本发明专利技术公开了一种淋球菌、梅毒螺旋体、沙眼衣原体、解脲脲原体的杂交膜条和检测试剂盒，所述试剂盒包括有：杂交膜条，所述杂交膜条的硝酸纤维素膜上固定有以下至少一种探针：针对淋球菌、沙眼衣原体、梅毒螺旋体、解脲脲原体的分别与SEQ ID NO.13、SEQ ID NO.14、SEQ ID NO.15、SEQ ID NO.16完全互补的寡核苷酸序列；扩增引物。本发明专利技术所述试剂盒通过特殊的检测片段选取，可以实现单种微生物的检测，更能实现在同一管PCR反应中，同时检测4种病原微生物的存在，为筛查提供了一个简单、快速、廉价的选择。
【技术实现步骤摘要】
淋球菌、梅毒螺旋体、沙眼衣原体、解脲脲原体的杂交膜条和检测试剂盒
本专利技术属于医学检测领域，具体的是涉及淋球菌、梅毒螺旋体、沙眼衣原体、解脲脲原体的杂交膜条和检测试剂盒。
技术介绍
淋球菌(Neisseriagonorrhoeae，NG)/梅毒螺旋体(Treponemapallidum，TP)/沙眼衣原体(Chlamydiatrachomatis，CT)/解脲脲原体(Ureaplasmaurealyticum，UU)是临床比较常见的通过性传播的微生物。淋球菌主要引起泌尿生殖系统的化脓性感染，如淋菌性尿道炎和宫颈炎，感染初期临床上无症状，若未及时治疗，还可经由尿道或宫颈局部扩散感染，引起附睾炎、盆腔炎等疾病。解脲脲原体感染后可引起尿道炎、宫颈炎和前庭大腺炎；上行感染时，可引起男性前列腺炎或附睾炎，女性子宫内膜炎、盆腔炎和输卵管炎，是不孕不育的重要原因。沙眼衣原体感染后，在男性患者中可出现非淋菌性尿道炎、附睾炎、前列腺炎等；在女性患者中会出现子宫颈炎、尿道炎、盆腔炎等，若感染后不能得到及时诊断和治疗，会产生一系列严重并发症，如输卵管源性不孕、异位妊娠等疾病。梅毒是由梅毒螺旋体(亦称苍白螺旋体)感染人体所引起的一种系统性、慢性经典的性传播疾病，可累及人体多系统多脏器的损害，产生多种多样复杂的临床症状和体症，导致组织破坏、功能失常，甚至危及生命。故及时且精准的实验室病原体检测对早期性病患者的治疗有重要意义。目前用于检测这四种病原微生物(NG/TP/CT/UU)常见的实验方法有培养法、镜检法、酶免检测法、金标法和核酸扩增荧光探针法等，培养法检测方法虽然准确可靠，但存在耗时长、费用高、检出率低，需要高标准的实验室条件和运输条件等；酶免检测通过抗原抗体的结合反应，检测血清中的针对上述四种微生物特异性抗体。其方法简便快速但灵敏度和特异性各方面仍有待提高，核酸扩增荧光探针法通过检测上述微生物特异性的核酸序列来判断样品中是否存在相应微生物，此方法兼具灵敏度和特异性，但仍存在费用高，需要特殊仪器设备和专业技术人员操作，无法一次性检测四种病原微生物等缺点。上述方法在进行普筛时，或存在周期长、操作复杂的缺点，或存在成本高、实验条件、专业技术要求高的缺点。
技术实现思路
本专利技术的目的之一是提供一种快速检测淋球菌、梅毒螺旋体、沙眼衣原体、解脲脲原体的试剂盒，该试剂盒具有很好的特异性以及敏感性，可用于快速检测淋球菌、梅毒螺旋体、沙眼衣原体、解脲脲原体。实现上述目的的技术方案如下。一种快速检测淋球菌、梅毒螺旋体、沙眼衣原体、解脲脲原体的试剂盒，包括有：(1)杂交膜条，所述杂交膜条的硝酸纤维素膜上固定有以下至少一种探针：针对淋球菌、沙眼衣原体、梅毒螺旋体、解脲脲原体的分别与SEQIDNO.13、SEQIDNO.14、SEQIDNO.15、SEQIDNO.16完全互补的寡核苷酸序列；(2)扩增引物：包括与(1)相应地针对淋球菌、沙眼衣原体、梅毒螺旋体、解脲脲原体的扩增引物分别为SEQIDNO.1和SEQIDNO.2，SEQIDNO.3和SEQIDNO.4，SEQIDNO.5和SEQIDNO.6，SEQIDNO.7和SEQIDNO.8中至少一对扩增引物，针对淋球菌、沙眼衣原体、梅毒螺旋体、解脲脲原体的扩增引物的正向引物的5’端分别连接有SEQIDNO.13、SEQIDNO.14、SEQIDNO.15、SEQIDNO.16的标签序列，所述扩增引物的反向引物连接有第一显色标记物。在其中一个实施例中，还包括有微球，所述微球上连接有能与第一显色标记物对应结合的第二显色标记物，优选地，所述第一显色标记物为生物素，第二第二显色标记物为链酶亲和素。在其中一个实施例中，所述杂交膜条的硝酸纤维素膜上固定有四种探针：针对淋球菌、沙眼衣原体、梅毒螺旋体、解脲脲原体的分别与SEQIDNO.13、SEQIDNO.14、SEQIDNO.15、和SEQIDNO.16完全互补的寡核苷酸序列。本专利技术的另一个目的是提供一种用于检测淋球菌、梅毒螺旋体、沙眼衣原体、解脲脲原体的杂交膜条。具体技术方案如下。一种用于检测淋球菌、梅毒螺旋体、沙眼衣原体、解脲脲原体的杂交膜条，包括有PVC板，PVC板上粘贴有硝酸纤维素膜，所述硝酸纤维素膜上固定有以下至少一种探针：针对有淋球菌、梅毒螺旋体、沙眼衣原体、解脲脲原体的分别与SEQIDNO.13、SEQIDNO.14、SEQIDNO.15、SEQIDNO.16完全互补的寡核苷酸序列。在其中一个实施例中，所述膜条上固定有四种探针：针对淋球菌、沙眼衣原体、梅毒螺旋体、解脲脲原体的分别与SEQIDNO.13、SEQIDNO.14、SEQIDNO.15、和SEQIDNO.16完全互补的寡核苷酸序列。本专利技术具有以下优点：1)本专利技术所述试剂盒通过特殊的检测片段选取，可以实现单种微生物的检测，更能实现在同一管PCR反应中，同时检测4种病原微生物的存在，为筛查提供了一个简单\快速\廉价的选择；2)经过专利技术人的经验积累和大量实验所筛选到的扩增引物，以及探针，结合优化的杂交膜条，得到的检测淋球菌、梅毒螺旋体、沙眼衣原体、解脲脲原体的试剂盒具有非常好的特异性和灵敏度，同时又能快速检测4种病原体。3)特殊的膜杂交技术，不需要使用杂交仪，在室温情况下，在PCR管中即可完成杂交，比目前普遍使用的杂交方案，节省了时间和设备成本。4)结果可以用肉眼判读，大大降低的使用成本。附图说明图1为本专利技术的检测试剂盒制备和检测的示意图。图2为杂交膜条的检测结果示意图。图3为NG特异性实验结果示意图。图4为CT特异性实验结果示意图。图5为UU特异性实验结果示意图。图6为TP特异性实验结果示意图。图7为灵敏度实验结果示意图。图8为四种病原微生物PCR扩增片段电泳图，图中从左到右样本编号：1-8。图9为常见干扰物质的抗干扰实验结果示意图，A:CT抗干扰实验；B：UU抗干扰实验；C:TP抗干扰实验；D:NG抗干扰实验；图中从左到右样本编号：1-8。具体实施方式为了便于理解本专利技术，下面将参照相关附图对本专利技术进行更全面的描述。附图中给出了本专利技术的较佳实施例。但是，本专利技术可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本专利技术的公开内容的理解更加透彻全面。除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本专利技术的
的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本专利技术的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本专利技术。本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。一种多重PCR技术同时扩增CT/UU/NG/TP保守序列：通过序列分析，本试剂盒分别选取四种病原微生物的特异性保守区域作为目标扩增区域，并设计特异性的引物作为扩增引物，其对应扩增区域及引物见下表：本专利技术所述试剂盒是采用PCR核酸扩增结合膜层析显色的方法同时进行四种病原微生物DNA(NG/TP/CT/UU)的定性检测。采通过一对分别含有核苷酸标签(Tag)和生物本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种淋球菌、梅毒螺旋体、沙眼衣原体、解脲脲原体的检测试剂盒，其特征在于，包括有：(1)杂交膜条，所述杂交膜条的硝酸纤维素膜上固定有以下至少一种探针：针对淋球菌、沙眼衣原体、梅毒螺旋体、解脲脲原体的分别与SEQ ID NO.13、SEQ ID NO.14、SEQ ID NO.15、SEQ ID NO.16完全互补的寡核苷酸序列；(2)扩增引物：包括与(1)相应地针对淋球菌、沙眼衣原体、梅毒螺旋体、解脲脲原体的扩增引物分别为SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2，SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4，SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6，SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8中至少一对扩增引物，针对淋球菌、沙眼衣原体、梅毒螺旋体、解脲脲原体的扩增引物的正向引物的5’端分别连接有SEQ ID NO.13、SEQ ID NO.14、SEQ ID NO.15、SEQ ID NO.16的标签序列，所述扩增引物的反向引物连接有第一显色标记物标记物。
【技术特征摘要】
1.一种淋球菌、梅毒螺旋体、沙眼衣原体、解脲脲原体的检测试剂盒，其特征在于，包括有：(1)杂交膜条，所述杂交膜条的硝酸纤维素膜上固定有以下至少一种探针：针对淋球菌、沙眼衣原体、梅毒螺旋体、解脲脲原体的分别与SEQIDNO.13、SEQIDNO.14、SEQIDNO.15、SEQIDNO.16完全互补的寡核苷酸序列；(2)扩增引物：包括与(1)相应地针对淋球菌、沙眼衣原体、梅毒螺旋体、解脲脲原体的扩增引物分别为SEQIDNO.1和SEQIDNO.2，SEQIDNO.3和SEQIDNO.4，SEQIDNO.5和SEQIDNO.6，SEQIDNO.7和SEQIDNO.8中至少一对扩增引物，针对淋球菌、沙眼衣原体、梅毒螺旋体、解脲脲原体的扩增引物的正向引物的5’端分别连接有SEQIDNO.13、SEQIDNO.14、SEQIDNO.15、SEQIDNO.16的标签序列，所述扩增引物的反向引物连接有第一显色标记物标记物。2.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，还包括有微球,微球上连接有能与所述第一显色标记物相应连接的第二显示标记物。3.根据权利要求2所述的检测试剂盒，其特征在于，所述第一显色标记物是生物素，第二显示标记物是链酶亲和素。4.根据权利要求1-3任一所述的检测试剂盒，其特征在于，所述硝酸纤维素膜上上固定有四种探针：针对淋球菌、沙眼衣原体、梅毒螺旋体、解脲脲原体的分别与SEQIDNO.13、SEQIDNO.14、SEQIDNO.15、和SEQIDNO.16完...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨祥胜，
申请(专利权)人：广州市宝创生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44
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