用于治疗隐球菌病的组合物和方法技术

本文所述的发明专利技术提供了在非人动物中生产的人抗体，其特异性地结合新型隐球菌荚膜葡萄糖醛酸木甘露聚糖（ＧＸＭ）。本发明专利技术还提供了在非人动物中制备所述抗体和在细胞（包括杂交瘤和重组宿主细胞体系）中表达所述抗体的方法。除了通过给患者施用本文所述的抗体或组合物来诊断、治疗、抑制或预防新型隐球菌感染或由这样的感染造成的病症或障碍的方法外，本发明专利技术还提供了包含所述抗体的试剂盒和组合物。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及用于治疗或预防新型隐球菌(Cryptococcusneoformans)感染和由这种感染造成的病症的组合物和方法。本专利技术涉及能特异性地结合新型隐球菌荚膜葡萄糖醛酸木甘露聚糖(glucuronoxylomannan)(GXM)的人抗体和编码该抗体的核酸分子。本专利技术还涉及针对新型隐球菌GXM的人抗体的分离的重链和轻链免疫球蛋白分子。本专利技术还涉及编码这样的重链和轻链免疫球蛋白分子的核酸分子。本专利技术还包含针对新型隐球菌GXM的人抗体，它们是嵌合的、双特异性的、衍生的、单链抗体或融合蛋白的一部分。本专利技术还涉及检测或监测新型隐球菌感染的方法。本专利技术还涉及在非人的动物中制备所述抗体和在细胞系(包括杂交瘤和重组宿主细胞系统)中表达所述抗体的方法。本专利技术还涉及包含所述抗体的试剂盒和药物组合物。本专利技术还涉及通过给患者施用本文所述的组合物，治疗或预防新型隐球菌感染和由这样的感染造成的病症的方法。
技术介绍
新型隐球菌是一种重要的人病原体，且是人(特别是免疫受损(immunocompromised)的那些)发病率和死亡率的主要原因。尽管可以得到针对新型隐球菌有活性的抗真菌剂，隐球菌病在免疫受损的患者中多半不能治愈，因为不能完全根除该生物体。因而，治疗可能需要昂贵的终生的抗真菌预防或维持疗法来控制感染。有几种治疗可以预防复发病，包括吡咯预防，它与高活性的抗逆转录病毒疗法一起，在发达国家已经降低了HIV-相关的隐球菌病的发病率。但是，隐球菌病在其它免疫受损的患者群体中是新出现的问题，且在发展中国家仍然是脑膜脑炎的主要原因。而且，由于使用抗真菌药物的延长时间的维持疗法，耐药菌株的发生率也在增加。因此，迫切需要预防和治疗隐球菌病的其它方法。
技术实现思路
本专利技术提供了分离的能特异性地结合新型隐球菌荚膜葡萄糖醛酸木甘露聚糖(GXM)的人抗体。更具体地，本专利技术提供了能识别新型隐球菌GXM的单克隆抗体G14F7E5、G15B4G5和G19B9G7。单克隆抗体G15B4G5在被动免疫中能有效地针对新型隐球菌攻击提供保护作用。本专利技术还提供了在非人的动物中制备所述抗体和在细胞系(包括杂交瘤和重组宿主细胞系统)中表达所述抗体的方法。本专利技术还提供了包含所述抗体的试剂盒和药物组合物。而且，本专利技术提供了通过给患者施用本文所述的药物组合物，治疗或预防新型隐球菌感染和由这样的感染造成的病症的方法。附图说明图1显示了可溶的GXM对G14F7E5、G15B4G5和G19B9G7的抑制曲线。显示了ELISA结合。小图A显示了可溶的SB4对单克隆抗体与24067的结合的抑制；小图B显示了24067对单克隆抗体与24067的结合的抑制；小图C显示了可溶的SB4对单克隆抗体与H99的结合的抑制。将结合表示为，显示在y轴上的在405nm的吸光度(Abs)相对于x轴上所示的单克隆抗体浓度。图2显示了使用单克隆抗体G14F7E5、G15B4G5和G19B9G7进行的被动免疫实验。图3中的表对比了针对新型隐球菌GXM的单克隆抗体的CDR1和CDR2的一部分。粗体且标有下划线的残基是鼠和人XenoMouse小鼠-来源的单克隆抗体共有的；粗体且斜体的残基是体细胞突变；斜体(未加粗)的残基是在抗体中类似的、但是在不同位置的残基；小写的残基与减小了的GXM结合相关联。Hu-人；Ms-小鼠。具体实施例方式本专利技术提供了能特异性地结合新型隐球菌GXM的全人抗体或其抗原结合部分。在一些实施方案中，全人抗体是单克隆的。其它的实施方案包括包含核苷酸序列的核酸分子，所述的核苷酸序列编码所述抗体的重链和轻链的全部或部分，和包含由这样的核苷酸序列编码的氨基酸序列的多肽，尤其是包含互补决定区(CDR)的序列。还提供了与本文所述的抗体具有类似的结合性质的抗体和具有类似的功能性的抗体(或其它拮抗剂)。还提供了能表达这样的免疫球蛋白分子和单克隆抗体的杂交瘤。除非本文中另有定义，在本专利技术中使用的科技术语应当具有本领域的普通技术人员通常理解的含义。而且，除非上下文另有要求，单数术语应当包括复数，且复数术语应当包括单数。一般地，与本文所述的细胞和组织培养、分子生物学、免疫学、微生物学、遗传学以及蛋白质和核酸化学和杂交有关地使用的术语和技术，是本领域熟知的和常用的那些。除非另有说明，通常根据本领域熟知的常规方法，和如本说明书引用和讨论的各种一般的和更具体的文献所述的，实施本专利技术的方法和技术。参见，例如，Sambrook等，Molecular CloningALaboratory Manual，第2版，Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，N.Y.(1989)和Ausubel等，Current Protocols in Molecular Biology，Greene Publishing Associates(1992)，以及Harlow和Lane，AntibodiesA Laboratory Manual Cold Spring Harbor LaboratoryPress，Cold Spring Harbor，N.Y.(1990)，它们在这里引作参考。如本领域常用的或如本文所述的，根据生产商的说明书，进行酶反应和纯化技术。与本文所述的分析化学、合成有机化学和医学与药物化学有关地使用的术语及实验室操作和技术，是本领域熟知的和常用的那些。使用标准技术进行化学合成、化学分析、药物制备、制剂及输送和治疗患者。下面的术语具有下面的一般含义，如它们在本文中所使用的“B淋巴细胞或其后代”是指从B淋巴细胞系传下来或注定要成为B淋巴细胞系的任何细胞。实例包括但不限于从最早的B淋巴细胞干细胞开始直至记忆B细胞、浆细胞的B细胞发育途径中的所有B淋巴细胞，和体外建立的任何杂交瘤。″双特异性的抗体″是对2个单独分开的抗原具有亲和力的单一抗体。例如，双特异性的抗体可以使用重链和轻链的一种组合识别新型隐球菌GXM，并可以使用与第一组合相连的重链和轻链的第二组合识别白细胞的细胞表面标记。参见，例如，McCormick等，J.Immunol.1583474-82(1997)。″嵌合抗体″是已经从它们的原始形式改变成包含来自另一种蛋白的氨基酸序列的抗体。嵌合抗体保留了至少一部分原始抗体氨基酸序列，典型地该部分包含抗原结合区(Fab)。嵌合抗体的实例包括但不限于双特异性的抗体和与其它非免疫球蛋白的蛋白序列的融合体。“细胞因子”通常是指免疫系统的信号传递分子。细胞因子包括但不限于白介素(IL)，转化生长因子(TGF)，肿瘤坏死因子(TNF)，淋巴毒素(LT)，干扰素，粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)，巨噬细胞CSF，粒细胞CSF和迁移抑制因子。“衍生”是指使非免疫球蛋白活性剂连到免疫球蛋白分子上的过程。衍生剂的实例包括但不限于毒素、补体、抗生素、肽、多糖、脂类、有机聚合物、放射标记和无机化合物。“融合蛋白”是指包含2种或多种不同蛋白的氨基酸序列的嵌合蛋白。典型地，融合蛋白由本领域熟知的体外重组技术产生。但是，融合蛋白可以由体内交换或其它重组事件产生。如本文所使用的，术语“多肽片段”指具有氨基末端和/或羧基末端缺失的多肽，但是残余的氨基酸序列与天本文档来自技高网...

【技术保护点】
特异性地结合新型隐球菌的英膜多糖葡萄糖醛酸木甘露聚糖（ＧＸＭ）的单克隆抗体或其抗原结合部分，其中所述的抗体或部分包含：（ａ）重链氨基酸序列，其包含人ＶＨ３－６４基因或人ＶＨ－６－１基因的ＣＤＲ１、ＣＤＲ２和ＣＤＲ３氨基酸序列，有或没 有信号序列；（ｂ）轻链氨基酸序列，其包含人ＶκＡ２７基因的ＣＤＲ１、ＣＤＲ２和ＣＤＲ３氨基酸序列，有或没有信号序列；或（ｃ）（ａ）和（ｂ）二者，其中所述的氨基酸序列可以包含从种系基因序列的至多６个突变。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：L皮洛夫斯基，RW麦塔，
申请(专利权)人：犹太大学阿尔伯特爱因斯坦医学院，
类型：发明
国别省市：US[美国]