重组人血管内皮抑制素在制药中的应用制造技术

本发明专利技术涉及重组人血管内皮抑制素在制药中的应用，具体公开了重组人血管内皮抑制素在制备治疗血管生成性眼底病的药物中的应用。通过重组人血管内皮抑制素进行玻璃体注射来治疗血管生成性眼底病，可以有效地抑制眼底病变部位的新生血管增殖，从而治疗血管生成性眼底病，改善症状。该方法特异性强、高效、无明显毒副作用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物制品
，具体涉及重组人血管内皮抑制素的制药用途，该药物可用于血管生成性眼底病的治疗。
技术介绍
眼底病是一种复杂的致盲率很高的眼部疾病，目前大部分的流行病学调查结果显示，国内眼底病导致低视力和致盲的比例呈上升趋势。眼球是一个球形的物体，其后部的玻璃体、视网膜、脉络膜等部分即为眼底，眼底有血管、视神经、黄斑部，这些部位的病变就称为眼底病。包括老年黄斑变性、糖尿病性视网膜病变、视网膜脉络膜炎、增殖性玻璃体视网膜病变、视网膜脱离、视网膜母细胞瘤、缺血性视乳头病变等。其中有一些是与血管生成相关的，如增龄性黄斑变性、中心性渗出性视网膜脉络膜炎、增殖性玻璃体视网膜病变以及视网膜母细胞瘤等，即血管生成性眼底病。 增龄性黄斑变性(age-related macular degeneration，AMD)即老年性黄斑变性又称为年龄相关性黄斑变性，是一种无痛性慢性视力下降的眼底病，近些年逐渐成为导致高龄者视力下降甚至失明的主要原因，因而备受关注，但其病因目前还不明确。AMD主要分为萎缩型和渗出型，其中萎缩型主要是指视网膜色素上皮细胞、脉络膜毛细血管板的萎缩，与脉络膜血管新生无关，而渗出型则主要是由于在高龄者的黄斑部，从脉络膜向视网膜色素上皮细胞或者是在视网膜下伸展新生血管而导致出血或渗出型病变。 中心性渗出性脉络膜视网膜病变又称Rieger中心性视网膜炎、青年性出血性黄斑病变。临床上一般为单眼发病，年龄多在50岁以下。主要发生于黄斑部及其周围的弧立的渗出性脉络膜视网膜病灶，伴有视网膜下新生血管及出血。 增殖性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy，PVR)是指在孔源性视网膜脱离或视网膜复位手术后，以及眼外伤后，由于玻璃体内及视网膜表面的细胞增生和收缩，造成牵引性视网膜脱离的病变。PVR的治疗主要是手术治疗，但尽管采用了许多手术方法促使增殖性玻璃体视网膜病变的视网膜复位，可仍有1/3的病例手术失败，其原因是虽然玻璃体手术能切除已形成的增殖膜，但不能完全去除增殖细胞，甚至还刺激其产生分化、增殖，因此，药物防治PVR是非常必要的。 视网膜母细胞瘤(retinoblastoma，RB)是一种起源于视网膜核层原始干细胞的胚胎性恶性肿瘤，表现为视网膜细胞不受控制地生长，具有遗传性，占眼肿瘤的首位。此病多在三岁以前发病，偶见于成人，无性别差异，双眼同时或先后发病者约占1/4。 人血管内皮抑制素(endostatin)是胶原XVIII羧基端的一段分子量大小为20kDa的酶切产物，具有抑制血管内皮细胞增殖、迁移及体内血管生成的活性，是目前已知最强的内源性血管形成抑制因子。 重组人血管内皮抑制素是利用DNA重组工程技术，以原核或真核表达载体，将人血管内皮抑制素基因经克隆、表达和纯化得到的有血管生成抑制活性形式的蛋白质。 中国专利技术专利(专利公开号为CN1324818A，公开日为2001年12月5日，专利技术名称为“生产内皮抑制素的方法”)提供了一种改良的，以更高的产率和更简单的纯化工艺生产重组人内皮抑制素的方法。该专利技术利用DNA重组工程技术，以大肠杆菌表达系统，以简单的方法和较低的成本大批量生产N末端带有(Met)GlyGlyXaaHisHisHisHisHis附加氨基酸序列的人血管内皮抑制素(其中Xaa代表中性氨基酸或不存在)，不仅保留了endostatin的完全的生物学活性，而且没有产生因加入附加N端序列所致的体内免疫性。上述附加氨基酸序列不仅提高了内皮抑制素结构基因的转录和翻译起始效率，有利于重组蛋白的纯化，而且附加氨基酸序列的结构也增加了重组蛋白的稳定性。 目前用于预防和治疗血管生成性眼底病的方法主要包括药物、激光疗法、同位素治疗、手术等，但这些方法均有各自的缺点，如容易伤及临近组织、疗效不稳定、风险较大等，因此找到特异性好、疗效显著、副作用小的治疗方法是目前国内外研究者关注的焦点。
技术实现思路
血管生成性眼底病虽然致病原因不同，但均出现眼底病变部位新生的毛细血管的增殖，新生血管生成成为病情发生和发展的重要因素。从这个机制上考虑，如果能用某些治疗手段特异性地抑制眼底病灶新生血管的增殖，则可能为血管生成性眼底病的治疗带来新的突破。 为了克服血管生成性眼底病的传统疗法不稳定、风险较大的缺陷，本专利技术提供了重组人血管内皮抑制素的一种制药用途，具体是使用重组人血管内皮抑制素制备治疗血管生成性眼底病的药物的制药用途，该药物具有特异性强、无毒、无耐药性的优点。 本专利技术的技术解决方案涉及重组人血管内皮抑制素在制备治疗血管生成性眼底病的药物中的应用。 本文中所述重组人血管内皮抑制素保留了endostatin的完全的生物学活性，可运用基因工程手段获得，通过将人的血管内皮抑制素基因或将改构的人血管内皮抑制素基因构建到大肠杆菌(E.Coli)或毕赤酵母(Pichia pastoris)表达系统中，经过发酵、分离、纯化等手段得到。 本专利技术中优选的重组人血管内皮抑制素是在人血管内皮抑制素编码氨基酸序列的起始氨基酸Me t后依次添加0-4个任意氨基酸和2-8个组氨酸序列。其制备方法同中国专利技术专利(专利公开号为CN1324818A，公开日为2001年12月5日，专利技术名称为“生产内皮抑制素的方法”)。 上述重组人血管内皮抑制素的起始氨基酸Met可能被切除，原因是在表达宿主中蛋白翻译后的加工过程中可能被删除。 本专利技术优选的重组人血管内皮抑制素的氨基酸序列如SEQID NO1所示，该序列和中国专利技术专利(专利公开号为CN1324818A)公开的SEQ IDNO2相同，该序列构成的蛋白质的制备方法和上述公开专利的制备实施例相同。 上述治疗血管生成性眼底病的药物的制剂可以是注射液或冻干制剂。所述述药物的活性组分可以是重组人血管内皮抑制素、PEG修饰的重组人血管内皮抑制素或重组人血管内皮抑制素微球。所述PEG的分子量是5000-30000，PEG通过共价键(如琥珀酰亚氨基或巯基等)与重组人血管内皮抑制素相连。所述重组人血管内皮抑制素微球是通过基质材料与重组人血管内皮抑制素混合制备而成，其基质材料可以是聚乳酸羟基乙酸嵌段共聚物(PLGA)，聚乙醇酸(PLA)等。 上述治疗血管生成性眼底病的药物中还含有保护剂和PH值调节剂。所述保护剂选自多元醇、糖类、氨基酸、表面活性剂，人血白蛋白、EDTA和NaCl。所述药物的PH值范围是4.0-8.5。 上述所述血管生成性眼底病包括增龄性黄斑变性、中心性渗出性视网膜脉络膜炎、增殖性玻璃体视网膜病变以及视网膜母细胞瘤中的至少一种，与血管生成相关的其它眼底病也属于本专利技术的适应症。 本专利技术中所述治疗血管生成性眼底病的药物可与传统的治疗方法联合应用，如与手术或常规治疗药物联合应用。 本专利技术还公开了一种治疗血管生成性眼底病的重组人血管内皮抑制素注射液的配方，是由重组人血管内皮抑制素和药用辅料配制而成，其中按每毫升注射液计含有重组人血管内皮抑制素0.2mg～10mg，甘露醇60mg～80mg，PH调节剂调节pH值为4.0～8.5。 本专利技术的实施例中还公开了重组人血管内皮抑制素冻干制剂的制备工艺，该工艺制得的冻干制剂产品稳定性好，能够长期保存。冻干制剂使用时需要溶于注射用本文档来自技高网...

【技术保护点】
重组人血管内皮抑制素在制备治疗血管生成性眼底病的药物中的应用。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：刘武，罗兴洪，姜静，宋迪，
申请(专利权)人：山东先声麦得津生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：37[中国|山东]