尿液FXYD检测试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种尿液FXYD检测试剂盒，其包括：偶联有抗FXYD抗体的磁性微粒；酶标记抗FXYD多克隆抗体；FXYD标准品；化学发光底物液。该试剂盒能够定量检测尿液中的纤维蛋白原降解产物组分FXYD，具有检测时间短、灵敏度高、稳定性好、变异小的特点，能够用于肠癌的早期诊断、治疗过程中的疗效评估、以及治疗后的转移复发监控。

Urine FXYD test kit

The invention discloses a urine FXYD detection kit, comprising a magnetic particle coupled with an anti FXYD antibody; an enzyme labeled anti FXYD polyclonal antibody; a FXYD standard; a chemiluminescent substrate solution. The kit can FgDP group of urine in quantitative FXYD, has the characteristics of short detection time, high sensitivity, good stability, small variation, can be used for early diagnosis and treatment of colorectal cancer in the process of assessing the efficacy, and after treatment of metastasis recurrence monitoring.

【技术实现步骤摘要】
尿液FXYD检测试剂盒
本专利技术属于生物检测领域，具体地说，涉及一种用于定量检测纤维蛋白原降解产物组分FXYD的试剂盒、尤其是用于检测尿液中纤维蛋白原降解产物组分FXYD的试剂盒。
技术介绍
结肠癌、直肠癌是常见的恶性肿瘤，进展期占大多数，其发病率已居恶性肿瘤的第4位。随着经济发展，人们的生活方式、生活环境及膳食结构逐渐发生改变，导致结直肠癌的发病率呈不断上升趋势。虽然近年来结、直肠癌的诊断水平有了提高，但早期结直肠癌的检出率仍然较低，死亡率较高。据统计显示，早期结肠癌根治后5年生存率约为80％，而进展期结肠癌术后5年生存率仅为50％。因此，早期诊断是提高结肠癌治愈率的关键因素，寻找敏感性、特异性高的肿瘤标志物成为临床科学研究的重点目标。血清肿瘤标志物CEA、CA19-9、CA242等是结肠癌诊断常用检测对象，其中以CEA为主，有40％～70％结肠癌患者中CEA增高。但这些标记物单独作为诊断指标尚不精确，敏感性较低，并且在其他消化道肿瘤及良性疾病中也有升高，因此对结肠癌早期诊断的价值有限。纤维蛋白(原)降解产物达10余种之多，我们的研究发现，仅纤维蛋白(原)F、中间体X和Y，D和D-dimer(D二聚体)等主要大分子(缩写FXYD)与癌症进展的关系更为紧密。目前在临床上使用的纤维蛋白(原)降解产物检测仅检测其中一个组分或几个组分，而且检测方法为乳胶比浊法或酶联免疫吸附法(ELISA)，这些方法检测的灵敏度还存在不够灵敏的问题。临床上使用的FXYD测定通常是针对从受试者身上采集的血清进行FXYD测定。由于血清中包含的蛋白质种类过于庞大，氨基酸序列和高级结构相近的蛋白有很多，在含量测定时这些相似蛋白彼此之间很容易产生干扰，这在一定程度上导致血清FXYD中的精确测定存在局限性。我们惊讶地发现，肠癌(包括结肠癌和直肠癌)患者的尿液中也存在FXYD、而健康人群的尿液中几乎检测不到FXYD或者FXYD含量很低。这一发现提示尿液中FXYD是一种肠癌标志物，其含量检测有可能成为肠癌诊断的辅助手段。尿液中FXYD反映着肿瘤的存在和生长，通过分析尿液中FXYD含量的变化，能够帮助鉴别肠癌的发生和发展的不同时期，有助于肿瘤的辅助诊断及病程监控。尿液具有无创、可以大量获得的优点，是理想的临床研究样本。尿液与血清相比，有很多独特的优势。从尿液中寻找疾病标记物或进行生理学研究能够极大地方便疾病的诊断，并减轻受测者的心理和生理负担。检测尿液中的肠癌标志物，具有简便、快捷、易复查等优点，容易被接受，对肠癌的临床诊断具有重要意义。
技术实现思路
为了实现尿液中FXYD的定量检测，增加肠癌辅助诊断的准确性，从而为肠癌的辅助诊断和疗效评估提供一种新的途径，本专利技术基于磁微粒化学发光法，设计了一种全新的FXYD检测试剂盒，使FXYD抗体与特定的磁性微粒偶联，采用化学发光法对尿液中FXYD的含量进行精确测量。本专利技术是通过以下技术方案实现的：一种用于定量检测纤维蛋白原降解产物组分FXYD的试剂盒，其包括：偶联有抗FXYD抗体的磁性微粒；酶标记抗FXYD多克隆抗体；FXYD标准品；化学发光底物液。在一种实施方式中，上述试剂盒中，所述抗FXYD抗体选自纤维蛋白原降解产物组分F单克隆抗体或多克隆抗体、纤维蛋白原降解产物组分X单克隆抗体或多克隆抗体、纤维蛋白原降解产物组分Y单克隆抗体或多克隆抗体、纤维蛋白原降解产物组分D单克隆抗体或多克隆抗体、纤维蛋白原降解产物组分D-dimer单克隆抗体或多克隆抗体、或它们的混合物。优选抗FXYD抗体是上述各单克隆抗体或多克隆抗体的混合物。更优选抗FXYD抗体是上述各多克隆抗体的混合物。优选地，当所述抗FXYD抗体是混合物时，两种以上单克隆抗体或者多克隆抗体之间的摩尔比为1：1。在一种实施方式中，上述试剂盒中，酶标记抗FXYD多克隆抗体中的抗FXYD多克隆抗体优选是纤维蛋白原降解产物组分F多克隆抗体、纤维蛋白原降解产物组分X多克隆抗体、纤维蛋白原降解产物组分Y多克隆抗体、纤维蛋白原降解产物组分D多克隆抗体和纤维蛋白原降解产物组分D-dimer多克隆抗体的混合物。优选地，各多克隆抗体之间的摩尔比为1：1。酶标记抗FXYD多克隆抗体中的抗FXYD多克隆抗体对纤维蛋白(原)降解产物中F、X、Y、D片段均有反应活性。在一种优选的实施方式中，上述试剂盒还包括FXYD质控品。在一种优选的实施方式中，上述试剂盒还包括稀释液和洗液。优选地，所述稀释液比如是含0.1wt％BSA的PBS缓冲液；所述洗液比如为25倍的PBST。本专利技术设计的洗液主要由缓冲体系和表面活性剂组成，其中缓冲体系可以选择PBS、Tris-HCl等；表面活性剂通常选自Tween-20、Tween-80、TritonX-100等，洗液有助于清除磁珠表面附着的游离标记物，降低读数本底，提高信噪比。比如，洗液由0.01M的pH7.4磷酸盐缓冲液和0.15％Tween20配制而成，使用时可以用25倍超纯水稀释。在一种实施方式中，上述试剂盒中的所述磁性微粒的粒径是0.1-10微米、优选0.2-5微米、优选0.2-3微米、更优选0.2-2微米、更优选0.3-1微米，以便在试剂盒使用时的检测体系形成接近均相的反应体系。在一种优选的实施方式中，磁性微粒是超顺磁亲水高分子磁微粒。优选所述磁性微粒是表面带有氨基或羧基活性基团、以四氧化三铁为内核的聚合物。所述活性基团可以是氨基、羧基、IDA(亚氨基二乙酸)、环氧基等，优选氨基或羧基。更优选磁性微粒的表面含有羧基活性基团。在一种优选的实施方式中，上述试剂盒中的偶联有抗FXYD抗体的磁性微粒呈磁珠悬液形式。本专利技术的试剂盒中的FXYD检测体系采用酶催化的底物化学发光法，从而通过进行光电信号检测而确定样品中的FXYD含量。在一种实施方式中，上述试剂盒中的酶优选是过氧化物酶、碱性磷酸酶、磷酸酯酶或荧光素酶，更优选辣根过氧化物酶(Horseradishperoxidase，简称HRP)或者碱性磷酸酶，更优选辣根过氧化物酶。作为辣根过氧化物酶的作用底物，可以选自下组：氨基苯二酰一肼(鲁米诺)、异氨基苯二酰一肼、氨基丁基乙基异氨基苯二酰一肼(ABEI)、氨基己基乙基异氨基苯二酰一肼(AHEI)、7-二甲基氨基萘-l,2-二羧酸酰肼、环取代的氨基邻苯二甲酰肼、蒽-2,3-二羧酸酰肼、菲-1,2-二羧酸酰肼、芘二羧酸酰肼、5-羟基-邻苯二甲酰肼、6-羟基邻苯二甲酰肼、2,3-二氮杂萘二酮类似物、9,10-二氢化吖啶类化合物比如9,10-二氢化吖啶酯、9,10-二氢化吖啶酯、9,10-二氢化吖啶硫酯、9,10-二氢化吖啶磺酰胺、9,10-二氢化吖啶二硫缩烯酮化合物。优选是鲁米诺。酶的作用底物可以单独作为试剂盒的组成部分，即，底物溶液。优选地，所述底物溶液含有鲁米诺(luminol)，比如由鲁米诺和Tris-HCl缓冲液组成。通常称作化学发光底物A。相对应地，上述试剂盒进一步包含引发剂溶液，该引发剂溶液包含过氧化氢，比如是双氧水溶液。通常称作化学发光底物B。在一种实施方式中，上述试剂盒除了用于测定尿液中的纤维蛋白原降解产物组分FXYD外，还可以用于测定其他生物样品中的FXYD含量，所述其他生物样品来源于受测对象、尤其是有肠癌嫌疑的患者，比如是全血、血浆、本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于定量检测纤维蛋白原降解产物组分FXYD的试剂盒，其包括：偶联有抗FXYD抗体的磁性微粒；酶标记抗FXYD多克隆抗体；FXYD标准品；化学发光底物液。

【技术特征摘要】
1.一种用于定量检测纤维蛋白原降解产物组分FXYD的试剂盒，其包括：偶联有抗FXYD抗体的磁性微粒；酶标记抗FXYD多克隆抗体；FXYD标准品；化学发光底物液。2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述抗FXYD抗体选自纤维蛋白原降解产物组分F单克隆抗体或多克隆抗体、纤维蛋白原降解产物组分X单克隆抗体或多克隆抗体、纤维蛋白原降解产物组分Y单克隆抗体或多克隆抗体、纤维蛋白原降解产物组分D单克隆抗体或多克隆抗体、纤维蛋白原降解产物组分D-dimer单克隆抗体或多克隆抗体、或它们的混合物。3.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，当抗FXYD抗体是混合物时，两种以上单克隆抗体或者或多克隆抗体之间的摩尔比为1：1。4.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述酶标记抗FXYD多克隆抗体中的抗FXYD多克隆...

【专利技术属性】
技术研发人员：高梅娟，何林富，王义，孙玉龙，
申请(专利权)人：上海良润生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31