一种抑菌的类芽孢杆菌发酵液提取物的制备方法技术

本发明专利技术提供了一种抑菌的类芽孢杆菌(Paenibacillus sp.)发酵液提取物的制备方法。该制备方法包括下述步骤：在牛乳中培养多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)CGMCC No.10062，收集发酵液的上清液即得。本发明专利技术所提供的制备方法所制得的抑菌的类芽孢杆菌发酵液提取物具有广谱和高效的抑菌效果，可有效抑制或杀死病原菌。

【技术实现步骤摘要】
一种抑菌的类芽孢杆菌发酵液提取物的制备方法
本专利技术属于微生物
，具体涉及一种抑菌的类芽孢杆菌发酵液提取物的制备方法。
技术介绍
食品在加工、保藏、运输等过程中极易受到外界微生物的污染而发生变质腐败，传统保藏食物的方法通常是腌制、烟熏、地窖存放、酒渍等。随着科学技术的不断发展，化学合成防腐剂成为食品工业中最重要的添加剂之一。然而研究发现这些化学合成防腐剂不仅影响食品原有的风味而且还存在着对人体潜在的诱癌性、致畸性或者造成食物中毒等安全隐患，因此，寻找和开发可有效抑制或杀死食品中病原菌的天然、安全的抗菌剂无疑可促进食品和医药行业的进步。类芽孢杆菌(Paenibacillussp.)广泛存在于土壤、植物茎叶、果实、根系和天然发酵食品中，部分类芽孢杆菌能产生高效丰富的抗菌物质，对多种病原菌具较强抑制作用，在生物防治和食品防腐方面有着重要的前景。同时，类芽孢杆菌具有生长繁殖快、易于存活、抗逆性强、营养要求简单等优点，有利于大规模制备其菌体或特定的代谢产物。因此，寻找和开发可有效抑制或杀死食品中病原菌的天然、安全的抗菌剂可促进食品和医药行业的进步。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是为了克服现有技术中医药和食品领域的化学合成防腐剂会影响食品原有的风味且还存在对人体潜在的诱癌性、致畸性或者造成食物中毒等安全隐患、缺少天然、安全的抑菌剂这一技术问题，提供了一种抑菌的类芽孢杆菌发酵液提取物的制备方法。所述制备方法能够高效地制得抑菌的类芽孢杆菌发酵液提取物；所述抑菌的类芽孢杆菌发酵液提取物具有广谱和高效的抑菌效果，可有效抑制或杀死食品中病原菌。本专利技术技术方案之一：一种抑菌的类芽孢杆菌发酵液提取物的制备方法，包括下述步骤：在牛乳中发酵多粘类芽孢杆菌CGMCCNo.10062，收集发酵液的上清液即得。本专利技术中，所述多粘类芽孢杆菌已于2014年11月26日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，邮编：100101，保藏编号为：CGMCCNo.10062，培养物名称是BD3736，分类命名是Paenibacilluspolymyxa。本专利技术中，所述牛乳可以为本领域常规的牛乳，较佳地为全脂牛乳和/或脱脂牛乳，更佳地为脱脂牛乳。。所述牛乳可以是生鲜乳或者复原乳。所述牛乳的固形物含量可以为本领域常规的含量，较佳地为2-15％，更佳地为10-15％，最佳地为10％，所述百分比为所述固形物的质量占所述牛乳体积的质量体积百分比。本专利技术中，所述发酵的温度可以为本领域常规的温度，较佳地为25-35℃，更佳地为30℃。所述发酵的时间可以为本领域常规的时长，较佳地为1-7天，更佳地为4-6天，最佳地为5天；所述发酵较佳地为振荡培养，所述振荡培养的转速可以为本领域常规的转速，较佳地为180r/min。本专利技术中，所述收集发酵液的上清液可以为本领域常规的操作，较佳地包括以下步骤：将所述发酵液中的多粘类芽孢杆菌CGMCCNo.10062灭活，离心，收集上清液。所述灭活可以为本领域常规的操作，如高温水浴，过滤除菌，超高压杀菌等，较佳地为在50-80℃下水浴5-15min、冷却，更佳地为在60℃下水浴10min，冷却至室温。所述离心可以为本领域常规的操作，所述离心的转速较佳地为9000r/min，所述离心的时间较佳地为25min。本专利技术中，所述制备方法较佳地还可以包括以下步骤：向所述发酵液中加入盐进行沉淀、离心，收集沉淀物。所述盐可以为本领域常规的盐，较佳地为硫酸铵。所述沉淀的时间可以为本领域常规，较佳地为4-24h。所述盐的终饱和度可以为本领域常规的饱和度，较佳地为40-90％，更佳地为80％，所述百分比为所述盐的质量占所述发酵液和盐的总体积的质量体积百分比。所述离心的转速可以为本领域常规的转速，较佳地为9000r/min；所述离心的时间可以为本领域常规的时长，较佳地为25min。本专利技术中，所述制备方法较佳地还可以包括以下步骤：纯化所述沉淀物，所述纯化所述沉淀物在所述收集沉淀物后进行。所述纯化较佳地包括以下步骤：重悬所述沉淀物、透析、过凝胶过滤层析。所述重悬所用的溶液可以为本领域常规的溶液，较佳地为超纯水。所述透析可以为本领域常规的透析，所述透析带的截留分子量较佳地可以为3500Da和1000Da；所述透析的温度较佳地为4℃；所述透析的时间较佳地为4-24h。所述凝胶过滤层析的层析柱可以为本领域常规的层析柱，较佳地为筛选分子量范围为100Da-1500Da的层析柱，更佳地为SephadexG-15。本专利技术中，所述抑菌的类芽孢杆菌发酵液提取物较佳地包括分子量在25kDa-37kDa之间的蛋白质和小于10kDa的蛋白质，更佳地为分子量小于10kDa的蛋白质。本专利技术中，所述抑菌的类芽孢杆菌发酵液提取物较佳地可以抑制革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌。所述革兰氏阴性菌较佳地包括大肠杆菌(Escherichiacoli)、福氏志贺氏菌(Shigellaflexneri)及肠炎沙门氏菌(Salmonellaenteritidis)；所述革兰氏阳性菌较佳地包括单增李斯特菌(Listeriamonocytogenes)、藤黄小球菌(Micrococcusluteus)及枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)。本专利技术中，所述抑菌的类芽孢杆菌发酵液提取物的抑菌活性不受温度的影响。具体地，分别在60℃、80℃和100℃中水浴30min，或在121℃下处理15min后所述抑菌的类芽孢杆菌发酵液提取物的抑菌活性不受影响。本专利技术中，所述抑菌的类芽孢杆菌发酵液提取物的抑菌活性不受pH值的影响。具体地，在pH分别为3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0和9.0时室温放置2h后，所述抑菌的类芽孢杆菌发酵液提取物的抑菌活性不受影响。本专利技术中，所述抑菌的类芽孢杆菌发酵液提取物的抑菌活性受胃蛋白酶或蛋白酶K影响，不受脂肪酶或胰蛋白酶影响。在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本专利技术各较佳实例。本专利技术所用试剂和原料均市售可得。本专利技术的积极进步效果在于：本专利技术提供的一种多粘类芽孢杆菌(Paenibacilluspolymyxa)所产生的抑菌的类芽孢杆菌发酵液提取物的制备方法所制得的抑菌的类芽孢杆菌发酵液提取物具有广谱和高效的抑菌效果，可有效抑制或杀死食品中病原菌。生物材料保藏信息本专利技术中，所述多粘类芽孢杆菌已于2014年11月26日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，邮编：100101，保藏编号为：CGMCCNo.10062，培养物名称是BD3736，分类命名是Paenibacilluspolymyxa。附图说明图1为本专利技术所述抑菌的类芽孢杆菌发酵液提取物对不同种类细菌的抑菌效果。图2为本专利技术所述抑菌的类芽孢杆菌发酵液提取物经SephadexG-15柱层析后不同收集管在280nm处的紫外吸收结果。图3为本专利技术所述抑菌的类芽孢杆菌发酵液提取物经SephadexG-15柱层析后不同收集管洗脱液对沙门氏菌的抑菌活性。图4为本专利技术所述抑菌的类芽孢杆菌发酵液提取物经SephadexG-15柱层析后不同收本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种抑菌的类芽孢杆菌(Paenibacillus sp.)发酵液提取物的制备方法，其特征在于，其包括下述步骤：在牛乳中发酵多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)CGMCC No.10062，收集发酵液的上清液即得。

【技术特征摘要】
1.一种抑菌的类芽孢杆菌(Paenibacillussp.)发酵液提取物的制备方法，其特征在于，其包括下述步骤：在牛乳中发酵多粘类芽孢杆菌(Paenibacilluspolymyxa)CGMCCNo.10062，收集发酵液的上清液即得。2.如权利要求1所述制备方法，其特征在于，所述牛乳为选自全脂牛乳和/或脱脂牛乳。3.如权利要求1所述制备方法，其特征在于，所述牛乳的固形物含量为2-15％，所述百分比为所述固形物的质量占所述牛乳的体积的质量体积百分比。4.如权利要求1所述制备方法，其特征在于，所述发酵的温度为25-35℃；和/或，所述发酵的时间为1-7天；和/或，所述发酵为振荡培养。5.如权利要求4所述制备方法，其特征在于，所述振荡培养的转速为180转/分钟。6.如权利要求1所述制备方法，其特征在于，所述收集发酵液的上清液包括以下步骤：将所述发酵液中的多粘类芽孢杆菌CGMCCNo.10062灭活、离心，收集上清液；所述灭活较佳地为在50-80℃下水浴5-15min；所述冷却较佳地为冷却至室温；所述离心较佳地为9000r/min离心25min。7.如权利要求6所述制备方法，其特征在于，所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：高彩霞，刘振民，吴正钧，崔燕丽，吴江，吴申懋，
申请(专利权)人：光明乳业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31