泽兰酮化合物的液质联用检测方法技术

本发明专利技术提供了一种用于检测泽兰酮化合物的方法，该方法包括对样品进行超高效液相色谱和串联质谱检测，从而确定样品含有的泽兰酮化合物的种类和含量。所述泽兰酮化合物为9‑羰基‑10，11去氢泽兰酮和9‑羰基‑10Hβ泽兰酮。本发明专利技术的方法可以在5分钟内完成对两种泽兰酮化合物的检测，具有操作简便、高效、灵敏、准确等优点。

A method for the liquid chromatography-mass spectrometry of a compound of ketone

The present invention provides a method for detecting the eupatorium ketone compounds, methods including the samples by ultra performance liquid chromatography and tandem mass spectrometry detection, to determine the type and content of the samples containing ketone compound eupatorium. The 9 carbonyl ketone compound Eupatorium adenophorum 10, 11 to 9 and hydrogen ketone carbonyl 10H beta ketone. The method of the invention can be used to detect two kinds of compounds in 5 minutes, and has the advantages of simple and convenient operation, high efficiency, sensitivity and accuracy.

【技术实现步骤摘要】
泽兰酮化合物的液质联用检测方法
本专利技术涉及一种用于检测泽兰酮化合物的超高效液相色谱质谱联用方法，可用于检测草粉和饲料中泽兰酮化合物的种类和含量。
技术介绍
9-羰基-10Hβ泽兰酮和9-羰基-10，11去氢泽兰酮是从紫茎泽兰植株中获得的两种泽兰酮化合物，它们都含有一个杜松烷倍半萜母体。研究证明它们是紫茎泽兰植株的主要毒性成分，可造成大鼠肝中毒和胆汁淤滞，是紫茎泽兰加工成草粉和饲料的工艺环节中必须严格控制的成分。目前，检测这两种泽兰酮化合物的方法仅有高效液相色谱法，该方法完成一次色谱分析需要30min，而本法仅需5min，大大提高了工作效率，同时检测的灵敏度和准确度方面也优于高效液相色谱法。本法的建立对今后检测紫茎泽兰草粉原料及产品的质量和评价其毒性具有重要意义。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种简便、准确、快速、可靠的泽兰酮化合物的检测方法。该方法准确、灵敏、简便、前处理简单、分析速度快，能满足紫茎泽兰草粉和饲料中两种泽兰酮化合物的定性和定量检测。根据本专利技术中用于检测泽兰酮化合物的方法，该方法包括以下步骤：获取超高效液相色谱中泽兰酮化合物标准品的保留时间和质谱中泽兰酮化合物标准品的特征碎片离子峰、以及泽兰酮化合物标准品的特征碎片离子峰面积与浓度之间的线性方程。制备样品溶液，进行超高效液相色谱检测，得到样品中各组分的保留时间，对各个组分进行质谱检测，得到各个组分的特征碎片离子峰及特征碎片离子峰面积。将各个组分的保留时间和特征碎片离子峰与所述泽兰酮化合物标准品的保留时间和特征离子峰进行对比，从而确定所述样品中含有的泽兰酮化合物的种类，并根据所述特征碎片离子峰面积与浓度之间的线性方程进行计算，从而确定所述样品中含有的泽兰酮化合物的含量。其特征在于，所述泽兰酮化合物为9-羰基-10Hβ泽兰酮和9-羰基-10，11去氢泽兰酮中的一种或两种。所述液相色谱为超高效液相色谱，所述质谱检测是通过串联质谱法进行。根据本专利技术的用于检测泽兰酮化合物的方法不仅具有分析速度快，还具有精密度和检测灵敏度高的特点。具体地，根据该法可以在5分钟内完成两种泽兰酮化合物的分析检测，并且检出限为0.005-0.022mg/L，在1.4-2.1mg/g的3个添加水平范围内的平均回收率为88.85％-109.35％，精密度均小于12％。附图说明图1两种泽兰酮化合物的液质分析图谱。具体实施方式下面结合附图，对本专利技术的具体实施方式进行详细描述，但应当理解本专利技术的保护范围并不受具体实施方式的限制。实施例1(1)泽兰酮化合物标准品溶液的制备分别准确称取适量泽兰酮化合物标准品，用甲醇溶解并定容至100mL作为母液，使用时，用甲醇逐级稀释作为标准工作液，9-羰基-10Hβ泽兰酮浓度为0.87，1.392，1.74，2.61，3.48mg/L，9-羰基-10，11去氢泽兰酮浓度为0.33，0.66，1.32，2.64，3.96mg/L。(2)泽兰酮化合物标准品溶液的超高效液相色谱和串联质谱检测检测仪器为ACQUITYUPLC-TQD超高效液相色谱质谱联用系统。超高效液相色谱分析的条件包括：色谱柱为ACQUITYUPLCBEHC18柱(2.1mmx100mm，填料粒径为1.7μm)；流动相为甲醇和水；梯度洗脱程序为：0-0.5min，甲醇和水的体积比为10∶90；0.5-2.6min，甲醇和水的体积比为90∶10；2.6-5min，甲醇和水的体积比为10∶90；流动相的流速为0.3mL/min，柱温为40℃，样品室的温度为18℃，进样量3μL。质谱检测条件为：电喷雾正离子电离，毛细管电压为3.5kv，离子源温度为150℃，去溶剂气温度为350℃，去溶剂气流量为650L/h，锥孔气流量为50L/h，碰撞气体为氩气，多离子反应监测(MRM)。泽兰酮化合物标准品在超高效液相色谱中的保留时间，在串联质谱中的准分子离子峰以及特征碎片离子峰如下表1所示。表1*：定量特征碎片离子；Δ：定性特征碎片离子表1中，每种泽兰酮化合物标准品都给出了两个特征碎片离子，其中定量特征碎片离子的离子峰面积用于与浓度作图，从而得出特征碎片离子峰面积与浓度之间的线性方程，定性特征碎片离子用于辅助定量特征碎片离子来确定泽兰酮化合物的种类。在上述超高效液相色谱条件和串联质谱条件下，对具有不同浓度的泽兰酮化合物标准品溶液进行检测，确定特征碎片离子峰面积与浓度之间的线性方程，得到的线性方程、线性范围和相关系数如表2所示。按3倍信噪比估算检出限，10倍信噪比估算定量限。表2*：上述线性方程中的x对应于浓度，Y对应于特征碎片离子峰面积。(3)方法的回收率和精密度紫茎泽兰草粉中分别添加1.4，1.7，2.1mg/g泽兰酮化合物标准品，每个添加浓度设置4个平行样，用本专利技术的用于检测泽兰酮化合物的方法进行测定，确定方法的回收率和精密度。泽兰酮化合物的添加量、回收率和精密度结果见表3。表3表3中的数据表明，在高中低3个添加水平范围内，泽兰酮化合物的平均回收率为88.85％-109.35％，RSD小于11.83％，说明该方法的重现性良好，仪器稳定。实施例2供试溶液的制备：准确称取紫茎泽兰草粉(叶片)0.100g，加入40mL甲醇进行超声提取2次，每次30min，合并两次提取的上清液，甲醇定容至100mL，溶液过0.22μm微孔滤膜后，进行定性定量检测。按照实施例1中超高效液相色谱条件和串联质谱条件进行检测，并根据检测结果确定该草粉含有9-羰基-10Hβ泽兰酮和9-羰基-10，11去氢泽兰酮，它们的含量分别为5.15mg/g和2.21mg/g。实施例3供试溶液的制备：准确称取紫茎泽兰草粉(茎)0.500g，加入40mL甲醇进行超声提取2次，每次30min，合并两次提取的上清液，甲醇定容至100mL，溶液过0.22μm微孔滤膜后，进行定性定量检测。按照实施例1中超高效液相色谱条件和串联质谱条件进行检测，并根据检测结果确定该草粉含有9-羰基-10，11去氢泽兰酮，其含量为0.10mg/g，未检测出9-羰基-10Hβ泽兰酮。实施例4供试溶液的制备：准确称取紫茎泽兰草粉(根)0.500g，加入40mL甲醇进行超声提取2次，每次30min，合并两次提取的上清液，甲醇定容至100mL，溶液过0.22μm微孔滤膜后，进行定性定量检测。按照实施例1中超高效液相色谱条件和串联质谱条件进行检测，并根据检测结果确定该草粉含有9-羰基-10，11去氢泽兰酮，其含量为0.28mg/g。实施例5供试溶液的制备：准确称取紫茎泽兰草粉(叶片粉碎后经微生物发酵脱毒)1.000g，加入40mL甲醇进行超声提取2次，每次30min，合并两次提取的上清液，甲醇定容至100mL，溶液过0.22μm微孔滤膜后，进行定性定量检测。按照实施例1中超高效液相色谱条件和串联质谱条件进行检测，并根据检测结果确定该草粉含有9-羰基-10，11去氢泽兰酮，其含量为0.25mg/g。以上公开的仅为本专利技术的具体实施例，但是，本专利技术并非局限于此，任何本领域的技术人员能思之的变化都应落入本专利技术的保护范围。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于检测泽兰酮化合物的方法，该方法包括以下步骤：获取液相色谱中泽兰酮化合物标准品的保留时间和质谱中泽兰酮标准品的特征碎片离子峰、以及泽兰酮化合物标准品的特征碎片离子峰面积与浓度之间的线性方程；制备样品溶液，进行液相色谱检测，得到样品中各个组分的保留时间，对各个组分进行质谱检测，得到各个组分的特征碎片离子峰及特征碎片离子峰面积；将各个组分的保留时间和特征碎片离子峰与所述泽兰酮化合物标准品的保留时间和特征碎片离子峰进行对比，从而确定所述样品中含有的泽兰酮种类，并根据所述特征碎片离子峰面积与浓度之间的线性方程进行计算，从而确定所述样品中含有的泽兰酮化合物的含量；其特征在于，所述泽兰酮化合物为9‑羰基‑10，11去氢泽兰酮和9‑羰基‑10Hβ泽兰酮中的一种或两种；所述液相色谱为超高效液相色谱，所述质谱检测是通过串联质谱法进行的。

【技术特征摘要】
1.一种用于检测泽兰酮化合物的方法，该方法包括以下步骤：获取液相色谱中泽兰酮化合物标准品的保留时间和质谱中泽兰酮标准品的特征碎片离子峰、以及泽兰酮化合物标准品的特征碎片离子峰面积与浓度之间的线性方程；制备样品溶液，进行液相色谱检测，得到样品中各个组分的保留时间，对各个组分进行质谱检测，得到各个组分的特征碎片离子峰及特征碎片离子峰面积；将各个组分的保留时间和特征碎片离子峰与所述泽兰酮化合物标准品的保留时间和特征碎片离子峰进行对比，从而确定所述样品中含有的泽兰酮种类，并根据所述特征碎片离子峰面积与浓度之间的线性方程进行计算，从而确定所述样品中含有的泽兰酮化合物的含量；其特征在于，所述泽兰酮化合物为9-羰基-10，11去氢泽兰酮和9-羰基-10Hβ泽兰酮中的一种或两种；所述液相色谱为超高效液相色谱，所述质谱检测是通过串联质谱法进行的。2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述样品溶液的溶剂为乙醇，所述样品来自草粉或饲料。3.根据权利要求2所述的方法，其中，草粉或饲料由紫茎泽兰或其它菊科植物加工而来。4.根据权利要求2或3所述的方法，其中，该方法包括从所述草粉或饲料中提取待测样品的步骤：将所述的草粉或饲料与溶剂混合，进行超声提取2-3次，获取...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘晓漫，曹坳程，欧阳灿彬，
申请(专利权)人：中国农业科学院植物保护研究所，
类型：发明
国别省市：北京,11