ZOT和连蛋白受体的激动剂多肽制造技术

本发明专利技术鉴别一种受体蛋白的激动剂多肽。该激动剂可用于促进药物和抗原的吸收。适当的给药途径包括口服、鼻、经皮、以及静脉内。药物配方可以包含与该激动剂多肽结合的治疗剂或免疫原性制剂。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及诊断、治疗、药学、药物发现及免疫治疗领域。具体来说，它涉及操作和使用Zot/连蛋白/受体体系来改善健康。
技术介绍
肠紧密连接机能障碍(intestinal tight junction dysfunction)发生在包括食物过敏、肠胃传染、自身免疫性疾病和炎症性肠病的多种临床状态中(42)。健康、成熟的肠黏膜及其完整的紧密连接充当着大分子通过的主要屏障。在健康状态期间，少量的免疫活性抗原穿过肠宿主屏障。这些抗原通过至少两种途径穿过黏膜得以吸收。大多数吸收的蛋白(多达90％)经由跨细胞途径穿过肠屏障，随后进行将蛋白转化成更小的非免疫原性肽的溶酶体降解。这些残余的肽作为完整的蛋白通过细胞旁(paracellular)途径被转运；它涉及对细胞间紧密连接的微妙但是复杂的调节，其导致了抗原耐受性。当紧密连接体系的完整性被损害时，如由于早熟或者在暴露于辐射、化学治疗和/或毒素后，可能引发有害的对环境抗原的免疫反应(包括自身免疫性疾病和食物过敏)。本领域一直需要诊断和治疗这样的疾病和状况。本领域一直需要鉴别治疗这种疾病的新药。几种微生物对上皮细胞施加了不可逆的致细胞病变效应，其影响了细胞骨架组构和紧密连接功能。这些细菌或者直接改变肠的通透性(即EPEC)，或者通过毒素的精制来改变肠的通透性(例如Clostridiumdifficile，Bacteroides fragilis)(43)。霍乱弧菌噬菌体CXTΦ ZOT蛋白模拟人类蛋白连蛋白，并利用紧密连接调节的生理学机制。Zot具有多个结构域，其使得蛋白具有作为霍乱弧菌噬菌体CTXΦ的形态发生噬菌体肽和作为调节肠紧密连接的肠毒素的双重功能。Zot作用由细胞内活动的串联介导，该细胞内活动的串联导致关键处定位以调节细胞旁途径的肌动蛋白微丝发生依赖PKCα的聚合(38)。毒素通过与肠细胞表面的相互作用施加它的影响。Zot结合在肠内变化，其在空肠和回肠末端是可检测的，并沿着绒毛状隐窝轴降低，而在结肠中是检测不到的(44)。这一结合分布符合Zot对肠通透性的区域性效应(44)，并符合成熟绒毛细胞中的Zot诱发的优先F-肌动蛋白的重分配(38)。
技术实现思路
本专利技术第一个实施方式是连蛋白和霍乱弧菌噬菌体CTXΦ ZOT蛋白的人类受体的激动剂多肽。该激动剂多肽包含氨基酸序列FCIGRL(SEQ ID NO4)。多肽的长度小于100个氨基酸残基。本专利技术的第二个实施方式是治疗疾病的药物组合物。该组合物包含治疗疾病的治疗剂、以及连蛋白和霍乱弧菌噬菌体CTXΦ ZOT蛋白的人类受体的激动剂多肽。激动剂多肽包含氨基酸序列FCIGRL(SEQID NO4)。多肽的长度小于100个氨基酸残基。本专利技术的第三个实施方式是向靶组织输送治疗剂的方法。将治疗疾病的治疗剂、和连蛋白和霍乱弧菌噬菌体CTXΦ ZOT蛋白的人类受体的激动剂多肽施用给患有疾病的患者。激动剂多肽包含氨基酸序列FCIGRL(SEQ ID NO4)。多肽的长度小于100个氨基酸残基。本专利技术的第四个实施方式是向靶组织输送治疗剂的方法。将治疗疾病的治疗剂、和连蛋白和霍乱弧菌噬菌体CTXΦ ZOT蛋白的人类受体的激动剂多肽通过患病患者的鼻腔给药。激动剂多肽包含氨基酸序列FCIGRL(SEQ ID NO4)。多肽的长度小于100个氨基酸残基。本专利技术的第五个实施方式是向靶组织输送治疗剂的方法。将治疗疾病的治疗剂、和连蛋白和霍乱弧菌噬菌体CTXΦ ZOT蛋白的人类受体的激动剂多肽通过患病患者的口腔给药。激动剂多肽包含氨基酸序列FCIGRL(SEQ ID NO4)。多肽的长度小于100个氨基酸残基。本专利技术的第六个实施方式是向靶组织输送治疗剂的方法。将治疗疾病的治疗剂、和连蛋白和霍乱弧菌噬菌体CTXΦ ZOT蛋白的人类受体的激动剂多肽通过患病患者的皮肤给药。激动剂多肽包含氨基酸序列FCIGRL(SEQ ID NO4)。多肽的长度小于100个氨基酸残基。本专利技术的第七个实施方式是向靶组织输送治疗剂的方法。将治疗疾病的治疗剂、和连蛋白和霍乱弧菌噬菌体CTXΦ ZOT蛋白的人类受体的激动剂多肽通过患病患者的血液给药。激动剂多肽包含氨基酸序列FCIGRL(SEQ ID NO4)。多肽的长度小于100个氨基酸残基。本专利技术的第八个实施方式是鉴别或提纯连蛋白和霍乱弧菌噬菌体CTXΦ Zot的人类受体的方法。在适于抗体抗原结合的条件下，使包含一种或多种蛋白的样本与抗体接触。培养针对如SEQ ID NO5中所示的氨基酸SLIGKVDGTSHVTG的抗体。除去样本中未与抗体结合的蛋白。将结合在抗体上的蛋白鉴别为连蛋白和Zot的人类受体，或者鉴别为形成富含所述受体的制剂。本专利技术的第九个实施方式是筛选治疗疾病的药物候选物的方法。使抗体SAM11所识别的第一种人类蛋白与选自霍乱弧菌噬菌体CTXΦZot、人类连蛋白和MyD88的第二种蛋白相接触。在存在和不存在测试物质的情况下分别进行接触。将第一种蛋白在测试物质的存在下结合到第二种蛋白上的量，与不存在测试物质的情况下的结合量进行比较。如果测试物质降低了第一种蛋白在第二种蛋白上结合的量，则将该测试物质鉴别为药物候选物。本专利技术的第十个实施方式是诱发免疫反应的疫苗组合物。该疫苗包含诱发免疫反应的免疫原性制剂、和连蛋白和霍乱弧菌噬菌体CTXΦ ZOT蛋白的人类受体的激动剂。激动剂多肽包含氨基酸序列FCIGRL(SEQ ID NO4)。多肽的长度小于100个氨基酸残基。本专利技术的第十一个实施方式是诊断患者体内自身免疫性疾病的方法。使来自患者的第一份人体样本与针对如SEQ ID NO5中所示的氨基酸SLIGKVDGTSHVTG培养的抗体相接触。将第一份人体样本所结合的抗体的量，与不患有自身免疫性疾病的健康对照的第二份人体样本所结合的量进行比较。如果第一份人体样本比第二份样本结合更多的抗体，则鉴别出患者的自身免疫性疾病。本专利技术的第十二的实施方式是用相对于对照的健康个体增加的连蛋白表达来治疗患者的方法。用针对如SEQ ID NO5中所示的氨基酸SLIGKVDGTSHVTG培养的抗体为患者给药。由此减轻疾病的症状。本专利技术的第十三个实施方式是针对如SEQ ID NO5中所示的氨基酸SLIGKVDGTSHVTG培养的抗体。该抗体与CaCo2细胞中表达的蛋白结合，该蛋白与合成抑制剂肽FZ1/0(如SEQ ID NO3中所示)所结合的蛋白共同定位。该抗体不与表达重组人类PAR-2的人类或大鼠细胞结合。该抗体不是SAM11。本专利技术的第十四个实施方式是与CaCo2细胞中表达的蛋白结合的抗体，该蛋白与合成抑制剂肽FZ1/0(如SEQ ID NO3中所示)所结合的蛋白共同定位。该抗体不与表达重组人类PAR-2的人类或大鼠细胞结合。该抗体不是SAM11。本专利技术的第十五个实施方式是连蛋白和霍乱弧菌噬菌体CTXΦZOT蛋白的人类受体的激动剂多肽。该促效剂多肽含有选自Xaa1CysIle Gly Arg Leu(SEQ ID NO7)、Phe Xaa2Ile Gly Arg Leu(SEQ ID NO8)、Phe Cys Xaa3Gly Arg Leu(SEQ ID NO9)、Phe Cys Ile Xaa4Arg Leu(SEQ ID NO10本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种连蛋白和霍乱弧菌噬菌体ＣＴＸΦ　　ＺＯＴ蛋白的人类受体的激动剂多肽，所述的激动剂多肽包含ＦＣＩＧＲＬ（ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：４），其中所述多肽的长度小于１００个氨基酸残基。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：A法萨诺，SN沃格尔，
申请(专利权)人：马里兰州巴尔的摩大学，
类型：发明
国别省市：US[美国]