一种藠头中游离氨基酸的测定方法技术

本发明专利技术公开了一种藠头中游离氨基酸的测定方法，其中，包括以下步骤：1）、溶液的配制，配制茚三酮溶液、谷氨酸标准溶液和醋酸‑醋酸钠缓冲液，备用；2）、样品处理，称取1g藠头粉，放入50mL的烧杯内，同时加入蒸馏水溶解，待溶解完全后将其全部移入50mL的容量瓶内，加入蒸馏水定容并摇匀，备用；3）、测量波长，取标准溶液、蒸馏水于25mL的具塞试管中，加入1mL~3mL的茚三酮溶液和PH为5~8的醋酸钠‑醋酸缓冲溶液，水浴加热15~25分钟，取出放入冷水浴中立即冷却至室温，用蒸馏水定容至25mL，进行波长扫描。利用此方法对藠头中游离氨基酸分析具有准确、灵敏、快速、重复性和稳定性好等优点。

A method for the determination of free amino acids in Allium chinense

The invention discloses a method for the determination of free amino acids in onion, which comprises the following steps: 1), solution preparation, preparation of indene ketone three solution and glutamic acid standard solution and acetic acid sodium acetate buffer, 2), alternate; sample treatment, weigh 1g onion powder, put into the 50mL the beaker, add distilled water to be dissolved, the flask dissolved completely after it all into 50mL, add distilled water and set the volume and mix, 3), alternate; measure the wavelength, the standard solution and distilled water to 25mL with a plug in the tube, adding 1mL~3mL and PH into three indene ketone solution of acetic acid sodium acetate buffer solution 5~8, water bath for 15~25 minutes, take out into the cold bath immediately cooled to room temperature, with distilled water dilute to 25mL for wavelength scanning. The utility model has the advantages of accuracy, sensitive, rapid, good repeatability and stability analysis of free amino acids in onion by using this method.

【技术实现步骤摘要】
一种藠头中游离氨基酸的测定方法
本专利技术涉及藠头有机物测定的
，尤其涉及一种藠头中游离氨基酸的测定方法。
技术介绍
藠头为百合科葱属植物，又名薤白，主要分布于我国南方各省。传统医学认为藠头中有温中通阳，理气宽胸，还阳散结之功效,藠头的鳞茎既可入药又可食用。藠头中含有大量的氨基酸和人体所必需的多种元素，而且藠头具有多种药理作用，可以抑制血栓形成和动脉粥样硬化，并且具有抗氧化作用、平喘作用、镇痛作用、和耐缺氧作用，特别是对于糖尿病、肿瘤细胞转移等疾病都有很好的效果。大多数人只知道藠头做成食品食用有益于身体健康，却不知道藠头中是什么成分在起营养作用，鉴于氨基酸的营养价值性以及提升藠头的附加价值，藠头的研究势在必行。对于藠头中营养物质的检测及分析曾有一些文献报道，中国专利CN103320449A公开了一种具有抗肿瘤活性藠头凝集素基因及其编码蛋白的应用，根据其核苷酸序列对应的氨基酸序列，其编码的藠头凝集素蛋白具有抗肿瘤活性，但其对氨基酸测定方法等方面未做研究，目前也没有公开关于藠头中游离氨基酸含量的测定分析方法，因此如今对氨基酸组成的进一步研究以及资源的开发与利用还缺乏理论依据。
技术实现思路
鉴于上述现有技术的不足，本专利技术旨在提供一种准确、灵敏、快速、重复性和稳定性好的一种藠头中游离氨基酸的测定方法，从而为氨基酸组成的进一步研究以及资源的开发与利用提供理论依据。本专利技术的技术方案如下：一种藠头中游离氨基酸的测定方法，包括以下步骤：1）、溶液的配制配制茚三酮溶液、谷氨酸标准溶液和醋酸-醋酸钠缓冲液，备用，2）、样品处理称取1g藠头粉，放入50mL的烧杯内，同时加入蒸馏水溶解，待溶解完全后将其全部移入50mL的容量瓶内，加入蒸馏水定容并摇匀，备用，3）、测量波长取标准溶液、蒸馏水于25mL的具塞试管中，加入1mL~3mL的茚三酮溶液和PH为5~8的醋酸钠-醋酸缓冲溶液，水浴加热15~25分钟，取出放入冷水浴中立即冷却至室温，用蒸馏水定容至25mL，进行波长扫描。所述的藠头中游离氨基酸的测定方法，其中，所述茚三酮溶液浓度为0.02~0.05mg/mL、谷氨酸标准溶液浓度为0.1~0.3mg/mL、醋酸-醋酸钠缓冲液的PH为4~9。所述的藠头中游离氨基酸的测定方法，其中，所述加入1mL~3mL的茚三酮溶液浓度为1%~3%。所述的藠头中游离氨基酸的测定方法，其中，所述水浴加热的温度设定为100~120℃。所述的藠头中游离氨基酸的测定方法，其中，所述冷却时间为8~15分钟。所述的藠头中游离氨基酸的测定方法，其中，所述波长扫描的范围为380-780nm。专利技术人发现，一般采用茚三酮比色法测定藠头中总氨基酸的含量，由于溶液的PH值、显色剂的用量、加热时间和冷却时间的不一样，最终得到的结果存在较大差异，导致测定不准确、不灵敏且重复性和稳定性都不好，继而专利技术人针对如何使此显色方法准确、灵敏、快速、重复性和稳定性好这一问题进行了研究，经过大量实验研究，专利技术进一步确定了茚三酮的最适显色条件、溶液的最适PH值、显色剂的最适用量、溶液的最适加热时间、溶液的最适冷却时间并且绘制谷氨酸溶液的标准曲线，最终得到了最合适测定条件为：溶液的PH值pH=5.0，取2%茚三酮显色剂2.0mL，沸水浴准确加热20min，冷水冷却12min后于570nm处测定其吸光度。实验证明此显色方法准确、灵敏、快速、重复性和稳定性好。有益效果：本专利技术所提供的一种藠头中游离氨基酸的测定方法，通过简单高效的分析方法以及确定最佳的反应条件，使实验分析准确、灵敏、快速、重复性和稳定性好，从而为氨基酸组成的进一步研究以及资源的开发与利用提供理论依据。附图说明图1是溶液的PH值与吸光度的关系图。图2是茚三酮用量与吸光度的关系图。图3是溶液加热时间与吸光度的关系图。图4是溶液冷却时间与吸光度的关系图。图5是谷氨酸溶液与吸光度的标准曲线图。具体实施方式本专利技术提供了一种藠头中游离氨基酸的测定方法，为使本专利技术的目的、技术方案及效果更加清楚、明确，以下对本专利技术进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。确定茚三酮的最合适显色条件茚三酮是一个有机化合物，氨基酸与茚三酮水合物在弱酸的条件下共同加热时，氨基酸被氧化而脱氨、脱羧，且茚三酮水合物被还原，其还原物与氨基酸加热分解产生的氨结合，再与另一分子茚三酮缩合成为蓝紫色化合物，称为罗曼紫（Ruhemann'spurple）。反应式如下：确定溶液的最合适PH值：参加图1，每次精确移取5.0mL0.1mg/mL谷氨酸的标准溶液于6支相同的具塞试管中，再依次分别加入2.OmLpH为4，5,6,7,8，9的醋酸-醋酸钠缓冲溶液和2.0mL的茚三酮试剂，沸水浴加热20min后，用冷却蒸馏水定容至50mL，在570nm处测定不同PH值条件下的吸光度。分析图1可得，在缓冲溶液的PH值不断增加的情况下，谷氨酸溶液的吸光度出现先上升后下降最终趋于平稳的趋势。在pH为5处谷氨酸溶液达到最大吸光度，此时谷氨酸溶液呈蓝色。由此可得谷氨酸与茚三酮的显色反应适合在弱酸的条件下进行，这也与文献报道相吻合。此时的产品才呈现出鲜味。低于这个pH值，产品偏重于酸味;高于这个pH值，产品会呈现一定的咸味和甜味。确定显色剂的最合适用量：参见图2，每次精确移取5.0mL0.1mg/mL的谷氨酸标准溶液于5支相同的具塞试管中，后加入2.0mLPH为5的醋酸钠-醋酸缓冲溶液，再依次分别加1.6,1.8,2.0,2.2,2.4mL茚三酮试剂，沸水浴加热20min后，用冷却蒸馏水定容至50mL，在570nm处测定不同显色剂用量的吸光度。分析图2可得，在茚三酮显色试剂的用量不断增加的情况下，谷氨酸溶液的吸光度出现先上升后逐渐趋于平稳的趋势。当显色剂用量为2.0mL时，谷氨酸溶液的吸光度达到最大值，此后再继续增加茚三酮试剂的用量，谷氨酸溶液的吸光度的变化不明显，由此可确定2.0mL为显色剂最合适的用量。确定溶液的最合适加热时间：参加图3，每次精确移取5.0mL0.1mg/mL的谷氨酸标准溶液于5支相同的具塞试管中，再加人2.OmLpH为5的醋酸-醋酸钠缓冲溶液和2.0mL茚三酮试剂，放置于沸水浴中分别加热16,18,20,22,24min后，用冷却蒸馏水定容至50mL，在570nm处测定不同加热时间显色体系的吸光度。分析图3可得，在水浴时间不断增加的条件下，谷氨酸溶液的吸光度出现先上升后下降的趋势。当水浴时间为20min时，谷氨酸溶液的吸光度达到最大值。在水浴20min之前，谷氨酸溶液的颜色显紫色，且色泽比较暗淡；22min以后，谷氨酸溶液颜色渐渐加深，出现略透明紫色;水浴20min时，溶液显亮紫色。当水浴时间超过20min后溶液的透明度出现下降的趋势;在水浴时间超过22min后肉眼可见具塞试管内有微小的絮状物沉淀，其产生的原因可能是由于水浴时间的增加使谷氨酸溶液的颜色渐渐加深，后用冷却蒸馏水后具塞事管中的溶液因为温度的降低而产生细微的沉淀颗粒。因此此次试验选用20min为最合适的水浴时间。确定最合适的冷却时间：参见图4，每次精确移取5.0mL0.1mg/mL的谷氨酸标准溶液于5支相同的具塞试管中，再加入2.OmLpH为5的醋酸-醋酸钠缓冲溶液本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种藠头中游离氨基酸的测定方法，其特征在于，包括以下步骤： 1）、溶液的配制配制茚三酮溶液、谷氨酸标准溶液和醋酸‑醋酸钠缓冲液，备用；2）、样品处理称取1g藠头粉，放入50mL的烧杯内，同时加入蒸馏水溶解，待溶解完全后将其全部移入50mL的容量瓶内，加入蒸馏水定容并摇匀，备用；3）、测量波长取标准溶液、蒸馏水于25mL的具塞试管中，加入1mL~3mL的茚三酮溶液和PH为5~8的醋酸钠‑醋酸缓冲溶液，水浴加热15~25分钟，取出放入冷水浴中立即冷却至室温，用蒸馏水定容至25mL，进行波长扫描。

【技术特征摘要】
1.一种藠头中游离氨基酸的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：1）、溶液的配制配制茚三酮溶液、谷氨酸标准溶液和醋酸-醋酸钠缓冲液，备用；2）、样品处理称取1g藠头粉，放入50mL的烧杯内，同时加入蒸馏水溶解，待溶解完全后将其全部移入50mL的容量瓶内，加入蒸馏水定容并摇匀，备用；3）、测量波长取标准溶液、蒸馏水于25mL的具塞试管中，加入1mL~3mL的茚三酮溶液和PH为5~8的醋酸钠-醋酸缓冲溶液，水浴加热15~25分钟，取出放入冷水浴中立即冷却至室温，用蒸馏水定容至25mL，进行波长扫描。2.根据权利要求1所述的藠头中游离氨基酸的测定方法，其特...

【专利技术属性】
技术研发人员：卢昀，王滔，
申请(专利权)人：佛山市海科知识产权交易有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44