本发明专利技术涉及抗原‑抗体蛋白质的技术领域，特别涉及用于检测糖尿病的截短的酪氨酸磷酸酶(IA‑2)技术领域。目的之一是筛选出与酪氨酸磷酸酶抗体特异结合的截短的抗原蛋白质。目的之二是开发能满足化学发光封闭系统的抗原蛋白，并应用于化学发光封闭系统。本发明专利技术提供了一种与酪氨酸磷酸酶抗体特异结合的抗原蛋白质，所述抗原蛋白质选自在如第600‑979、604‑979、604‑969、600‑969或709‑969位的截短蛋白质中的一种。本发明专利技术还提供了一种如上所述的截短蛋白质或IA‑2全长蛋白质，且所述蛋白质为纳米磁珠包被的蛋白质。另外，本发明专利技术又提供了一种包括如上所述蛋白质的试剂盒。
An antigen protein that binds specifically to tyrosine phosphatase antibodies
The invention relates to the technical field antigen antibody protein, especially for tyrosine phosphatase truncation test of diabetes (IA 2) technology. One of the aims is to screen a truncated antigen protein that specifically binds to tyrosine phosphatase antibodies. The two objective is to develop antigen protein which can meet the requirements of chemiluminescence system and be applied to chemiluminescence system. The present invention provides a combination with antigen protein tyrosine phosphatase antibody, the antigen protein from a 600th 979, 604, 969, 604 and 979 600 969 or 709 truncated protein of the 969. The invention also provides a method for the truncated protein or IA 2 full-length protein, and the protein is nano magnetic beads coated with protein. In addition, the present invention provides a kit comprising the proteins described above.
【技术实现步骤摘要】
一种与酪氨酸磷酸酶抗体特异结合的抗原蛋白质
本专利技术涉及抗原-抗体蛋白质的
，特别涉及用于检测糖尿病的截短的酪氨酸磷酸酶(IA-2)的
技术介绍
糖尿病是一种因胰岛素分泌绝对或相对不足而引起的高血糖症为主要特征的代谢性疾病，受多种遗传和环境因素影响。按照1997年美国糖尿病协会及1999年世界卫生组织(WHO)关于糖尿病分类及诊断标准，糖尿病可分为I型、II型、特殊类型糖尿病和妊娠糖尿病。在1型糖尿病的免疫破坏期间，患者体内会产生多种针对胰岛细胞自身抗原的自身抗体。自20世纪70年代以来，已经发现了多种胰岛素自身抗体，例如：胰岛细胞抗体(ICA)、胰岛细胞表面抗体(ICSA)、胰岛素抗体(IAA)、热休克蛋白抗体(HSP)、谷氨酸脱羧酶65(GAD65，哺乳动物中GAD的存在形式之一)抗体、蛋白质酪氨酸磷酸酶抗体(IA-2A)等。目前临床上在诊断1型糖尿病常用的指标包括ICA、IAA、GADA、IA-2A。目前临床上体外诊断1型糖尿病指标所用的平台都基于放免或酶联免疫技术(ELASA)，自身免疫性1型糖尿病诊断试剂在敏感性和特异性方面有待于进一步改进。传统的放射免疫或者ELISA方法检测时间长，至少6个小时，甚至过夜反应才能完成测试，主要依靠纯手工加样等系列操作，效率低，特异性不足。化学发光系统有高灵敏度、高特异性的优势，检测结果时间快、效率高，全程全自动仪器自动操作，1个小时即可完成测试，对现在医院的及时诊断治疗起非常大的作用。随着敏感性和特异性更高的化学发光技术在体外诊断中的应用，开发能适用于化学发光封闭系统的抗原变得尤其重要。专利技术内容本专利技术的目的之一是筛选出与酪氨酸磷酸酶(IA-2)抗体特异结合的截短的抗原蛋白质。目的之二是开发能满足应用于化学发光封闭系统的抗原蛋白，并应用于化学发光封闭系统。截短的抗原蛋白质的表达与全长蛋白质的表达相比，截短后的蛋白更容易表达，表达量更高；在用于检测糖尿病时，其与全长蛋白质相比，截短后的蛋白灵敏度更好；非特异性更低。本专利技术提供了一种与糖尿病特定抗体特异结合的抗原蛋白质，所述抗原蛋白质选自如SEQIDNO:17中的第600-979、604-979、604-969、600-969和709-969位的截短蛋白质中的一种。在一个具体的实施例中，所述抗原蛋白质选自如SEQIDNO:17中的第604-969、600-969和709-969位的截短蛋白质中的一种。在一个具体的实施例中，所述抗原蛋白质选自如SEQIDNO:17中的第709-969位的截短蛋白质。在一个具体的实施例中，所述抗原蛋白质为真核表达系统获得的蛋白质。在一个具体的实施例中，所述抗原蛋白质为昆虫细胞表达系统获得的蛋白质。昆虫细胞表达系统是应用较多的真核表达系统，它可以在昆虫细胞中表达多种外源基因，包括真菌，植物，细菌，病毒的基因。杆状病毒是一类以昆虫细胞为天然宿主的双链DNA病毒，具有高度的种属特异性，不感染脊椎动物，对人、畜无害。目前研究较多的是苜蓿银纹夜蛾核多角体(AcNPV)，其宿主是草地贪夜蛾。而SF9细胞，正是杆状病毒表达系统的宿主细胞之一。SF9细胞属于半贴壁型细胞系，可以进行悬浮培养，也可以进行贴壁培养，在应用于蛋白的表达与制备纯化中，有许多的优点：1)与其他真核表达系统相比，外源基因表达水平高，特别是细胞内蛋白。多数情况下，表达的重组蛋白可溶，折叠正确有翻译后修饰(如糖基化等)，有生物学活性，容易分离纯化；2)利用昆虫细胞悬浮生长，容易放大培养，有利于大规模表达重组蛋白；3)易于表达异源多聚体蛋白，可通过多种重组病毒同时感染昆虫细胞或用含有多个表达框的一种病毒感染昆虫细胞来实现；4)昆虫杆状病毒不感染脊椎动物，具有安全性。本专利技术还提供了一种抗原蛋白质，所述抗原蛋白质为上述截短型的蛋白质或IA-2的全长蛋白质，且所述蛋白质为纳米磁珠包被的蛋白质。本专利技术又提供了一种用于检测糖尿病的试剂盒，所述试剂盒包括一种抗原蛋白质，所述抗原蛋白质选自如SEQIDNO:17中的第600-979、604-979、604-969、600-969和709-969位的截短蛋白质中的一种。在一种具体的实施例中，所述试剂盒中的所述抗原蛋白质选自如SEQIDNO:17中的第604-969、600-969和709-969位的截短蛋白质中的一种。在一个具体的实施例中，所述抗原蛋白质选自如SEQIDNO:17中的第709-969位的截短蛋白质。需要指出的是，在检测抗体的过程中，所选用的抗原蛋白质并非全长蛋白质是最优的，因为虽然全长蛋白质包含了更多的抗原决定簇，这样能够更容易的识别其相应的抗体，但是由于全长蛋白质包含较多的抗原决定簇，也会带来非特异性增高的结果；此外，蛋白质的片段长度越长，其表达难度以及后续的纯化等一系列的操作的难度也会相应的越高。因此，优选的抗原蛋白质应该是首选满足灵敏性和特异性的前提下，蛋白质的片段越短则越有利于应用于实际。例如，在化学发光法的检测系统中，用于检测糖尿病的IA-2抗体的最优的蛋白质为如SEQIDNO:17中的第709-969位的截短蛋白质。在一个具体的实施例中，所述试剂盒中的所述抗原蛋白质为在真核表达系统中表达而获得的蛋白质。在一个具体的实施例中，所述试剂盒中的所述抗原蛋白质为在昆虫细胞表达系统中表达而获得的蛋白质。在一个具体的实施例中，所述试剂盒中的所述抗原蛋白质为纳米磁珠包被的蛋白质。在一个具体的实施例中，所述试剂盒中还包括化学发光标记的蛋白A。利用化学发光法可以提高产品的灵敏度和特异性。其中，蛋白A是一种金黄色葡萄球菌细胞壁蛋白质，能特异性地与人和哺乳动物抗体(主要是IgG)的Fc区结合。在一个具体的实施例中，所述试剂盒中还包括所述试剂盒中还包括BSA缓冲液。所述BSA缓冲液为高浓度的缓冲液，其浓度可为3％～7％。本专利技术还提供了一种与糖尿病特定抗体特异结合的抗原蛋白质的基因序列，所述基因序列为通过表达获得如SEQIDNO:17中的第600-979、604-979、604-969、600-969和709-969位的所述的截短蛋白质的基因序列中的一种。在一个具体的实施例中，所述基因序列为通过表达获得如SEQIDNO:17中的第604-969、600-969和709-969位的所述的截短蛋白质的基因序列中的一种。在一个具体的实施例中，所述基因序列为通过表达获得如SEQIDNO:17中的第709-969位的所述的截短蛋白质的基因序列。在一个具体的实施例中，所述基因序列在真核表达系统中表达。在一个具体的实施例中，所述基因序列在昆虫细胞表达系统中表达。本专利技术利用真核表达系统表达筛选出适宜的IA-2截短蛋白质抗原，并将其运用于化学发光封闭系统，填补目前市场上的空白。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术做以下详细说明。实施例1hIA-2以及截短的hIA-2的基因的表达(1)主要试剂与设备PCR试剂盒(包含Taq酶，buffer，dNTP，T4连接酶)和DNAmarker购自全式金；蛋白Marker购自碧云天生物；BamHI、XhoI、EcoRI、NcoI、HindⅢ等限制性内切酶购自Takara(大连宝生物)；小牛肠碱性磷酸酶(CIAP)试剂盒(包含组分：小牛肠碱性磷酸酶、碱性本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种与酪氨酸磷酸酶抗体特异结合的抗原蛋白质，其特征在于，所述抗原蛋白质选自如SEQ ID NO:17中的第600‑979、604‑979、604‑969、600‑969和709‑969位的截短蛋白质中的一种。
【技术特征摘要】
1.一种与酪氨酸磷酸酶抗体特异结合的抗原蛋白质，其特征在于，所述抗原蛋白质选自如SEQIDNO:17中的第600-979、604-979、604-969、600-969和709-969位的截短蛋白质中的一种。2.根据权利要求1所述的抗原蛋白质，其特征在于，所述抗原蛋白质选自如SEQIDNO:17中的第604-969、600-969和709-969位的截短蛋白质中的一种。3.根据权利要求2所述的抗原蛋白质，其特征在于，所述抗原蛋白质选自如SEQIDNO:17中的第709-969位的截短蛋白质。4.根据权利要求1-3任意一项所述的抗原蛋白质，其特征在于，所述抗原蛋白质为在真核表达系统中表达而获得的蛋白质。5.根据权利要求4...
【专利技术属性】
技术研发人员：何海华，戚永跃，任印玲，吴森仁，袁锦云，李武，
申请(专利权)人：深圳市新产业生物医学工程股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。