本发明专利技术涉及一种新的化学方法，该方法提供作为优异的１，２－氨基硫醇（１，２－ａｍｉｎｏｔｈｉｏｌ）或１，３－氨基硫醇特异性试剂的新的载体衍生物，其用于与具有或经修饰具有１，２－氨基硫醇基或１，３－氨基硫醇基的未被保护的靶向化合物（例如多肽、肽或有机化合物）缀合。本发明专利技术还涉及新的水溶性聚合物衍生物及其缀合物的使用方法。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】本申请要求于2006年1月23日申请的美国申请号(尚未转让)的优先权，并要求于2005年1月24日申请的美国临时申请号60/646,685的权益，所述文献通过引用结合到本文中。
技术介绍
生物技术方面的最新进展使得生物分子的大规模生产成为可能，所述生物分子例如治疗性蛋白、肽、抗体和抗体片段目前都可以大规模制备，使这样的生物分子能够广泛应用。遗憾的是，生物分子的蛋白水解降解快、循环半衰期短、溶解度低、生产、贮存或给药过程中不稳定、或者给药后的免疫原性，常常会限制其应用。因为对给予生物分子的治疗和/或诊断用途的兴趣日益上升，已经研究了为克服这些缺陷的各种方法。 已广泛研究的方法之一就是通过与载体例如聚乙二醇(以下称为“PEG”)共价连接而修饰蛋白质和其它潜在治疗药(例如参见Abuchowski，A.等，J.Biol.Chem.252(11)3579-3586(1977)；Davis，S.等，Clin.Exp.Immunol.，46649-652(1981)；和美国专利申请公布号20040132664)。利用PEG基团与蛋白质或多肽连接(以下称为“PEG化”)的方法来解决或改善蛋白质或肽药物的众多难题在文献中已有详细记载(参见例如Francis等，International Journal of Hematology，681-18(1998)；Abuchowski，A.等，(1977)；Chapman，A.，Adv.Drug Del.Rev.54，531-545(2002))；和Roberts，M.J.等，Advanced Drug DeliveryReviews，54459-476(2002))。 简而言之，通常使用在一端或两端具有活性基团的载体衍生物，以便使载体与蛋白质、肽、多糖、多核苷酸、脂质或有机分子等活性剂共价连接(以下称为“缀合(conjugation)”)。根据将与载体偶联的分子上可用的活性基团的类型，来选择活性基团。举例来说，就是以下文献所提供的官能化聚合物WO96/41813和J.Pharmaceut.Sci.87，1446-1449(1998))。当载体为PEG时，适于与生物分子(例如蛋白质或肽的赖氨酸、半胱氨酸和类似残基)亲核中心反应的活化PEG衍生物包括PEG-醛、混合酸酐、N-羟基琥珀酰亚胺酯、羰基咪唑烷(carbonylimadazolide)和氯氰尿酸盐。已知这些方法各有优缺点(Harris，J.M.，Herati，R.S.，Polym Prepr.(Am.Chem.Soc.，Div.Polyin.Chem)，32(1)154-155(1991)；Herman，S.等，Macromol.Chem.Phys.，195203-209(1994)；和Roberts，M.J.等，Advanced Drug Delivery Reviews，54459-476(2002))。用已知方法进行缀合的一些相关的更常见问题包括产生反应杂质、不稳定的键、副反应和/或缺乏对取代基的选择性。此外，这些问题还意味着分离和纯化所需生物活性缀合物的复杂性。有时，会产生不同数量的异构体。这样的变异性带来批与批之间再现性的潜在问题，其中最大问题就是导致生物活性无法再现。 具有硫醇选择性官能团的活化载体衍生物特别适于与蛋白质或肽的半胱氨酸侧链偶联，所述官能团例如马来酰亚胺、乙烯砜、碘乙酰胺、硫醇和二硫化物(Zalipsky，S.Bioconjug.Chem.6，150-165(1995)；Greenwald，R.B.等Crit.Rev.Ther.Drug Carrier Syst.17，101-161(2000)；25 Herman，S.等，Macromol.Chem.Phys.195，203-209(1994))。然而，这些试剂也并非毫无缺点，尤其是当目标在于开发载体-缀合生物分子用于治疗用途时。例如，最初形成的PEG马来酰亚胺-硫醇缀合物是(R)-和(S)-手性混合物。混合物的形成使得在多个水平上开发PEG化生物分子变得更复杂。例如，对映体中的一个与另一个相比可能具有不想要的活性或不安全等问题。PEG马来酰亚胺-硫醇缀合方法的另一缺点就是最初形成的加合物易于重排成硫代吗啉酮。 也需要能再现性地产生两种以上连接的活性剂的缀合物。在某些情况下，给予这些含有与同一载体分子连接的不止一种活性剂的“多聚体”复合物，可导致相加和/或协同益处。例如，与单体多肽相比，含有两个以上相同结合肽或多肽的复合物对所结合的配体或活性位点的亲和性显著增加。或者，由以下(1)和(2)组成的复合物特别有益(1)在体内特定部位可发挥其功效的生物活性蛋白和(2)能将复合物靶向特定部位的分子。遗憾的是，将本专利技术的方法用于产生与不止一个生物活性或生物功能性分子缀合的载体，更加大了上述局限。例如，将两个生物活性分子与一个二价PEG-马来酰亚胺缀合的企图，将会产生不同数量的16种单独的实体。例如通过使用四价PEG-马来酰亚胺，用本专利技术的方法来产生与总共4个生物活性分子缀合的PEG，结果在PEG和生物活性分子之间可能有256个潜在的单独连接位点，等等。要想对这些单独实体进行量化，总的来说是困难的，有时甚至是不可能的，技术上的难题加之现有工具不足都可能极大地妨碍、甚至完全阻止这类生物分子的开发。 因此，目前显然需要高收率和高纯度地制备活性剂缀合物的方法。理想的是，这样的缀合物对水解是稳定的，需要相对少量的反应物即可制备，采用能保持载体或载体区段完整性(即在温和反应条件下进行)和/或保持所需生物活性的工艺就能容易地纯化。本专利技术提供新的试剂、方法和缀合物，能解决在现有技术水平上存在的上述问题并且提供相对于现有技术来说的许多优势。 专利技术概述 本专利技术涉及载体衍生物，包含至少一个具有1，2-氨基硫醇(1，2-aminothiol)或1，3-氨基硫醇选择性末端的载体区段。本专利技术的载体衍生物可用于与包含1，2-氨基硫醇或1，3-氨基硫醇部分的分子偶联。本专利技术的一个实施方案涉及一种或多种活性剂与水溶性聚合物(包括但不限于PEG)的连接。 本专利技术提供本专利技术载体衍生物的制备方法以及使用载体衍生物来制备新的活性剂缀合物的方法。 本专利技术的一方面涉及具有下列结构的化合物或其药学上可接受的盐或水合物 其中 A为饱和、部分饱和或不饱和的2、3、4、5或6个原子的桥连基团，其含有0、1、2或3个选自O、N和S的杂原子，而其余的桥原子为碳原子； E1为N、O或C； E2为N或C； G为单键、双键、C、N、O、B、S、Si、P、Se或Te； 和 各自为单键， 和 之一还可为双键；而当G为C或N时， 和 之一还可为双键；而当G为单键或双键时， 和 全都不存在； L1为二价C1-6烷基或C1-6杂烷基，所述各基团被0、1、2或3个选自以下的取代基取代F、Cl、Br、I、ORa、NRaRa和氧代基； m在所有情况下都独立地为0或1； o为0、1、2、3、4或5； R1为H、C1-6烷基、苯基或苄基，所述基团中的任一个被0、1、本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种具有下列结构的化合物或其药学上可接受的盐或水合物，＊＊＊其中：Ａ为饱和、部分饱和或不饱和的２、３、４、５或６个原子的桥连基团，其含有０、１、２或３个选自Ｏ、Ｎ和Ｓ的杂原子，而其余的桥原子为碳原子；Ｅ↑［１］为Ｎ、Ｏ或Ｃ；Ｅ↑［２］为Ｎ或Ｃ；Ｇ为单键、双键、Ｃ、Ｎ、Ｏ、Ｂ、Ｓ、Ｓｉ、Ｐ、Ｓｅ或Ｔｅ；＊α、＊β、＊δ和＊γ各自为单键，＊α和＊β之一还可为双键；而当Ｇ为Ｃ或Ｎ时，＊δ和＊γ之一还可为双键；而当Ｇ为单键或双键时，＊α、＊β、＊δ和＊γ全都不存在；Ｌ↑［１］为二价Ｃ↓［１－６］烷基或Ｃ↓［１－６］杂烷基，所述各基团被０、１、２或３个选自以下的取代基取代：Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＲ↑［ａ］、ＮＲ↑［ａ］Ｒ↑［ａ］和氧代基；ｍ在所有情况下都独立地为０或１；ｎ大于等于１；ｏ为０、１、２、３、４或５；Ｒ↑［１］为Ｈ、Ｃ↓［１－６］烷基、苯基或苄基，所述基团中的任一个被０、１、２或３个选自以下的基团取代：卤素、氰基、硝基、氧代基、－Ｃ（＝Ｏ）Ｒ↑［ｂ］、－Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ↑［ｂ］、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ↑［ａ］Ｒ↑［ａ］、－Ｃ（＝ＮＲ↑［ａ］）ＮＲ↑［ａ］Ｒ↑［ａ］、－ＯＲ↑［ａ］、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ↑［ｂ］、－ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ↑［ａ］Ｒ↑［ａ］、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ↑［ａ］）Ｓ（＝Ｏ）↓［２］Ｒ↑［ｂ］、－ＯＣ↓［２－６］烷基ＮＲ↑［ａ］Ｒ↑［ａ］、－ＯＣ↓［２－６］烷基ＯＲ↑［ａ］、－ＳＲ↑［ａ］、－Ｓ（＝Ｏ）Ｒ↑［ｂ］、－Ｓ（＝Ｏ）↓［２］Ｒ↑［ｂ］、－Ｓ（＝Ｏ）↓［２］ＮＲ↑［ａ］Ｒ↑［ａ］、－Ｓ（＝Ｏ）↓［２］Ｎ（Ｒ↑［ａ］）Ｃ（＝Ｏ）Ｒ↑［ｂ］、－Ｓ（＝Ｏ）↓［２］Ｎ（Ｒ↑［ａ］）Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ↑［ｂ］、－Ｓ（＝Ｏ）↓［２］Ｎ（Ｒ↑［ａ］）Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ↑［ａ］Ｒ↑［ａ］、－ＮＲ↑［ａ］Ｒ↑［ａ］、－Ｎ（Ｒ↑［ａ］）Ｃ（＝Ｏ）Ｒ↑［ｂ］、－Ｎ（Ｒ↑［ａ］）Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ↑［ｂ］、－Ｎ（Ｒ↑［ａ］）Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ↑［ａ］Ｒ↑［ａ］、－Ｎ（Ｒ↑［ａ］）Ｃ（＝ＮＲ↑［ａ］）ＮＲ↑［ａ］Ｒ↑［ａ］、－Ｎ（Ｒ↑［ａ］）Ｓ（＝Ｏ）↓［２］Ｒ↑［ｂ］、－Ｎ（Ｒ↑［ａ］）Ｓ（＝Ｏ）↓［２］ＮＲ↑［ａ］Ｒ↑［ａ］、－ＮＲ↑［ａ］Ｃ↓［２－６］烷基ＮＲ↑［ａ］Ｒ↑［ａ］和－ＮＲ↑［ａ］Ｃ↓［２－６］烷基ＯＲ↑［ａ］，并且还被０、１、２、３、４、５或６个选自以下的原子取代：Ｆ、Ｂｒ、Ｃｌ和Ｉ；Ｒ↑［２］为载体，Ｒ↑［３］为生物活性化...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：DC德阿米科，BC小阿斯库，
申请(专利权)人：安姆根有限公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]
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