱＩＤＮＯ：１所示肽具有相同功能；或者ａｃ）ＳＥＱＩＤＮＯ：１（Ｌ１９）的序列或ＳＥＱＩＤＮＯ：１的变体，所述变体缺失，插入和／或取代最多３０个氨基酸，其与ＳＥＱＩＤＮＯ：１所示肽具有相同功能；及ｂａ）一个氨基酸序列Ｘａａ↓［１］－Ｘａａ↓［２］－Ｘａａ↓［３］－Ｃｙｓ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２），其中Ｘａａ↓［１］，Ｘａａ↓［２］和Ｘａａ↓［３］均单独代表任何天然发生的氨基酸，或者ｂｂ）一个氨基酸序列Ｘａａ↓［１］－Ｘａａ↓［２］－Ｘａａ↓［３］－Ｃｙｓ－Ｘａａ↓［４］（ＳＥＱＩＤＮＯ：３），其中Ｘａａ↓［１］，Ｘａａ↓［２］，Ｘａａ↓［３］和Ｘａａ↓［４］均单独代表任何天然发生的氨基酸，或者ｂｃ）一个氨基酸序列（Ｈｉｓ）↓［ｎ］（ＳＥＱＩＤＮＯ：４），其中ｎ表示４－６之间的一个整数，其中ａａ），ａｂ）或ａｃ）的Ｃ末端通过一个肽键与ＳＥＱＩＤＮＯ：２，ＳＥＱＩＤＮＯ：３或ＳＥＱＩＤＮＯ：４之一的序列的Ｎ末端结合。...

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：克里斯托夫斯特凡希尔格，迪特马尔贝恩多夫，鲁德格尔丁克尔博格，迪特尔莫斯迈尔，乔瓦尼内里，
申请(专利权)人：舍林股份公司，
类型：发明
国别省市：DE[德国]