一种具有促进角质细胞有丝分裂作用的活性多肽及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种具有促进角质细胞有丝分裂作用的的活性多肽及其应用，其序列为ＲＫＫＲＲＱＲＲＲＡＳＴＴＴＮＹＴ，该活性多肽由穿膜肽和功能肽融合而成，本发明专利技术克服了功能肽不易通过皮肤磷脂屏障的缺点，通过穿膜肽的作用顺利进入到皮肤细胞间质中发挥其作用，并可进一步穿透细胞膜，进入细胞内部，从而促进皮肤角质细胞的有丝分裂。本发明专利技术在制备用于治疗牛皮癣的药物中的应用，可使其通过皮肤给药途径达到治疗目的；本发明专利技术作为化妆品的应用，使产品具备了使皮肤角质层更新换代加快的作用，形成新鲜的角质层均匀、致密、弹性良好，故可产生除皱美容的效果。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种活性多肽，特别是涉及一种具有促进角质细胞有丝分裂作用的活性多肽。
技术介绍
目前市场所流行的各种美容化妆品中，有些添加了各种皮肤生长因子类多肽或蛋白类物质，这些生长因子在体外细胞培养实验中均可有效促进皮肤角质细胞的有丝分裂，添加于化妆品中，可使皮肤角质层更新换代加快，从而形成新鲜、致密的角质层，以达到美容的目的。但皮肤角质层下是一层拒水的磷脂膜屏障，其功能是阻挡体内外水分的交换，所以，水溶性物质一般不能透过皮肤进入体内，使上述做法收效甚微，为了解决这个问题，目前化妆品中添加水溶性生长因子的方法是用表面活性剂(多为氮酮)将这些物质制备成油包水型细微颗粒，以相似相溶原理使其越过皮肤磷脂膜屏障，顺利进入皮下组织，这种方法是一种有效的化学方法，但需以损伤皮肤为代价，并且所用表面活性剂对皮肤均有一定毒副作用，有些甚至会引起皮肤炎症，产生不良效果。基础研究发现，有一类富含精氨酸和赖氨酸的多肽可以以非能量、非受体依赖方式自由出入细胞膜内外，并与浓度、温度等环境因素无关，因此称为穿膜肽，已经有很多用穿膜肽将其它多肽或DNA等物质携带进入细胞内部的成功报道，但尚未见到用于化妆品的报道。
技术实现思路
本专利技术提供一种具有促进角质细胞有丝分裂作用的活性多肽及其应用，其用穿膜肽与有促进角质细胞有丝分裂作用的功能肽融合，从而组成一种新的融合肽，可顺利携带功能肽越过皮肤磷脂屏障，进入皮下组织，产生相应作用。一种具有促进角质细胞有丝分裂作用的活性多肽，其序列为RKKRRQRRRASTTTNYT，其中R＝Arg＝arginine＝精氨酸，K＝Lys＝lysine＝赖氨酸，Q＝Gln＝glutamine＝谷酰胺，A＝Ala＝alanine＝丙氨酸，S＝Ser＝serine＝丝氨酸，T＝Thr＝threonine＝苏氨酸，N＝Asn＝asparagine＝天冬酰胺，Y＝Tyr＝tyrosine＝酪氨酸。该活性多肽由穿膜肽和功能肽融合而成，穿膜肽位于其序列的前9个氨基酸，是爱滋病病毒(HIV)的转录活化因子---Tat蛋白的碱性区域片段多肽HIV-Tat49-57，RKKRRQRRR，在Tat蛋白中，其主要功能是介导Tat蛋白发生细胞内在化，即穿透细胞膜，将爱滋病病毒DNA导入感染细胞内，本专利技术用这条肽的穿膜作用将另一条功能多肽导入皮肤角质层细胞间质及细胞内部。功能多肽位于其序列的后8个氨基酸，是爱滋病病毒(HIV)包膜糖蛋白gp120中的一段多肽类似物，ASTTTNYT，即T肽。T肽在0.1umol/L时就具有致角质细胞有丝分裂的作用。在T肽治疗牛皮癣的临床研究中，采用静脉滴注或病灶部位局部注射的方法都取得了良好的效果，使用一周后，病人的牛皮癣病情则得到缓解，使用一个月，可使约50％的病人的牛皮癣消失。但这种给药方法并不是最佳的，尤其对于皮肤病来说，应以皮肤给药途径最为理想。一种具有促进角质细胞有丝分裂作用的活性多肽在制备用于治疗牛皮癣的药物中的应用。一种具有促进角质细胞有丝分裂作用的活性多肽作为化妆品的应用。本专利技术的活性多肽具备了自行穿透皮肤磷脂膜屏障和细胞膜的能力，进入皮肤细胞间质和细胞后，体内氨肽酶将开始水解穿膜肽，因穿膜肽富含精氨酸，其代谢产生的一氧化氮具有舒张血管之作用，可以改善皮肤血液循环，有利于皮肤健康。随着穿膜肽被水解完毕，则释放出功能肽，而功能肽则具有促角质细胞有丝分裂的作用。功能肽也会逐步被水解，其产物为氨基酸，不会对皮肤产生副作用。本专利技术克服了功能肽不易通过皮肤磷脂屏障的缺点，顺利进入到皮肤细胞间质中发挥其作用。用于牛皮癣的治疗，可使其通过皮肤给药途径达到治疗目的；用于化妆品，使产品具备了使皮肤角质层更新换代加快的作用，形成新鲜的角质层均匀、致密、弹性良好，故可产生除皱美容的效果。具体实施例方式实施例1一种具有促进角质细胞有丝分裂作用的活性多肽，其序列为RKKRRQRRRASTTTNYT，可以用化学合成的方法获得，采用固相多肽合成工艺，本专利技术采用工业多肽合成设备实施，选用Wang resin或2-Cl-resin，每批次用树脂5克，催化剂HOBT/DCC和保护氨基酸用量按树脂量的5倍使用。保护氨基酸的保护方案分Fmoc和Boc法两种在Boc法中氨基酸的α--氨基用Boc(叔丁基氧羰酰基)基团进行保护封闭，该基团对弱酸敏感，可以用50％的三氟乙酸将其脱除，侧链活性基团如氨基、巯基、羟基、羧基、胍基等可以用对甲苯磺酰基(Tos)、叔丁基(tBU)、苯甲氧基(Bzl)、硝基(NO2)等进行保护，这些保护基团可用氢化催化方法脱除，每连接一个氨基酸，用三氟乙酸将α-氨基的保护基团脱除使氨基游离出来，可与第二个氨基酸的羧基进行缩合，重复脱保护，缩合可使肽链逐步延长，最后用HF或三氟甲基磺酸可将第一个氨基酸的羧基与树脂之间的连接键切断，同时也切除了所有侧链保护基团，使活性多肽裸露出来获得粗肽，用HPLC可对粗肽进行纯化获得纯肽；在Fmoc法中，氨基酸的α-氨基用Fmoc基团保护，此基团与氨基之间的连接键对碱敏感而对酸稳定，可用哌啶切断，侧链活性基团用对酸敏感而对碱稳定的基团进行保护，如(Trt，Boc，2-Cl-Z，tBu等)，每连接一个氨基酸，用哌啶除去α-氨基的Fmoc保护基团，使氨基游离出来，可与第二个氨基酸的羧基进行缩合，重复脱保护，缩合可使肽链逐步延长，最后用三氟乙酸∶酚∶乙基二硫醇∶苯甲硫醚∶水＝82.5∶0.75∶2.5∶2.5∶5混合切割试剂，每克树脂用15毫升切割试剂，可将第一个氨基酸的羧基与树脂之间的连接键切断，同时也切除了所有侧链保护基团，使活性多肽裸露出来获得粗肽，用HPLC可对粗肽进行纯化获得纯肽。实施例2本专利技术可以用基因重组的方法获得，按常规DNA合成方法制备本专利技术对应的基因序列，将这个多肽的基因序列克隆到载体质粒中，再将质粒输送到大肠杆菌中，从而构建一个基因工程菌，对该基因工程菌进行人工培养，可以生产出富含该活性多肽的包涵体，用盐酸胍或尿素溶解包涵体，用HPLC进行相关纯化处理，可得到纯的活性多肽，用做美容产品或牛皮癣治疗产品的原料。本专利技术在常规角质细胞培养对照实验中，在0.1umol/L时，可以使细胞周期缩短25-35％。应用示例应用示例1按重量百分比，用甘油30±10％、水30±10％、薄荷油5±1％、冰片5±1％、凡士林30±10％、苯甲酸钠0.01％以及本专利技术的活性多肽1±0.5mmol，按上述配比调制成粘稠状油质液体，可涂抹于皮肤表面的牛皮癣病灶部位，用于治疗牛皮癣。应用示例2按重量百分比，用聚乙烯醇20±5％、甘油25±5％、水25±10％、透明质酸钠30±10％、苯甲酸钠0.01％以及本专利技术的活性多肽1±0.5mmol按上述配比调制成一种晶莹透明的液体，成为一种高级美容化妆品，具有增加皮肤弹性，促进皮肤角质更新，消除皮肤皱褶，使皮肤鲜艳的美容作用。应用示例3在上述应用示例2的基础上，添加氨基酸、维生素、乙酸乙酯(或各种天然油质香精)适量，生产各种营养性美容化妆品。序列表<110>陕西九州科技股份有限公司<120>一种具有促进角质细胞有丝分裂作用的活性多肽及其应用<160>1&本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种具有促进角质细胞有丝分裂作用的活性多肽，其序列为ＲＫＫＲＲＱＲＲＲＡＳＴＴＴＮＹＴ。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：赵金礼，
申请(专利权)人：陕西九州科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：87[中国|西安]