一种破伤风免疫球蛋白的生产方法技术

本发明专利技术公开了一种破伤风免疫球蛋白的生产方法，包括以下步骤：Ａ．血浆采集；Ｂ．调控血浆参数分步沉淀，过滤，得沉淀组分（１２３）；Ｃ．溶解组分（１２３），调控参数沉淀过滤得到上清液及沉淀组分（３）；Ｄ．调控步骤Ｃ中的上清液沉淀过滤得到沉淀组分２；Ｅ．溶解组分（２），调控参数沉淀过滤得到产物；Ｆ．病毒灭活；Ｇ．配液及分装。本发明专利技术采用分步沉淀的方式，分两步调控血浆参数并静置分离，使不同的组分分别于最佳值较彻底地沉淀，沉淀量比一步沉淀法增加１．５～２倍，使产品的收率比传统方法的收率提高了，免疫球蛋白的收率升高至８克／千克血浆，破伤风抗体效价达到１１０ＩＵ／ｍｌ。（*该技术在2024年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种破伤风抗体的人免疫球蛋白的生产方法。
技术介绍
破伤风是一种严重威胁人类生命健康的疾病，一直以来人类使用马血清破伤风病毒素(TAT)预防和治疗破伤风。TAT是含有高效价的破伤风抗体的马血清蛋白，由于是异源蛋白，因此TAT对人体有很强的过敏原性，注射后易发生过敏性休克甚至出现血清病。使用TAT必须做皮试，皮试阴性者在注射时仍有过敏反应。大量临床资料表明TAT引起过敏反应的几率在5～30％，其中约有万分之一的致死率，因此使用TAT存在很大的不安全性。人体破伤风免疫球蛋白(TIG)治疗破伤风，是经乙肝疫苗接种后再经破伤风类毒素(TD)免疫的具有高效价破伤风抗体的血浆，经低温乙醇法分级沉淀、加压过滤分离提纯，并经病毒灭活处理的特异免疫球蛋白，用于防治破伤风。采用TIG治疗破伤风，不仅能有效中和破伤风患者体内毒素，而且由于TIG提取自人血浆中，对患者没有致过敏作用，因此作用安全。从人血浆中分离免疫球蛋白，经典方法是E.J.Cohn教授创立的低温乙醇分级沉淀技术，该技术通过有效控制蛋白质沉淀的五个因素pH值、温度、蛋白浓度、离子强度、乙醇浓度来逐级沉淀血浆中的不同蛋白质。在低温乙醇法分离血浆蛋白中，蛋白质沉淀分离的传统方法采用连续冷冻离心机分离工艺，该工艺要求操作温度保持低温，对能源消耗大而且对操作员身体健康不利，该工艺是间歇式操作，期间容易发生操作人员和制品的直接接触导致污染，影响制品的抗体效价和产品质量。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种能提高免疫球蛋白收率、降低能耗、并能保持蛋白中的高效价的破伤风抗体的生产方法。为了达到上述专利技术目的，本专利技术的破伤风免疫球蛋白的生产方法采用了以下技术方案(A)血浆采集；(B)将上述血浆融化混匀并调控pH至7.0～7.4，温度-2～-3℃，酒精浓度6～10％，蛋白浓度5.0～5.2％、离子强度0.14～0.17，搅拌反应30分钟后，静置；再次调整溶液的参数至pH6.8～6.9，温度-4～-5℃，酒精浓度18～22％，蛋白浓度4.1～4.5％、离子强度0.12～0.14，搅拌反应30分钟以上，静置；在溶液中加入助滤剂，过滤，并沉淀得组分(123)；(C)组分(123)加冷蒸馏水溶解，并调控至pH5.1～5.2，温度-3～-6℃，酒精浓度16～20％，离子强度0.14～0.16，搅拌反应30分钟以上，过滤得到上清液及沉淀组分(3)；(D)调控步骤C中的上清液至pH7.0～7.6，温度-8～-11℃，酒精浓度22～28％，离子强度0.045～0.055，搅拌反应30分钟以上，过滤得到沉淀组分(2)；(E)对组分(2)进行溶解，调控pH至5.0～5.5，温度2～8℃，搅拌反应30分钟以上，超滤浓缩；(F)病毒灭活；(G)配液及分装。由于血浆蛋白存在多种组分，各种组分的等电点不同，其最佳沉淀的血浆参数(pH值、温度、蛋白浓度、离子强度、乙醇浓度)，因此在同一血浆参数条件下各组分沉淀不完全。本专利技术采用了分步沉淀的方式，分两步调控血浆参数并静置分离，使不同的组分分别于最佳值较彻底地沉淀，沉淀量比一步沉淀法增加1.5～2倍，使产品的收率比传统方法的收率提高了，免疫球蛋白的收率从传统的5克/千克血浆升高至8克/千克血浆，破伤风抗体效价达到110IU/ml。同时，采用本专利技术可以显著地改善生产环境，车间温度可以控制在0℃以上。采用压缩空气做过滤动力，大大降低了离心分离的能耗，也降低了操作人员的劳动强度，从离心分离的开放性操作变为密闭性操作，减少人与制品的直接接触，提高了安全性，降低了生产成本，具有显著的经济效益。附图说明图1是本专利技术的工艺流程图。具体实施例方式本专利技术的方法，依次包括以下步骤(A)血浆采集献浆员经破伤风毒素免疫自体产生破伤风抗体，采集抗体效价在8IU/ml以上的血浆，冷冻保存作生产原料；(B)制备组分123将上述血浆融化混匀后调控pH至7.0～7.4，温度-2～-3℃，酒精浓度8％，蛋白浓度5.1％、离子强度0.15，搅拌反应30分钟以上并静置2小时；再次调整溶液至pH6.8～6.9，温度-4～-5℃，酒精浓度20％，蛋白浓度4.3％、离子强度0.14，搅拌反应30分钟以上并静置2小时；按14克/毫升血浆的比例在溶液分别添加入硅藻土和珍珠岩，用隔膜泵注入压滤机加压过滤，压滤完成后泵入洗液(1)循环冲洗，并用压缩空气吹干至无上清液流出为止，沉淀得到组分IV；(C)制备组分3组分IV加冷蒸馏水溶解，加水比例为0.75升水/千克血浆，搅拌溶解后调控至pH5.1～5.2，温度-4～-5℃，酒精浓度18％，离子强度0.15，搅拌反应30分钟以上；压滤机预先泵入含硅藻土的洗液，使硅藻土均匀分布到滤板上，然后泵入蛋白溶液加压过滤，滤后用压缩空气吹干，所得的沉淀即组分III，上清液则用于后序分离组分II。(D)制备组分2调控上清液至pH7.3～7.5，温度-9～-10℃，酒精浓度25％，离子强度0.05，搅拌反应30分钟以上，然后直接泵入压滤机加压过滤，滤完后用压缩空气吹干到无上清液流出，所得沉淀即组分II。(E)对组分2进行溶解，按1千克沉淀加5升水的比例加入冷蒸馏水溶解沉淀，调控至pH5.1～5.2，温度3～7℃，搅拌反应30分钟以上，用规格为NMWL50000的超滤器透析浓缩至比例为1千克沉淀4.5升水的浓度；(F)病毒灭活灭活罐内蛋白液浓度控制在0.45～0.50％，按0.5千克/升蛋白液的比例加入山梨醇保护剂，调控pH5.0，在59.5～60.5℃下灭活10小时；(G)配液及分装蛋白液浓度调整至18％以下，破伤风效价控制在110IU/mL，pH6.55～6.65，经0.2μm的除菌膜过滤分装。权利要求1.，包括以下步骤(A)血浆采集；(B)将上述血浆融化混匀并调控pH至7.0～7.4，温度-2～-3℃，酒精浓度6～10％，蛋白浓度5.0～5.2％、离子强度0.14～0.17，搅拌反应30分钟后，静置，再次调整溶液的参数至pH6.8～6.9，温度-4～-5℃，酒精浓度18～22％，蛋白浓度4.1～4.5％、离子强度0.12～0.14，搅拌反应30分钟以上，静置；加入助滤剂，过滤，得沉淀组分(123)；(C)制备组分(3)组分(123)加冷蒸馏水溶解，并调控至pH5.1～5.2，温度-3～-6℃，酒精浓度16～20％，离子强度0.14～0.16，搅拌反应30分钟以上，过滤得到上清液及沉淀组分(3)；(D)制备组分(2)调控步骤C中的上清液至pH7.0～7.6，温度-8～-11℃，酒精浓度22～28％，离子强度0.045～0.055，搅拌反应30分钟以上，过滤得到沉淀组分(2)；(E)对组分(2)进行溶解，调控pH至5.0～5.5，温度2～8℃，搅拌反应30分钟以上，超滤浓缩；(F)病毒灭活；(G)配液及分装。2.根据权利要求1所述的破伤风免疫球蛋白的生产方法，其特征在于步骤B中所述的助滤剂为硅藻土和珍珠岩，均按14克每毫升血浆的比例加入进溶液中。3.根据权利要求1所述的破伤风免疫球蛋白的生产方法，其特征在于步骤B、C、D中所述的过滤是指用隔膜泵把待过滤溶液注入压滤机加压过滤，压滤完成后泵入洗液(1)循环冲洗，用压缩空气吹干。4.根据权利要求1或3所述的破伤风免疫本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种破伤风免疫球蛋白的生产方法，包括以下步骤：（Ａ）血浆采集；（Ｂ）将上述血浆融化混匀并调控ｐＨ至７．０～７．４，温度－２～－３℃，酒精浓度６～１０％，蛋白浓度５．０～５．２％、离子强度０．１４～０．１７，搅拌反应３０分钟后 ，静置，再次调整溶液的参数至ｐＨ６．８～６．９，温度－４～－５℃，酒精浓度１８～２２％，蛋白浓度４．１～４．５％、离子强度０．１２～０．１４，搅拌反应３０分钟以上，静置；加入助滤剂，过滤，得沉淀组分（１２３）；（Ｃ）制备组分（３）： 组分（１２３）加冷蒸馏水溶解，并调控至ｐＨ５．１～５．２，温度－３～－６℃，酒精浓度１６～２０％，离子强度０．１４～０．１６，搅拌反应３０分钟以上，过滤得到上清液及沉淀组分（３）；（Ｄ）制备组分（２）：调控步骤Ｃ中的上清液至ｐＨ７． ０～７．６，温度－８～－１１℃，酒精浓度２２～２８％，离子强度０．０４５～０．０５５，搅拌反应３０分钟以上，过滤得到沉淀组分（２）；（Ｅ）对组分（２）进行溶解，调控ｐＨ至５．０～５．５，温度２～８℃，搅拌反应３０分钟以上，超滤浓缩； （Ｆ）病毒灭活；（Ｇ）配液及分装。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：朱光祖，梅伟伶，
申请(专利权)人：三九集团湛江开发区双林药业有限公司，
类型：发明
国别省市：44[中国|广东]