The present invention designs a rapid chromatography test strip of Staphylococcus aureus based on quantum dots, microspheres and antibiotics. The quantum dot microsphere is a microsphere formed by a polymer to contain a plurality of quantum dots. The antibiotic has a certain binding effect with the cell wall of Staphylococcus aureus. The rapid immunochromatographic strip test for porous membrane material, antibiotic BSA conjugates immobilized on the quantum dots with Staphylococcus aureus and antibody modified microspheres to form a sandwich structure, realize the detection by means of portable quantum dot fluorescence detector. By using a low cost small molecule antibiotics and quantum dots, good stability, strong signal of the microspheres, not only to achieve a single combination of multilocus bacteria, improve detection sensitivity, while eliminating the need for another antibody, which greatly reduces the detection cost. The construction process of the test strip and the detection process do not need expensive instruments and reagents, and the operation is simple and the sensitivity is high.
【技术实现步骤摘要】
一种基于量子点微球和抗生素的金黄色葡萄球菌快速层析试纸条
本专利技术属于生物化学检测领域,涉及一种基于量子点微球和抗生素的金黄色葡萄球菌快速层析试纸条。
技术介绍
金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)是人类的一种重要病原菌,隶属于葡萄球菌属(Staphylococcus),是革兰氏阳性菌的代表,有“嗜肉菌”的别称,可引起局部化脓感染,也可引起肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等,甚至败血症、脓毒症等全身感染。金黄色葡萄球菌在自然界中无处不在,空气、水、灰尘及人和动物的排泄物中都可找到。因此,食品受到污染的机会很多。美国疾病控制中心报告,由金黄色葡萄球菌引起的感染占第二位,仅次于大肠杆菌。金黄色葡萄球菌肠毒素是个世界性卫生难题,在美国由金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒,占整个细菌性食物中毒的33%,加拿大则更多,占到45%。中国金黄色葡萄球菌引起的食物中毒事件也时有发生,比如2001年4月12日,无锡市锡山区所辖小学、幼儿园因课间加餐饮用袋装牛奶饮料导致食物中毒事件。传统金黄色葡萄球菌等病原微生物的检测方法为琼脂培养法,其主要是依据病原微生物的形态特征和生理性状,进行分离、培养及一系列生化反应,整个过程通常需要两到三天,且需要专业的操作人员,程序繁琐。这对货架寿命较短的食品在产品卫生状况方面的评估作用不大,难以满足食品生产厂家特别是出口厂家的检测期较短的需求。近年来,不断发展的免疫荧光技术、酶联免疫技术、放射免疫技术等免疫学方法已逐步应用于金黄色葡萄球菌等病原微生物的检测,但仍存在操作繁琐,敏感性偏低等问题。且相比传统方法所需仪器设备要求高,在 ...
【技术保护点】
一种基于量子点微球和抗生素的金黄色葡萄球菌快速层析试纸条的构建方法,其特征在于,包括如下的步骤:1)抗生素‑BSA偶联物的制备;2)量子点微球的制备;3)免疫荧光微球的制备;4)试纸条的设计和组装;5)样品检测。
【技术特征摘要】
1.一种基于量子点微球和抗生素的金黄色葡萄球菌快速层析试纸条的构建方法,其特征在于,包括如下的步骤:1)抗生素-BSA偶联物的制备;2)量子点微球的制备;3)免疫荧光微球的制备;4)试纸条的设计和组装;5)样品检测。2.基于权利要求1所述方法的一种基于量子点微球和抗生素的金黄色葡萄球菌快速层析试纸条的构建方法,其特征在于,包括如下的步骤:1)抗生素-BSA偶联物的制备:采用EDC/NHS化学反应方法,将抗生素与BSA偶联,偶联蛋白用AKTAprimeTMproteinpurificationsystem纯化,用于制备检测线;2)量子点微球的制备:以聚(苯乙烯/丙烯酰胺)纳米球为载体,通过在有机溶剂中溶胀和超声处理将CdSe/ZnS量子点包埋在纳米球上;3)免疫荧光微球的制备:将制备好的量子点微球调节pH值后,与金黄色葡萄球菌的抗体通过EDC/NHS反应偶联;4)试纸条的设计和组装:试纸条包括三个部分:样品垫、硝酸纤维素膜和吸水垫,硝酸纤维素膜上预先包被抗生素-BSA偶联物和羊抗鼠二抗,分别形成检测线T线和质控线C线;5)样品检测:金黄色葡萄球菌样品与免疫荧光微球混匀、孵育一段时间后,取一定体积溶液滴加到试纸条样品垫上,反应一段时间后,借助便携式量子点荧光检测仪完成样品的检测。3.如权利要求2所述的金黄色葡萄球菌快速层析试纸条的构建方法,其特征在于:所述步骤1)抗生素与BSA的质量比为1:4。4.如权利要求2所述的金黄色葡萄球菌快速层析试纸条的构建方法,其特征在于:步骤2)所述的量子点微球粒径为80nm。5.如权利要求2所述的金黄色葡萄球菌快速层析试纸条的构建方法,其特征在于,包括如下的步骤:1)抗生素-BSA偶联物制备:将50mg抗生素和200mgBSA加入500μLPBS(10mM,pH7.0)中完全溶解后继续加入200mgEDC与NHS的混合物,室温反应2...
【专利技术属性】
技术研发人员:王利华,曾令文,韩艳云,杨保国,
申请(专利权)人:武汉市农业科学技术研究院农业环境安全检测研究所武汉市农业科学技术研究院中心实验室,
类型:发明
国别省市:湖北,42
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