本发明专利技术涉及一种氨基酸合成方法，特别涉及一种甘氨酰组氨酰赖氨酸的固相合成方法。主要解决其分子中含有２个碱性氨基酸导致人工合成困难的技术问题。合成时将Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（ＢＯＣ）－ＯＨ与Ｗａｎｇ Ｒｅｓｉｎ按比例混合，加入ＨＯＢＴ、ＤＩＣ和ＤＭＡＰ作为活化剂，以ＤＭＦ作溶剂在４５℃～５０℃下振荡反应，反应产物过滤洗涤后得到Ｆｍｏｃ－ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－Ｗａｎｇ Ｒｅｓｉｎ；加入六氢吡啶的ＤＭＦ溶液中，将Ｆｍｏｃ基团去掉，得到Ｈ－ｌｙｓ（Ｂｏｃ）Ｗａｎｇ Ｒｅｓｉｎ；然后加入Ｆｍｏｃ－Ｈｉｓ（ｔｒｔ）－ＯＨ，经过酰氨化反应得到Ｆｍｏｃ－Ｈｉｓ（ｔｒｔ）－ｌｙｓ（Ｂｏｃ）Ｗａｎｇ Ｒｅｓｉｎ；将Ｆｍｏｃ去掉，加入甘氨酸，由酰氨化反应得到Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－Ｈｉｓ（ｔｒｔ）－ｌｙｓ（Ｂｏｃ）Ｗａｎｇ Ｒｅｓｉｎ；去掉Ｆｍｏｃ，加ＴＦＡ，振荡后过滤，取滤液洗涤冻干可得最终产物。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种氨基酸合成方法，特别涉及一种甘氨酰组氨酰赖氨酸的 固相合成方法。
技术介绍
甘氨酰组氨酰赖氨酸(G服)是1973年由Pickart等人首先从人血浆中分 离得到的一种三肽.GHK能增加老鼠的正常肝细胞的存活率及促使肝癌细胞的生长， 并刺激这些细胞DNA和RNA的合成，因此被称为肝细胞生长因子.最新研究还表明， G服及GHK~Gu2+ ( G H K和二价铜离子形成的络合物)可促使神经细胞，免疫相关 细胞和肾小球细胞的生长分裂和分化。由于GHK分子中有2个碱性氨基酸，给人工 合成带来很多困难。传统的液相合成方法合成周期长，工艺烦琐，污染大，已经越 来越不符合现在的生产要求。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种。主要解 决其分子中含有2个碱性氨基酸导致人工合成困难的技术问题。本专利技术的技术方案 为 一种，包括以下步骤1、 将Fmoc-Lys(B0C)-0H与WangResin (王树脂)按比例混合，加入H0BT、 DIC和 DMAP作为活化剂，以DMF作溶剂在45"C 5(TC下振荡反应，反应产物过滤洗涤后得 至lj Fmoc-lys (Boc)-Wang Resin;2、 将步骤1中得到的Fraoc-lys(Boc)WangResin，加入六氢吡啶的DMF溶液中，将 Fmoc基团去掉，得到H-lys(Boc)Wang Resin;然后加入Fmoc-His (trt)-0H，经过 酰氨化反应得到Fmoc_His (trt)-lys (Boc)Wang Resin;3、 将步骤2中得到的Fmoc-His (trt)-lys (Boc) Wang Resin的Fmoc去掉，加入 Fmoc-Gly-0H，由酰氨化反应得到Fmoc-Gly-His (trt)-lys (Boc)Wang Resin;4、 取歩骤3中的产物，去掉Fmoc，加TFA，振荡后过滤，取滤液洗涤冻干可得 H-Gly-His-Lys-0H。步骤1中赖氨酸过量1. 5 2倍，振荡反应时间为3~5小时；步骤2中六氢吡 啶的DMF溶液的浓度为10 30%,步骤4振荡时间为1~3小时。本专利技术中一些常用的縮写具有以下含义Fmoc:荷甲氧羰基Wang Resin:王树脂Boc:叔丁氧羰基Fmoc-Lys(B0C)-0H:赖氨酸H0Bt: 1-羟基苯并三唑DIC: N， N'-二异丙基碳酰亚胺DMAP: 4-二甲氨基吡啶DMF: N， N， -二甲基甲酰胺trt:三苯甲基Lys:赖氨酸His:组氨酸Gly:甘氨酸 TFA:三氟乙酸Fmoc-lys(Boc)-Wang Resin:芴甲氧羰基赖氨酸(叔丁氧羰基)王树脂 H-lys (Boc) Wang Resin:赖氨酸(叔丁氧羰基)王树脂Fmoc-His (trt)-lys (Boc)Wang Re im新甲氧羰基组氨酰(三苯甲基)赖氨酸(叔 丁氧羰基)王树脂Fmoc-His(trt)-OH:芴甲氧羰基(三苯甲基)组氨酸H-His (trt)-lys (Boc) Wang Resin:组氨酰(三苯甲基)赖氨酸(叔丁氧羰基)王树 脂Fmoc-Gly-His (trt)-lys (Boc) Wang Resin:芴甲氧羰基甘氨酰组氨酰(三苯甲基) 赖氨酸(叔丁氧羰基)王树脂 Fmoc-Gly-OH:芴甲氧羰基甘氨酸H-Gly-His (trt)-lys(Boc) Wang Resin: 甘氨酰组氨酰(三苯甲基)赖氨酸(叔丁 氧羰基)王树脂H-Gly-His-Lys-OH:甘氨酰组氨酰赖氨酸本专利技术的有益效果是本专利技术反应速度快，污染小，产率高。因为采用的是Fmoc 体系的氨基酸，比传统的Boc体系更加安全，方便，脱Fmoc时采用的是2(W六氢吡 啶的DMF溶液比50。/。的三氟乙酸(TFA)更安全，污染更小。多肽从树脂上切割下来以 后是加水至定量后用乙酸乙酯洗涤。GHK中含有的赖氨酯是亲水性的氨基酸，用传 统的加乙醚析出的方法并不是很好，多肽在乙醚中的固化不是很理想，而且容易造 成浪费。本方法的处理方法避免了这点，所以产率更高。具体实施例方式实施例1:1) 将Fmoc-Lys(Boc)-OH和Wang Resin按比例投入茄形瓶中，赖氨酸过量1.5倍， DMF做溶剂，将Fmoc-Lys(Boc)-0H溶解，再加入DIC， H0BT， DMAP作为活化剂，在 45'C 5(TC的温度下，放入振荡器中振荡反应4h，取出后用砂芯漏斗过滤.用DMF、 甲醇、二氯甲垸依次洗涤所得到的树脂，晾干后称重，计算出树脂的loading值(即 每克树脂中所含的Fmoc-Lys(Boc)-OH的量)，将Wang Resin上没有连接上的 Fmoc-Lys(Boc)-OH官能团乙酰化。具体操作是将上述的树脂投入茄形瓶中，加入官能团乙酰化的溶液体积配比为醋酐二氯甲烷吡啶=1 :2:2的溶液，在45。C 5(TC的温度下在振荡器中反应2h，取出后用砂芯漏斗过滤，然后用DMF、 二 氯甲垸、5%醋酸水溶液，甲醇，二氯甲垸依次洗涤2 3遍，晾干，称重，取少量树 脂用茚三酮显色剂验色，若无色则说明反应完全,得到Fmoc-Lys(Boc) Wang Resin。2) 将步骤l)中得到的Fmoc-Lys(Boc) Wang Resin放入接肽瓶中，加入20%的六氢 吡啶一DMF溶液，通入氮气反应30min，抽干反应液，用DMF、甲醇、二氯甲烷依次 洗漆树脂2 3遍，取少量的树脂用茚三酮显色剂验色，颜色为深蓝或蓝紫色，则说 明产物l)中的Fmoc已去除，得到H-Lys (Boc) Wang Resin 。3) 将Fmoc-His(trt)-0H加入装有步骤2)产物的接肽瓶中，用DMF溶解，加入 HBTU(0-Benzotriazole-N, N， N', N， -tetramethyl-uronium-hexafluorophosphate)，N-甲基吗啡啉，通氮气反应40 min，抽干反应液，用DMF、甲醇、二氯甲烷依次洗 涤树脂2 3遍，取少量树脂用茚三酮显色剂验色，颜色为无色则说明反应完全，得 到产物Fmoc-His(trt)-Lys(Boc) Wang Resin。4) 同步骤2)所述，将步骤3)中所得到产物用20%六氢吡啶-DMF溶液去除Fmoc， 验色为深蓝或紫蓝色则说明反应完全，得到H-His(trt)- Lys (Boc) Wang Resin。5) 将Fmac-Gly-0H加入装有步骤4)产物的接肽瓶中，用DMF溶解，加入HBTU. N-甲基吗啡啉,通氮气反应40min，抽干反应液，用DMF、甲醇、二氯甲垸依次洗涤树 脂2 3遍，取少量树脂验色，颜色为无色则说明反应完全，得到产物Fmoc-Gly -His(trt)-Lys(Boc) Wang Resin。6) 将步骤5)中所得产物中加入20%六氢吡啶-DMF溶液去除Fmoc，验色为深蓝或紫 蓝色则说明反应完全，得到H- Gly - His(trt)-Lys (Boc) Wang Resin。7) 将步骤6)中所得产物放入茄形瓶中，加入三氟乙酸(TFA),放入振荡器中反应，2h 后取出用砂芯漏斗过滤。向滤液中加水至定量，将滤液加入分液漏斗中，用乙酸乙酯 洗涤，最本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种甘氨酰组氨酰赖氨酸的固相合成方法，其特征是包括以下步骤：ａ、将赖氨酸与王树脂按比例混合，加入１－羟基苯并三唑、Ｎ，Ｎ’－二异丙基碳酰亚胺和４－二甲氨基吡啶作为活化剂，以Ｎ，Ｎ’－二甲基甲酰胺作溶剂在４５℃～５０℃下振荡反应，反应产物过滤洗涤后得到芴甲氧羰基赖氨酸（叔丁氧羰基）王树脂；ｂ、将步骤１中得到的芴甲氧羰基赖氨酸（叔丁氧羰基）王树脂，加入六氢吡啶的Ｎ，Ｎ’－二甲基甲酰胺溶液中，将芴甲氧羰基基团去掉，得到赖氨酸（叔丁氧羰基）王树脂；然后加入芴甲氧羰基（三苯甲基）组氨酸，经过酰氨化反应得到芴甲氧羰基组氨酰（三苯甲基）赖氨酸（叔丁氧羰基）王树脂；ｃ、将步骤２中得到的芴甲氧羰基组氨酰（三苯甲基）赖氨酸（叔丁氧羰基）王树脂的芴甲氧羰基去掉，加入芴甲氧羰基甘氨酸，由酰氨化反应得到芴甲氧羰基甘氨酰组氨酰（三苯甲基）赖氨酸（叔丁氧羰基）王树脂；ｄ、取步骤３中的产物，去掉芴甲氧羰基，加三氟乙酸，振荡后过滤，取滤液洗涤冻干可得甘氨酰组氨酰赖氨酸。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：徐红岩，钱须军，张新平，
申请(专利权)人：吉尔生化上海有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]
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