合成肽的方法技术

本发明专利技术涉及一种新的在溶液中合成肽的方法，该方法包含：ａ）用过量的在有机溶剂中的脂族仲胺处理肽或氨基酸衍生物，所述肽或氨基酸衍生物具有用式Ｒ↑［１］－ＳＯ↓［２］－ＣＨ↓［２］ＣＨ↓［２］－Ｏ－ＣＯ－的氨基甲酸乙酯基团封闭的α－胺官能团，其中Ｒ↑［１］是芳基，以提供所述氨基酸或肽衍生物的游离α－胺官能团的释放，并在所述的仲胺和释放出的式Ｒ↑［１］－ＳＯ↓［２］－ＣＨ↓［２］＝ＣＨ↓［２］的乙烯基化合物之间形成叔胺加合物；ｂ）除去溶剂和多余的所述仲胺；ｃ）在特定条件下使这样形成的Ｎ↓［α］－去保护的氨基酸或肽衍生物和所述的叔胺加合物的混合物与随后的用上述的或另外的氨基甲酸乙酯基团Ｎ↓［α］－保护的肽或氨基酸衍生物接触，所述的特定条件能使Ｎ↓［α］－去保护的氨基酸或肽衍生物的游离的α－胺官能团与随后的Ｎ↓［α］－保护的肽或氨基酸衍生物的α－羧基官能团之间形成肽键；ｄ）从反应混合物中分离新形成的肽；ｅ）重复上述过程，直到得到期望多肽。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及一种新的在溶液中，该方法能显著促进和加速全合成方法。
技术介绍
在肽合成中的基本问题是封闭或保护α-氨基以免与同一氨基酸上的羧基相互作用。通过给氨基酸连接一个基团防止这些不期望有的副反应，所述基团能使得NH2不起反应，并且仍然允许期望的反应进行。除了提供氨基保护外，保护基团优选地为这样的，它能被容易地去除且不对分子的剩余部分(包括在合成过程已经建立起的肽键)产生化学改变。肽链装配通常由多个连续的合成循环组成，每一个循环包括两个基本的化学步骤1)从建立的肽的α-氨基除去保护基(Nα-去保护阶段)，和2)将Nα-去保护的肽与随后的Nα-保护的氨基酸或肽片段偶联。因此，进行Nα-去保护阶段的容易和快捷有利于肽装配的整个过程的速度和效率。报导用于肽合成的大多数氨基保护基已经集中在三个基团苄氧羰基(Z或Cbz)，通过催化氢化裂解；叔丁氧基羰基(Boc或t-Boc)，通过温和的酸解裂解；和9-芴基甲氧基羰基(Fmoc)，通过仲胺裂解(关于综述，参见例如Kocienski，P.Protecing groups，修订版，ThiemeStuttgart-N.-Y.，2000；Greene，T.W.；Wuts，P.G.M.Protective groups in Organic Synthesis，第3版；John Wiley & Sons，Inc.New York，NY，1999)。这些基团彼此是不相关的，因为Boc基团对仲胺和氢解是稳定的，Fmoc基团对酸解是稳定的，Z基团对仲胺和温和酸解是稳定的。这些保护基中的每一种都在肽化学中有用处。Z基团从短肽的氢化裂解反应是简单和干净的；后处理只是包含去除催化剂和蒸发溶剂。但是，对于更长的肽，反应可能会非常慢。另外，肽中含硫氨基酸的存在使催化氢化变得不可能。Boc基团裂解只是生成了挥发性的副产物，所以后处理是除去酸性裂解剂。酸的彻底去除对于成功地进行下面的偶联步骤是关键的，它在许多情况下需要多次蒸发、仔细洗涤和干燥Nα-去保护的肽。Fmoc基团是在当代肽合成中广泛使用的碱不稳定的保护基，它已经表现出许多优点它具有良好的酸稳定性；通过碱促进的β-消除，能通过多种胺以非水解的方式容易地裂解；在它的存在下，可以去除其它的标准的肽保护基(即，Boc、苄基)；而且，裂解后产生的胺是游离碱(Atherton，E.；Sheppard，R.C.，in The Peptides；Udenfriend，S.；Meienhofer，J.，Eds.；Academic PressNew York，NY，1987；Vol.9，p.1.)。但是，在Fmoc方法学已经被广泛应用于自动固相肽合成的同时，它也具有几种阻止了其应用于溶液肽合成的缺点。首先，Fmoc保护的氨基酸(和肽)在通常用于偶联阶段的弱碱性的和中性的DMF溶液中的稳定性较差(Atherton，E.；Bury，C.；Sheppard，R.C.；Williams，B.J.Tetrahedron Lett.1979，3041；Bodanszky，M.；Deshmane，S.S.；Martinez，J.J.Org.Chem.1979，44，1622.)。其次，可能多数是有害的，是使用过量的裂解剂(脂族仲胺)的Fmoc裂解链烯产物(二亚甲基茚)的相对缓慢的和可逆的反应。难以有效地用胺捕获二亚甲基茚和随后从反应混合物中去除，最终导致目标肽产物中污染有微溶的二亚甲基茚聚合物。显然，需要用于溶液肽合成的有效的和灵活的方法，它能具有FmocNα-保护的优点同时又克服了其缺点。
技术实现思路
本专利技术的一些专利技术人已经较早地发现，衍生于2-芳基磺酰基乙醇的氨基甲酸乙酯氨基保护基可以被胺在非水解条件下通过碱促进的β-消除来裂解，其机理与关于Fmoc裂解所述的机理(Samukov，V.V.；Sabirov，A.N.；Troshkov，M.L.Zh.Obshchei Khim.1988，58，1432)非常相似。但是令人惊奇地，与Fmoc相反，当用过量的脂族仲胺作为裂解剂时，氨基甲酸乙酯裂解产物(芳基乙烯基砜)能被非常快地且不可逆地捕获(Samukov，V.V.；Sabirov，A.N.；Pozdnyakov，P.I.Tetrahedron Lett.1994，35，7821；Sabirov，A.N.；Kim，Y.-D.；Kim，H.-J.；Samukov，V.V.Protein Peptide Lett.1997，4，307)。在该情况下，捕获的产物是乙烯基砜-胺加合物(即叔胺)，所以去除过量的裂解剂和溶剂会生成等摩尔的Nα-去保护的肽和上述叔胺的混合物。这样，已经推断在进行偶联阶段之前不需要分离该混合物，因为为了维持介质的碱性和促进酰化反应总是将叔胺加入到偶联混合物中，所以已经存在的摩尔当量的胺会很好地实现该目的。因此，本专利技术涉及一种新的在溶液中，它利用了上述发现，并且显著促进和加速了整个合成过程。因此，本专利技术的一个目的是，该方法包括a)用过量的在有机溶剂中的脂族仲胺处理肽或氨基酸衍生物，所述肽或氨基酸衍生物具有用式R1-SO2-CH2CH2-O-CO-的氨基甲酸乙酯基团封闭的α-胺官能团，其中R1是芳基，以提供所述氨基酸或肽衍生物的游离α-胺官能团的释放，并在所述的仲胺和释放出的式R1-SO2-CH2＝CH2的乙烯基化合物之间形成叔胺加合物；b)除去溶剂和多余的所述伸胺；c)在特定条件下使这样形成的Nα-去保护的氨基酸或肽衍生物和所述的叔胺加合物的混合物与随后的用上述的或另外的氨基甲酸乙酯基团Nα-保护的肽或氨基酸衍生物接触，所述的特定条件能使Nα-去保护的氨基酸或肽衍生物的游离的α-胺官能团与随后的Nα-保护的肽或氨基酸衍生物的α-羧基官能团之间形成肽键；d)从反应混合物中分离新形成的肽；e)重复上述过程，直到得到期望多肽。氨基甲酸乙酯结构中的R1基团可以是取代或未取代的芳基，但是，为了提供相当高速率的通过碱促进β-消除的氨基甲酸乙酯裂解，优选地使用具有强吸电子取代基的芳基。在这样的取代的芳基中，最优选的是4-硝基苯基和4-磺酰化的苯基。当R1＝4-硝基苯基时，Nα-保护基是已知的2-(4-硝基苯基)磺酰基乙氧基羰基(Nsc)基团(Samukov，V.V.；Sabirov，A.N.；Pozdnyakov，P.I.Tetrahedron Lett.1994，35，7821；美国专利5,616,788；6,265,590)。4-磺酰化的苯基基团的示例是本领域已知作为氨基保护基的2-(4-甲基磺酰基苯基)磺酰基乙氧基羰基(Mpc)基团(Verhart，C.；Tesser，G.Rec.Trav.Chim.Pays-Bas.1988，107，621)。该基团的其它优选实施方案包括，例如，4-苯基磺酰基苯基和多种4-磺酰胺衍生物，即4-二甲基氨基磺酰基苯基；4-二乙基氨基磺酰基苯基；4-吗啉代磺酰基苯基(4-morpholidosulfonyl-phenyl)；4-哌啶子基磺酰基苯基(4-piperididosulfonylphenyl)。上述通过胺促进β-消除的氨基甲酸乙酯的裂解速度比可对比条件下的Fmoc基团的速度慢，但是，另一方面，本文档来自技高网...

【技术保护点】
合成肽的方法，该方法包括：ａ）用过量的在有机溶剂中的脂族仲胺处理肽或氨基酸衍生物，所述肽或氨基酸衍生物具有用式Ｒ↑［１］－ＳＯ↓［２］－ＣＨ↓［２］ＣＨ↓［２］－Ｏ－ＣＯ－的氨基甲酸乙酯基团封闭的α－胺官能团，其中Ｒ↑［１］是芳基， 以提供所述氨基酸或肽衍生物的游离α－胺官能团的释放，并在所述的仲胺和释放出的式Ｒ↑［１］－ＳＯ↓［２］－ＣＨ↓［２］＝ＣＨ↓［２］的乙烯基化合物之间形成叔胺加合物；ｂ）除去溶剂和多余的所述仲胺；ｃ）在特定条件下使这样形成的Ｎ ↓［α］－去保护的氨基酸或肽衍生物和所述的叔胺加合物的混合物与随后的用上述的或另外的氨基甲酸乙酯基团Ｎ↓［α］－保护的肽或氨基酸衍生物接触，所述的特定条件能使Ｎ↓［α］－去保护的氨基酸或肽衍生物的游离的α－胺官能团与随后的Ｎ↓［α］－保护的肽或氨基酸衍生物的α－羧基官能团之间形成肽键；ｄ）从反应混合物中分离新形成的肽；ｅ）重复上述过程，直到得到期望多肽。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

【专利技术属性】
技术研发人员：VV萨姆科夫，PI波兹尼亚科夫，NN卡尔佩什夫，DV列别杰娃，金鹤柱，
申请(专利权)人：氨基酸和肽公司，
类型：发明
国别省市：KR[韩国]