一种新型耳抑素抗体制造技术

本发明专利技术提供了一种新型的耳抑素抗体或其功能性片段，与耳抑素具有较强的亲和力，灵敏度高。本发明专利技术还提供了利用该新型的耳抑素抗体或其功能性片段在用于检测耳抑素及其偶联药物中的方法。

A new antibody to the ear ear hormone

The present invention provides a new kind of antibody or its functional fragment, which has strong affinity and high sensitivity. The present invention also provides a method of using the new ear stimulating antibody or its functional fragment in the detection of an ear hormone and its coupling drugs.

【技术实现步骤摘要】
一种新型耳抑素抗体
本专利技术涉及一种新型耳抑素抗体或其功能性片段，其包含重链和轻链，本专利技术还涉及用所述抗体制备的试剂盒，以及所述抗体用于定量检测耳抑素及其偶联药物中的用途。技术背景耳抑素(dolastatin)也称海兔毒素，是从海洋无壳软体动物截尾海兔中提取了一类线性缩肽类毒素蛋白，有多种衍生物，常见的如：Dolastatin-10、Dolastatin-15、TZT-1027、MMAE(MonomethylAuristatinE)、MMAF(MonomethylAuristatinF)、西马多丁、他西多丁等(BaiRL,PettitGR,HamelE.Dolastatin10,apowerfulcytostaticpeptidederivedfromamarineanimal.Inhibitionoftubulinpolymerizationmediatedthroughthevincaalkaloidbindingdomain[J].Biochemharmacol,1990,39(12)：1941-1949.)。耳抑素通过作用于微管蛋白发挥强大的细胞毒活性，多种海兔毒素衍生物已被开发用于药物治疗(BaiRL,PettitGR,HamelE.Bindingofdolastatin10totubulinatadistinctsiteforpeptideanti-mitoticagentsneartheexchangeablenucleotideandvincaalkaloidsites[J].JBiolChem,1990,265(28)：17141-17149.)。因耳抑素具有很强的细胞毒性，直接用药安全性较低，“治疗窗”较窄，因此最主要的策略之一是耳抑素的靶向用药治疗。通过制备成具有靶向功能的制剂或连接具有靶向功能的分子，将耳抑素载带到生物体的特定部位发挥药效。最常见的靶向用药形式为抗体偶联药物(AntibodyDrugConjugations，ADC),目前已有多个耳抑素的ADC药物开展临床研究，其中有1个药物(Adcetris,SGN-35)已批准上市(DengCC，PanBQ，OwenA.Brentuximabvedotin[J].ClinCancerRes，2013，19(1)：22-27.)。在开展耳抑素相关靶向药物的药效、药代、毒代研究中，定量药理研究是重要的研究方面之一。建立耳抑素偶联药物的定量检测方法是支持上述研究的关键，这些定量检测方法包括液相-质谱法(LC-MS,LC-MS/MS)，酶联免疫法(ELISA)等。其中酶联免疫法(ELISA)是先将已知的抗原或抗体固定在固相载体表面，待测物通常相当于抗体或抗原，与结合在固相载体表面的抗原或抗体发生特异性结合，待测物连有酶，通过酶与底物发生的颜色反应(反应后颜色的深浅与待测物质的浓度呈一定比例关系)进行定量分析。对于检测耳抑素及其偶联药物，ELISA定量检测的主要策略之一就是利用抗药物抗体进行捕获或检测。在实施检测的过程中，特异性强、亲和力高的抗药物抗体的获得是关键，而大多数的小分子药物只有反应原性而无免疫原性，这就为ELISA定量检测耳抑素及其偶联药物带来了难以解决的困扰。本专利技术提供了解决上述问题的技术方案，制备了特异性结合耳抑素的抗体，特异性强，亲和力高，灵敏度高，可用于ELISA的定量检测。
技术实现思路
为了解决上述问题，本专利技术提供了一种新型的耳抑素抗体或其功能性片段，其是通过将耳抑素与不同的载体蛋白进行偶联，形成人工抗原，进行动物免疫，再经筛选获得的与耳抑素药物分子具有高亲和力的抗体。其偶联策略主要是将药物分子的基团活化后，偶联不同的载体蛋白制备人工抗原，一种作为免疫抗原，而另一种用于筛选抗原，以保证产生的抗体是针对耳抑素分子而非载体蛋白。本专利技术还提供了利用该新型的耳抑素抗体或其功能性片段定量检测耳抑素或其偶联物的方法，及利用该新型的耳抑素抗体或其功能性片段用于制备检测游离耳抑素或耳抑素偶联药物的试剂盒。本专利技术具体的技术方案为：一方面，本专利技术提供了一种新型的耳抑素抗体或其功能性片段，其包含重链和轻链，特别的：(i)所述重链至少包含三个CDR区，所述CDR区具有如SEQIDNO:1、2、3、7、8、9、13、14、15所示的氨基酸序列；和/或(ii)所述轻链至少包含三个CDR区，所述CDR区具有如SEQIDNO:4、5、6、10、11、12、16、17所示的氨基酸序列。具体地，所述的新型的耳抑素抗体或其功能性片段，其包含重链和轻链，(i)所述重链包含三个CDR区，所述CDR区具有如SEQIDNO:1、2、3所示的氨基酸序列；和/或(ii)所述轻链包含三个CDR区，所述CDR区具有如SEQIDNO:4、5、6所示的氨基酸序列。具体地，所述的新型的耳抑素抗体或其功能性片段，其包含重链和轻链，(i)所述重链包含三个CDR区，所述CDR区具有如SEQIDNO:7、8、9所示的氨基酸序列；和/或(ii)所述轻链包含三个CDR区，所述CDR区具有如SEQIDNO:10、11、12所示的氨基酸序列。具体地，所述的新型的耳抑素抗体或其功能性片段，其包含重链和轻链，特别的：(i)所述重链包含三个CDR区，所述CDR区具有如SEQIDNO:13、14、15所示的氨基酸序列；和/或(ii)所述轻链包含三个CDR区，所述CDR区具有如SEQIDNO:16、5、17所示的氨基酸序列。更具体地，所述的新型的耳抑素抗体或其功能性片段，其包含重链和轻链，(i)所述重链包含三个CDR区，CDR1具有如SEQIDNO:1所示的氨基酸序列，CDR2具有如SEQIDNO:2所示的氨基酸序列，CDR3具有如SEQIDNO:3所示的氨基酸序列；(ii)所述轻链包含三个CDR区，CDR1具有如SEQIDNO:4所示的氨基酸序列，CDR2具有如SEQIDNO:5所示的氨基酸序列，CDR3具有如SEQIDNO:6所示的氨基酸序列。更具体地，所述的新型的耳抑素抗体或其功能性片段，其包含重链和轻链，(i)所述重链包含三个CDR区，CDR1具有如SEQIDNO:7所示的氨基酸序列，CDR2具有如SEQIDNO:8所示的氨基酸序列，CDR3具有如SEQIDNO:9所示的氨基酸序列；(ii)所述轻链包含三个CDR区，CDR1具有如SEQIDNO:10所示的氨基酸序列，CDR2具有如SEQIDNO:11所示的氨基酸序列，CDR3具有如SEQIDNO:12所示的氨基酸序列。更具体地，所述的新型的耳抑素抗体或其功能性片段，其包含重链和轻链，(i)所述重链包含三个CDR区，CDR1具有如SEQIDNO:13所示的氨基酸序列，CDR2具有如SEQIDNO:14所示的氨基酸序列，CDR3具有如SEQIDNO:15所示的氨基酸序列；(ii)所述轻链包含三个CDR区，CDR1具有如SEQIDNO:16所示的氨基酸序列，CDR2具有如SEQIDNO:5所示的氨基酸序列，CDR3具有如SEQIDNO:17所示的氨基酸序列。进一步地，所述的新型的耳抑素抗体或其功能性片段，其包含重链和轻链，其特征在于：(i)包含如SEQIDNO:18、20、22所示的氨基酸序列的重链可变区；(ii)包含如SEQID本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种新型的耳抑素抗体或其功能性片段，其中所述抗体包含重链和轻链,其特征在于：(i)所述的重链至少包含三个CDR区，所述CDR区具有如SEQ ID NO:1、2、3、7、8、9、13、14、15所示的氨基酸序列；(ii)所述的轻链至少包含三个CDR区，所述CDR区具有如SEQ ID NO:4、5、6、10、11、12、16、17所示的氨基酸序列。

【技术特征摘要】
1.一种新型的耳抑素抗体或其功能性片段，其中所述抗体包含重链和轻链,其特征在于：(i)所述的重链至少包含三个CDR区，所述CDR区具有如SEQIDNO:1、2、3、7、8、9、13、14、15所示的氨基酸序列；(ii)所述的轻链至少包含三个CDR区，所述CDR区具有如SEQIDNO:4、5、6、10、11、12、16、17所示的氨基酸序列。2.根据权利要求1所述的新型的耳抑素抗体或其功能性片段，其特征在于：(a)所述重链包含三个CDR区，所述CDR区具有如SEQIDNO:1、2、3所示的氨基酸序列；所述轻链包含三个CDR区，所述CDR区具有如SEQIDNO:4、5、6所示的氨基酸序列；或(b)所述重链包含三个CDR区，所述CDR区具有如SEQIDNO:7、8、9所示的氨基酸序列；所述轻链包含三个CDR区，所述CDR区具有如SEQIDNO:10、11、12所示的氨基酸序列；或(c)所述重链包含三个CDR区，所述CDR区具有如SEQIDNO:13、14、15所示的氨基酸序列；所述轻链包含三个CDR区，所述CDR区具有如SEQIDNO:16、5、17所示的氨基酸序列。3.根据权利要求1所述的新型的耳抑素抗体或其功能性片段，其包含重链和轻链，其特征在于：(a)包含如SEQIDNO:18所示的氨基酸序列的重链可变区；包含如SEQIDNO:19所示的氨基酸序列的轻链可变区；...

【专利技术属性】
技术研发人员：姜静，王凌，李伟伟，
申请(专利权)人：滨州医学院，
类型：发明
国别省市：山东,37