含CMV/R-核酸构建体的抗AIDS疫苗制造技术

本公开提供了引起包括预防性免疫应答在内的抗人免疫缺陷病毒免疫应答的组合物。该组合物包括编码多种进化枝或病毒株的ＨＩＶ抗原性多肽的核酸构建体。还提供了通过将该组合物向个体给药来引起免疫应答的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】含CMV/R-核酸构建体的抗AIDS疫苗相关申请的交叉引用本申请要求了 2004年7月16日提交的第60/588,378号美国临时专 利申请和同时待审的PCT申请PCT/US2004/030284(2004年9月15曰提 交)和PCT/US2005/12291(2005年4月12日提交)的优先权和权益。在此 引入这些申请的每一申请的全部的公开内容。
本申请涉及疫苗领域。更特别地，本申请涉及预防人免疫缺陷病毒 (fflV)的多质粒疫苗。狄支持的致谢本公开的各个方面是用政府支持进行的。政府拥有本专利技术的某些权利。
技术介绍
全世界四千多万人被HIV-1感染并且每天估计有14，000新感染病例。 自从1981年鉴定了第 一例AIDS以来，超过250万人死于HIV/AIDS(CDC， MM『及Mw6. Morto/ 52:1145-1148, 2003; UNAIDS， 2003Report on the Global AIDS Epidemic Executive Summary, 2004》全斜目关 的HIV-1疫苗的开发对于控制HIV/AIDS全球流行是至关重要的。高转录错误率和频繁重组的结合导致HIV-1病毒抹中存在显著量的 遗传多样性，并为选择病毒抗原提出了挑战。HIV遗传性变异的其它潜 在影响为每个个体内的高突变率，这为从表位特异的免疫应答中逃离的 病毒创造了才几会且为基于T细胞的疫苗途径提出了特别挑战(Altfield等 人，丄Wra/" 77:12764-12772, 2002; Bhardwaj等人，MzA MW., 9:13-14， 2003; Brander等人，C脏.Opz". 7mm歸/, 11:451-459,1999; Letvin等人，Ato. Afed, 9:861-866， 2003)。已探究了引起对HIV-1的有效免疫性的多种 疫苗策略。在这些策略中，通过编码HIV蛋白抗原的基因的质粒DNA 的免疫法是有希望的疫苗途径(Mascola等人，O^r. 0/ z>2. 7mmw"o/， 13:489-494, 2001; Nabel， GJ., 7Vflft/M, 410:1002-1007， 2001)。基于基因的 免疫法促进宿主细胞合成和病毒抗原的表达及细胞细胞质中生理性翻译 后加工和折叠。因此，DNA免疫法在动物模型中引起对多种免疫原的 CD4+和CD8+T淋巴细胞应答(Graham， B.S., 7 eu ^/^/., 53:207-221，2002; Rollman et al.,77^" 11:1146-1154， 2004; Barouch et al.，肠"ce, 290:486-492， 2000; Subbramanian et al.，F/ro/, 77:10113-10118， 2003; Mascola et al.,Wra/， 79:771-779， 2005)。相对于其它载体输送系统，通过DNA质粒疫苗载体输送病毒抗原具 有潜在的优点，特别是没有抗载体免疫性。尽管许多例子显示DNA免疫 法在小鼠和非人的灵长美中存在疫苗诱导的预防(Rollman et al., 7%er" 11:1146-1154,2004; Donnelly et al.， MzZ. 1:583-587， 1995)，但是，其在人体内只显示出有限的免疫原性。证实在抗原-初始型 (antigen-nai've)人类中具有免疫原性的第一个DNA疫苗是由Biojecto^输 送的、表达来自恶性痴原虫的环子孢子抗原的构建体。在此研究中，仅 在效应物的体外扩张后检测到CD8+ CTL应答(Wang et al., Sc/ewce， 282:476-480, 1998)。另 一 才艮导描述了由不同的无针注射装置， PowdeijectTM,输送的表达乙型肝炎表面抗原的DNA质粒在抗原-初始型 人类中诱导抗体以及疫苗-特异性T细胞应答(Roy et al., F"acc/"e, 19:764-778， 2000)。在HIV-感染的和HIV-未感染的个体中测试(MacGregor et al.,丄/"/ec/. Zfe.， 178:92-100， 1998)的表达HIV-1 Env和Rev蛋白的 DNA质粒疫苗与不良反应不相关，但是只观察到散在的淋巴组织增生和 抗体应答(MacGregor et al.， /"/e". 181:406， 2000; MacGregor et al.， 却& 16:2137-2143,2002)。本公开描述了疫苗组合物，该疫苗组合物通过提供对应于人免疫缺 陷病毒1的多进化枝和病毒抹的重要的免疫原性表位的HIV抗原的强烈 表达，引起广语的抗HIV的免疫性。本专利技术的前述及其它目的、特征和 优点通过参考附图的如下详细说明更显而易见。概述本公开涉及编码HIV抗原的核酸构建体。这些核酸构建体能够引起 抗HIV多种变体的免疫应答，并适于治疗性(例如，预防性)给药。在免 疫原性组合物的情况下，将多种核酸组合，每一核酸编码HIV抗原性多 肽，例如，不同的HIV抗原性多肽(例如，Gag、 Pol和Nef)。单个的免 疫原性组合物包括编码HIV的多进化枝和病毒林的抗原性多肽的核酸构 建体，该HIV的多进化枝和病毒抹为例如Gag、 Pol或Nef的多进化枝或 病毒抹，或者Gag、 Pol和Nef上的多进化枝或病毒林。因此，当向个体 给药时，所述组合物引起抗在人类中流行的多种进化枝或病毒抹的免疫 应答。还描述了使用所述组合物的方法。这类方法包括例如，为了引起抗 HIV的多种进化枝或病毒^K的免疫应答，将包括所公开的核酸构建体的 组合物向个体给药。可将所述组合物单独地，或与另外的免疫原性组合 物联合给药。本专利技术的前述及其它目的、特征和优点通过参考附图的如下详细说 明更显而易见。附图的简要说明图l为多进化枝、多价HIV疫苗组合物的示意图。图2是质粒VRC 4401的示意图。图3是质粒VRC 4409的示意图。图4是质粒VRC 4404的示意图。图5^t粒VRC5736的示意图。图6是质粒VRC5737的示意图。图7是质粒VRC5738的示意图。图8A示意表示具有不同转录调节序列的抗原性表达构建体。图8B 是显示不同构建体的相对表达的Western印迹图。鼠中CD4+和CD8+T细胞应答的条形图。附图说明图10A、10B和10C为说明在用具有CMV/R转录控制序列或CMVIE 转录控制序列的核酸构建体免疫的小鼠中抗HIV Gag、 Pol和Nef抗原的 相对免疫应答的条形图。图11A、 11B和11C为说明在用不同疫苗组合物免疫的短尾猴猕猴 中抗HIVGag、 Pol、 Nef和Env抗原的相对免疫应答的条形图。图12A、 12B和12C为说明在使用不同疫苗组合物的短尾猴猕猴的 免疫接种后，产生抗HIV免疫应答时程的条形图。图13为说明在用VRC-HIVDNA016-00-VP免疫的人中，通过细胞内 细胞因子染色(ICS)测定的细胞免疫应答的一 系列的条形图。序列表的筒要说明SEQ ID NOs: 1-6分别表示VRC-HIVDNA016-00-VP质粒4401本文档来自技高网...

【技术保护点】
能够在免疫活性个体中引起抗ＨＩＶ的免疫应答的组合物，所述组合物包含：　　　　多种不同的核酸构建体，每种核酸构建体包含与ＣＭＶ／Ｒ转录控制序列可操作地连接的编码ＨＩＶ抗原性多肽的多核苷酸序列，　　　　其中所述多种核酸构建体编码多种ＨＩＶ进化枝或病毒株的抗原性多肽。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：加里J内伯，黄越，徐凌，比马尔沙克拉博蒂，吴岚，杨志勇，贾森GD加尔，里克特C金，
申请(专利权)人：美国政府健康及人类服务部，金维克有限公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]