一种分离测定恩格列净及其有关物质的方法技术

本发明专利技术公开了一种分离测定恩格列净及其有关物质的方法，该方法采用高效液相色谱法，以辛烷基硅烷键合硅胶填料或苯基硅烷键合硅胶填料为色谱柱，以磷酸溶液与甲醇、乙腈组成流动相，进行梯度洗脱。该方法可以将恩格列净及其有关物质很好分离，检测的重现性好、灵敏度高、专属性强、操作简便，有助于控制恩格列净的质量和用药安全。

A method for the separation and determination of Don Glenn Jing and its related substances

The invention discloses a method for the determination of related substances in Don Glenn Jing and separation, the method of HPLC, using octyl silane bonded silica filler or phenyl silane bonded silica as filler of chromatographic column, mobile phase composition in phosphoric acid solution with methanol, acetonitrile, gradient elution. The method can be used for separating Don Glenn Jing and its related substances, and has the advantages of good reproducibility, high sensitivity, strong specificity, simple operation and good control of the quality and the safety of the medicine.

【技术实现步骤摘要】
一种分离测定恩格列净及其有关物质的方法
本专利技术属于药物分析方法领域，具体涉及一种采用高效液相色谱法分离测定降糖药恩格列净及其有关物质的方法。
技术介绍
恩格列净为一种选择性钠-葡萄糖协同转运蛋白(SGLT)抑制剂，用于治疗成人II型糖尿病。恩格列净通过对钠-葡萄糖协同转运蛋白选择性抑制作用，限制了大部分葡萄糖在体内的重吸收，促使葡糖大量从尿中排出达到控制血糖水平的目的。恩格列净的化学结构式如下：其化学名为：(1S)-1,5-脱水-1-C-[4-氯-3-[[4-[[(3S)-四氢-3-呋喃基]氧基]苯基]甲基]苯基]-D-葡萄糖醇。恩格列净为全合成化学药，反应过程中可能产生的副产物或残留的中间体会影响其纯度和质量；在其储存过程中，可能会因为温度、光照等环境因素导致降解产物产生，也会影响其纯度和质量。这些残留的中间体、副反应产物、降解产物就是通常药物质量控制中所说的有关物质。目前，有关恩格列净及其组合物的有关物质测定方法未见报道，为保证恩格列净原料药及其药物组合物的质量可控，以确保其有效性和安全性，亟需一种有效的检测方法，能够有效分离测定恩格列净及其有关物质。本专利技术人经过大量的科学试验和测试条件的筛选，发现一种快速分离测定恩格列净及其有关物质的方法，该方法可以有效控制了恩格列净的工艺杂质和降解产物，保证了恩格列净原料药及其药物组合物的质量可控，从而完成了本专利技术。本专利技术人发现，已上市的恩格列净片剂，其中含有的乳糖、微晶纤维素等药用辅料在本专利技术的方法中不会干扰测定恩格列净及其有关物质的测定。因此，本专利技术同样适用于恩格列净的药物组合物。专利技术内容本专利技术的目的在于提供一种分离测定恩格列净及其有关物质的方法，该方法能将恩格列净与其有关物质有效分离，准确检测恩格列净原料药和其药物组合物中的有关物质，从而控制恩格列净的质量，确保恩格列净药品的有效性和安全性。为实现本专利技术的目的，提供如下实施方案。在实施方案中，本专利技术是一种分离测定恩格列净及其有关物质的方法，该方法包括采用高效液相色谱法，以辛烷基硅烷键合硅胶填料柱或苯基硅烷键合硅胶填料柱为色谱柱，以磷酸溶液或磷酸盐缓冲液为水相与以甲醇乙腈组成的有机相混合作为流动相，进行梯度洗脱，以紫外检测器进行检测。在上述实施方案中，本专利技术的方法，所述磷酸溶液或磷酸盐缓冲液的pH值为2～6，优选为3.5，其中，所述磷酸盐缓冲液所用磷酸盐选自磷酸二氢钠、磷酸二氢钾和磷酸二氢铵，优选磷酸盐为磷酸二氢钠，用磷酸溶液调节pH值，水相中磷酸盐浓度为0～0.005mol/L，优选0.002mol/L。在上述实施方案中，本专利技术的方法，所述有机相为甲醇与乙腈的混合溶液，其中，甲醇-乙腈的体积比为50:50。在上述实施方案中，本专利技术的方法，水相与有机相的洗脱初始体积比为65∶35～45∶55，优选55∶45，水相与有机相的洗脱终止体积比为35∶65～15∶85，优选25∶75。在上述实施方案中，本专利技术的方法，紫外检测波长为200～250nm，优选为224nm。在上述实施方案中，本专利技术的方法，进一步包括以下步骤：（1）取恩格列净原料药或其药物组合物，加流动相使恩格列净完全溶解并稀释定容，配制成每1ml溶液中含恩格列净0.4～0.8mg，优选0.8mg,滤过，作为供试品溶液；（2）以辛烷基硅烷键合硅胶填料柱或苯基硅烷键合硅胶填料柱为色谱柱，流速为0.8～1.2ml/min，优选1.0ml/min，柱温为20～30℃，优选25℃，波长为200～250nm，优选为224nm；（3）取供试品溶液10～30μl，优选20μl，注入高效液相色谱仪；（4）将水相pH2～6的磷酸溶液或磷酸盐缓冲液与有机相甲醇、乙腈以65∶35～45∶55为初始体积比洗脱至主峰出来后，逐渐增大有机相比例，至水相与有机相的体积比达到35∶65～15∶85并保持不少于10分钟，完成恩格列净有关物质的测定；（5）采用不加校正因子的主成分对照品法以峰面积计算恩格列净的纯度及有关物质中各单一杂质含量及有关物质总量。在上述实施方案中，本专利技术的方法，步骤（4）中优选的水相为pH3.5的磷酸溶液；优选的水相与有机相初始体积比为55∶45，洗脱至主峰出来后，逐渐增大有机相比例，优选的水相与有机相最终体积比达到25∶75并保持10分钟，完成恩格列净有关物质的测定。在上述实施方案中，本专利技术的方法，所述梯度洗脱包括：0min至第18～24min时，流动相中水相与有机相的体积比为60∶40～50∶50；第18～24min至第48～54min时，水相与有机相的体积比匀速变化至30∶70～15∶85；第48～54min至第58～64min时水相与有机相的体积比保持比例不变。在上述实施方案中，本专利技术的方法，优选的梯度洗脱包括：0min至第19.5min时，流动相中水相与有机相的体积比为55∶45；第19.5min至第50min时，水相与有机相的体积比匀速变化到25∶75；第50min至第60min时水相与有机相的体积保持比例25∶75不变。在一具体实施方案中，本专利技术所说的用高效液相色谱分离测定恩格列净及其有关物质的方法，包括以下步骤：（1）取恩格列净原料药或制剂，精密称定，加流动相适量使恩格列净溶解，再用流动相稀释制成每1ml中含恩格列净0.4～0.8mg的溶液，必要时滤过，作为供试品溶液；另精密称取恩格列净对照品适量，用流动相溶解并稀释制成每1ml中含0.6～1.2μg的溶液，作为对照品溶液；（2）取供试品溶液和对照品溶液各10～30μl，注入高效液相色谱仪，进行梯度洗脱，色谱条件如下：选择以辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂或苯基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，以磷酸溶液(取纯化水，用磷酸调pH值至2～6)或磷酸盐缓冲液(如0.002mol/L磷酸二氢钠溶液，用磷酸调pH值至2～6)作为流动相水相,以甲醇和乙腈混合溶液作为流动相有机相，进行梯度洗脱，柱温为：20～30℃；流速为0.8～1.2ml/min检测波长为200～250nm，梯度洗脱条件如下：0min至第18～24min时，流动相中水相与有机相的体积比为60∶40～50∶50；第18～24min至第48～54min时，水相与有机相的体积比匀速变化至30∶70～20∶80；第48～54min至第58～64min时水相与有机相的体积比保持比例不变，此时已完成有关物质测定，记录色谱图；（3）为了连续进样，可以设置一段平衡色谱系统的过程，即第58～64min至第58.5～64.5min时,水相与有机相的体积比匀速变化至初始比例，再保持10min完成平衡。上述本专利技术所说的用高效液相色谱分离测定恩格列净及其有关物质的方法，优选的，包括以下步骤：（1）取恩格列净原料药或制剂，精密称定，加流动相适量使溶解，再用流动相稀释制成每1ml中含恩格列净0.8mg的溶液，必要时滤过，作为供试品溶液；另精密称取恩格列净对照品适量，用流动相溶解并稀释制成每1ml中含1.2μg的溶液，作为对照品溶液。（2）以辛烷基硅烷键合硅胶填充柱（ZORBAXRx-C8，4.6×250mm，5µm）或者苯基硅烷键合硅胶填充柱（Generall-MPH，4.6×250mm，5µm）为色谱柱；以磷酸溶液(取纯化水，用磷酸调pH值至3.5)作为流动相的水相本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用高效液相色谱法分离测定恩格列净及其有关物质的方法，包括以辛烷基硅烷键合硅胶填料柱或苯基硅烷键合硅胶填料柱为色谱柱，流动相由有机相和水相组成，所述有机相为甲醇和乙腈混合溶液,水相为磷酸溶液或磷酸盐缓冲液，所述磷酸溶液或磷酸盐缓冲液的pH值为2～6，进行梯度洗脱，以紫外检测器进行检测，其中，所述梯度洗脱包括水相与有机相的洗脱初始体积比为65∶35～45∶55，水相与有机相的洗脱终止体积比为35∶65～15∶85。

【技术特征摘要】
1.一种用高效液相色谱法分离测定恩格列净及其有关物质的方法，包括以辛烷基硅烷键合硅胶填料柱或苯基硅烷键合硅胶填料柱为色谱柱，流动相由有机相和水相组成，所述有机相为甲醇和乙腈混合溶液,水相为磷酸溶液或磷酸盐缓冲液，所述磷酸溶液或磷酸盐缓冲液的pH值为2～6，进行梯度洗脱，以紫外检测器进行检测，其中，所述梯度洗脱包括水相与有机相的洗脱初始体积比为65∶35～45∶55，水相与有机相的洗脱终止体积比为35∶65～15∶85。2.根据权利要求1所述的方法，所述磷酸溶液或磷酸盐缓冲液的pH值为3.5。3.根据权利要求1或2所述的方法，所述磷酸盐选自磷酸二氢钠、磷酸二氢钾和磷酸二氢铵。4.根据权利要求1或2所述的方法，水相中磷酸盐浓度为：0～0.005mol/L。5.根据权利要求1所述的方法，有机相中，甲醇与乙腈的体积比为50：50。6.根据权利要求1所述的方法，所述梯度洗脱包括：0min至第18～24min时，流动相中水相与有机相的体积比为60∶40～50∶50；第18～24min至第48～54min时，水相与有机相的体积比匀速变化至30∶70～20∶80；第48～54min至第58～64min时水相与有机相的体积比保持比例不变。7.根据权利要求7所述的方法，所述梯度洗脱包括：0min至第19.5min时，流动相中水相与有机相的体积比为55∶45；第19.5min至第50min时，水相与有机相...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈皓，李雪逃，刘泽荣，张道林，冯浩，周冰，汪维维，
申请(专利权)人：重庆医药工业研究院有限责任公司，
类型：发明
国别省市：重庆,50