The invention discloses a method to establish the model from the body of oxygen glucose deprivation, which comprises the following steps: S1: the first set of male and female mice were paired in male and female mice mated, the male and female mice were isolated; S2: in 13 pregnant female mice on day 15, female mice with poly-L-lysine coating culture plate were used for the night; S3: on poly-L-lysine coated culture plates on the 11 13h after removal of poly lysine, and female mice in application of laminin coated culture plate; S4: female mice culture plate in application of laminin coated 2 4h after removing layer laminin, on culture plates by flushing with sterile distilled water. The invention can accurately, rapidly and effectively simulate the pathological conditions of cell stress, autophagy, brain ischemia, anoxia, shock, etc., and the primary cerebral cortical neuron cells of mice are easy to achieve the goal of oxygen exhaustion.
【技术实现步骤摘要】
离体氧糖剥夺模型的建立方法
本专利技术涉及医学研究开发
,尤其涉及一种离体氧糖剥夺模型的建立方法。
技术介绍
自噬是细胞受到刺激后,通过溶酶体途径降解细胞内物质的基本稳态过程。自噬允许细胞成分的有序退化和回收利用。自噬过程是指从粗面内质网的无核糖体附着区脱落的双层膜或高尔基体膜包裹部分胞质和细胞内需降解的细胞器、蛋白质等成分形成自噬体,并与溶酶体融合形成自噬溶酶体,降解其所包裹的内容物,以实现细胞本身的代谢需要和某些细胞器更新的过程。自噬通常有三种不同形式:巨自噬,微自噬和分子伴侣介导的自噬。自噬可以通过能量缺乏,如葡萄糖耗尽,和其他多样刺激如缺氧,活性氧,和变性或聚集蛋白来诱导。脑约占全身重量的约2%,但消耗在体内产生的能量的15%。脑没有备用能量源如磷酸肌酸,并且除了在星形胶质细胞的少量糖原外没有能量存储。因此脑细胞对能量消耗更为敏感。自噬失调可能会导致错误的动态平衡和神经退行性病变。因此,建立一个离体神经细胞氧糖剥夺模型对于研究开发治疗神经退行性疾病如老年性痴呆有重要意义。现有离体神经细胞氧糖剥夺模型的建立方法无法精确、快速、有效地模拟细胞应激、细胞自噬及脑缺血缺氧休克等病理状态,且离体神经细胞氧糖剥夺模型的建立方法中的离体细胞达到氧耗竭目标的难度大。
技术实现思路
基于
技术介绍
存在的技术问题,本专利技术提出了离体氧糖剥夺模型的建立方法。本专利技术提出的离体氧糖剥夺模型的建立方法,包括以下步骤:S1:首先设置雌雄小鼠进行配对,在雌雄小鼠交配成功后,再将雌雄小鼠进行分离;S2:在雌性小鼠怀孕13-15天时,雌性小鼠在用多聚赖氨酸涂层培养板上进行过夜; ...
【技术保护点】
离体氧糖剥夺模型的建立方法,其特征在于,包括以下步骤:S1:首先设置雌雄小鼠进行配对,在雌雄小鼠交配成功后,再将雌雄小鼠进行分离;S2:在雌性小鼠怀孕13‑15天时,雌性小鼠在用多聚赖氨酸涂层培养板上进行过夜;S3:在用多聚赖氨酸涂层培养板上11‑13h后,移除多聚赖氨酸,然后雌性小鼠在应用层粘连蛋白涂层培养板上;S4:雌性小鼠在应用层粘连蛋白涂层培养板2‑4h后,移除层粘连蛋白后,用消毒蒸馏水对培养板进行冲洗;S5:雌性小鼠在怀孕15‑17天时,从雌性小鼠中剖析出胚胎子宫,并将剖析出胚胎子宫置入盛有冰冻的L‑15液体的培养板中;S6:通过超镜台可以从胚胎子宫中取出胚胎,再通过超镜台从胚胎中移出脑,此时可以收集大脑皮层,并将收集的大脑皮层置入盛有冰冻的L‑15液体的培养板中;S7:使用刀片对冰冻的L‑15液体中的大脑皮层进行切段,将切段后的大脑皮层置入15ml的离心管中;S8:离心管中的切段大脑皮层在1400RPM‑1600RPM的条件下进行第一次离心,且离心2‑4m;S9:在第一次离心后的离心管中滴入用2‑4ml的分离溶液,使得离心管中的溶液进行悬浮沉淀,再将离心管的溶液置入37度孵 ...
【技术特征摘要】
1.离体氧糖剥夺模型的建立方法,其特征在于,包括以下步骤:S1:首先设置雌雄小鼠进行配对,在雌雄小鼠交配成功后,再将雌雄小鼠进行分离;S2:在雌性小鼠怀孕13-15天时,雌性小鼠在用多聚赖氨酸涂层培养板上进行过夜;S3:在用多聚赖氨酸涂层培养板上11-13h后,移除多聚赖氨酸,然后雌性小鼠在应用层粘连蛋白涂层培养板上;S4:雌性小鼠在应用层粘连蛋白涂层培养板2-4h后,移除层粘连蛋白后,用消毒蒸馏水对培养板进行冲洗;S5:雌性小鼠在怀孕15-17天时,从雌性小鼠中剖析出胚胎子宫,并将剖析出胚胎子宫置入盛有冰冻的L-15液体的培养板中;S6:通过超镜台可以从胚胎子宫中取出胚胎,再通过超镜台从胚胎中移出脑,此时可以收集大脑皮层,并将收集的大脑皮层置入盛有冰冻的L-15液体的培养板中;S7:使用刀片对冰冻的L-15液体中的大脑皮层进行切段,将切段后的大脑皮层置入15ml的离心管中;S8:离心管中的切段大脑皮层在1400RPM-1600RPM的条件下进行第一次离心,且离心2-4m;S9:在第一次离心后的离心管中滴入用2-4ml的分离溶液,使得离心管中的溶液进行悬浮沉淀,再将离心管的溶液置入37度孵箱混匀4-5m,经蛋白酶消化后加入2-4ml的抑制剂溶液终止反应;S10:离心管中的溶液在1400RPM-1600RPM的条件下进行第二次离心,且离心2-4m;S11:在第二次离心后的离心管中滴入用2-4ml的分离溶液,使得离心管中的溶液进行悬浮沉淀,混匀细胞...
【专利技术属性】
技术研发人员:陈纪君,陈清启,王爱芹,
申请(专利权)人:青岛华升生物科技有限公司,
类型:发明
国别省市:山东,37
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。