一种血红蛋白凝胶层析的方法技术

技术编号:1539150 阅读:189 留言:0更新日期:2012-04-11 18:40
本发明专利技术公开了一种血红蛋白凝胶层析的方法,其步骤包括:1)凝胶的处理;2)装柱;3)平衡;4)血红蛋白样品的制备;5)层析柱还原层的形成;6)上样;7)洗脱;8)清洗;本发明专利技术的有益效果为:具有方便使血红蛋白分离纯化的优点。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种血红蛋白凝胶层析的方法,其步骤为:    a)凝胶的处理:取葡聚糖凝胶干粉,浸泡于蒸馏水中充分溶胀,然后倾斜法除去表面悬浮的小颗粒,最后加入等体积pH7磷酸缓冲液继续浸泡;    b)装柱:将层析柱下端的止水螺丝旋紧,向柱中加入缓冲液,把溶胀好的糊状凝胶边搅拌边到入柱中,同时开启止水螺丝,控制一定的流速,使柱中的凝胶一直处在溶液中;    c)平衡:用磷酸缓冲液洗脱,平衡20分钟;    d)血红蛋白样品的制备:取若干抗凝血于烧杯中,加入磷酸缓冲液,再加入固体铁氰化钾,使浓度达到5mg/ml;    e)层析柱还原层的形成:FeSO↓[4]于小烧杯中,加入Na↓[2]HPO↓[4],Na↓[2]H↓[2]EDTA混合液搅拌均匀;待层析柱上缓冲液几乎全部进入凝胶时,速取适量混合液加入层析柱中,待混合液完全进入柱床后加入适量缓冲液;    f)上样:将柱中多余的液体从底部流出后关闭止水螺丝,取前面制备好的血红蛋白样品适量,将样品溶液小心加到凝胶柱上,打开止水螺丝,使样品溶液流入柱内;    g)洗脱:用缓冲液进行洗脱,控制缓冲液在约每5秒一滴的流速,观察并记录实验现象;    h)清洗:待所有色带流出层析柱后,加快流速,继续清洗层析柱5min。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:贺馥珕
申请(专利权)人:上海市上海中学
类型:发明
国别省市:31[]

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