The present invention relates to medical immunology fluorescence immunochromatographic technology field, in particular to a progesterone assay kit and a preparation method thereof, a test card, which is characterized in that the test card followed by the bottom is provided with a PVC plate, a sample pad, combination pad, nitrocellulose membrane and absorbent pad, which combined with the adsorption pad rare earth Eu
【技术实现步骤摘要】
孕酮测定试剂盒及制作方法
:本专利技术涉及医学免疫学中荧光免疫层析
,包括蛋白交联技术、膜层析技术、标记免疫分析技术等。具体地说是一种能够快速准确的对血清、血浆和全血等样品中孕酮进行定量分析的孕酮测定试剂盒及制作方法。
技术介绍
:孕酮(Progesterone,PROG)是一种含21碳的固醇类激素,为类固醇激素合成过程中的中间代谢产物。由胆固醇经孕烯醇酮通过异构酶转化而成。在非妊娠妇女,卵巢中的卵泡膜细胞产生孕酮,妊娠期间,孕酮则主要由胎盘合体滋养细胞层分泌,故血中孕酮水平主要与胎盘重量及血液灌注量相关。孕早期上升较慢,13周后增快,足月时达高峰。在血中,孕酮主要与皮质类固醇结合蛋白(CBG)及白蛋白相结合,血液中绝大部分孕酮为结合型,极少数为游离型。孕酮主要在肝脏降解,被还原成孕二醇,孕二醇再与硫酸或葡萄糖醛酸结合后经肾排出。孕酮对调节月经周期和维持妊娠具有重要的生理作用,可促进子宫内膜分泌期的转化,为受精卵着床做准备;松弛子宫肌,降低对前列腺素和催产素的反应性;抑制输卵管节律性收缩。孕酮还有促乳腺腺泡增生,增加能量代谢,升高基础体温,促进水钠排除的作用。孕酮对下丘脑-垂体系统具有正、负反馈作用,可调控垂体促性腺激素的合成和分泌。排卵前小剂量孕酮协同E3诱发排卵前LH高峰出现,排卵后大剂量孕酮对下丘脑-垂体系统则呈现负反馈作用。血液中的女性孕酮几乎都是由黄体或胎盘所产生;男性孕酮水平很低,主要由肾上腺皮质产生。孕酮是一个重要的激素,它不仅在月经周期的调节中发挥重要作用,在维持妊娠中也是必不可少的。孕酮在月经周期后期使子宫黏膜内腺体生长,子宫充血, ...
【技术保护点】
一种孕酮测定试剂盒,设有试纸卡,其特征在于所述试纸卡由下至上依次设有:PVC板、样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫,其中结合垫上吸附有稀土Eu
【技术特征摘要】
1.一种孕酮测定试剂盒,设有试纸卡,其特征在于所述试纸卡由下至上依次设有:PVC板、样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫,其中结合垫上吸附有稀土Eu3+荧光微球标记的抗孕酮单克隆抗体-微球偶联复合物,所述稀土荧光微球的直径为100-250nm,稀土荧光微球含稀土镧系元素中的一种或几种,在基态下稳定,在300-400nm的激发光源作用下发射出波长范围为550-650nm的荧光;所述单克隆抗体为纯化后混合的单克隆抗体,来源于针对2-6个不同的孕酮抗原表位的单克隆抗体细胞株。2.根据权利要求1所述的一种孕酮测定试剂盒,其特征在于所述结合垫的稀土荧光微球的直径是120-150nm;结合垫上稀土荧光微球标记的抗体来源于针对2个不同抗原表位的单克隆细胞细胞株。3.根据权利要求1所述的一种孕酮测定试剂盒,其特征在于所述结合垫采用如下步骤制得:将玻璃纤维膜浸泡于150mMTris-HCL处理液中(含1.0%TritonX-100,2.5%BSA,pH7.4),4℃浸泡2小时,然后取出37℃烘箱烘干4小时,备用,将玻璃纤维膜放在Bio-DotXYZ3050三维喷点平台上,用Bio-JetQuanti300非接触式微定量喷头将稀土Eu3+荧光微球标记的抗孕酮单克隆抗体偶联复合物喷到玻璃纤维膜,37℃烘干1小时后制得。4.根据权利要求1所述的一种孕酮测定试剂盒,其特征在于结合垫上的所述稀土荧光微球标记的孕酮单克隆抗体采用如下步骤制得:步骤1:单克隆抗体细胞株的获得:用孕酮纯品免疫小鼠,采用标准的单克隆抗体制备方法制备特异性高亲和力的单克隆抗体细胞株,对所获得的单抗细胞株进行配对筛选,根据配对结果和亲和力数据优选出用于试剂盒的单抗细胞株;步骤2:单克隆抗体的制备:采用标准的腹水生产工艺制备并纯化孕酮单克隆抗体,分装后保存于-20℃备用;步骤3:稀土荧光微球的醛基化:取5mg稀土荧光微球,用20mM...
【专利技术属性】
技术研发人员:王有志,刘衍亮,陈萍萍,宋璐琳,王文亮,李红江,
申请(专利权)人:威海纽普生物技术有限公司,
类型:发明
国别省市:山东,37
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