本发明专利技术涉及包括羧基硫酯的第一成分与包括带支链侧链的氨基官能化化合物的第二成分的化学连接，从而产生在连接部位具有酰胺键的连接产物的方法和组合物，所述侧链包括可除去的巯基辅助物。本发明专利技术的反应物是化学选择性的而巯基部分是可从连接产物中除去的。巯基的除去可以被利用以在连接部位产生天然的侧链。本发明专利技术的方法和组合物对肽和多肽的连接特别有用。本发明专利技术的连接系统可应用于各种分子，因此可以被用以生成肽、多肽和其他含氨基酸的聚合物。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】侧链延伸连接相关申请的交叉参考本申请要求2005年6月16日递交的美国临时专利申请No. 60/691,396的优先权，该专利为了所有的目的全部通过引用结合到本 文中。有关在联邦赞助的研究或发展下进行的专利技术的权利的声明不追用"序列目录"、表格或用光盘提交的电脑程序目录附件的参考不适用专利技术背景化学连接涉及第 一化学成分和第二化学成分之间的共价连接的 形成。存在于第一和第二成分上的独特的、相互反应的官能基团可用 于使连接反应具有化学选择性。几种不同的化学过程已用于该目的， 其实例包括形成酰胺的连接反应(Dawson等，Science 1994, 266, 776-779; Kent等，WO 96/34878; Kent等，WO 98/28434; Botti等，WO 02/20557;及Kent等，WO 02/20034);形成肟的化学连接反应(Rose等，丄 Amer. Chem. Soc. 1994, 116， 30-34),形成硫酯的连接反应(Schn6lzer 等，Science 1992, 256, 221-225),形成硫醚的连接反应(Englebretsen等, Tet. Letts. 1995, 36, 8871-8874),形成腙的连接反应(Gaertner等， Bioconj. Chem. 1994, 5, 333-338),形成噻唑烷的连接反应和形成噁唑 烷的连接反应(Zhang等，Proc. Natl. Acad. ScL 1998, 95, 9184-9189; Tam等，WO 95/00846;美国专利No.,589,356)。最广泛使用的形成酰胺的连接反应称为天然化学连接反应("NCL")(Kent等，WO 96/34878)。天然化学连接反应涉及具有C-端a-羧基硫酯部分的第一肽或多肽片段与具有N-端半胱氨酸残基的第二 肽或多肽片段之间的化学选择性反应。硫醇交换反应产生最初的硫酯 连接的中间体，该中间体自然重排在连接部位生成天然酰胺键，同时 使半胱氨酸侧链巯基再生。天然化学连接反应被用于多种目的，包括 多肽和蛋白质的固相合成(Canne等，WO 98/56807; Low等，WO 04/105685)、膜多肽和蛋白质的合成及难合成的肽的通用合成方法 (Kochendoerfer等，WO 00/12536)、可溶性受体区域的合成 (Kochendoerfer, G., WO 00/53624)、聚合物修饰的肽和蛋白质的构建 (Kochendoerfer等，WO 02/20033)，以及被修改为应用于水可溶性保护 基团(Kochendoerfer等，WO 04/060925)、减少副反应(Kochendoerfer 等，WO 02/20033; Botti等，WO 04/007661)、扩展保护基团的选项 (Kochendoerfer等，WO 02/20033; Villain等，WO 02/098902)、及培养 另外的硫酯生成策略(Botti等，WO 02/18417; Botti等，WO 03/106615; Miranda等，WO 04/061094; Miranda等，WO 04/011424; Miranda, L., WO 04/060863)。原始的NCL技术的主要缺点是要求有 N-端半胱氨酸，即它仅允许在连接部位拥有半胱氨酸的肽和多肽片段 的结合。在半胱氨酸以外的位置形成酰胺的化学连接反应已有报道。 一种 方法，称为延伸的天然化学连接反应或ENCL，采用将带C-端羧基硫 酯的第一肽与带N-端氨基取代的、连接反应后可除去的辅助巯基的第 二肽片段邻接(Botti等，WO 02/20557; Botti等，WO 03/042235)。第 二种方法，称为假天然化学连接反应PNCL，涉及将C-端羧基硫酯肽 与带N-端半胱氨酸的肽片段反应(如NCL)，接着进行连接部位的半胱 氨酸侧链巯基的化学修饰生成"假氨基酸"(Kent等，WO 02/20034)。 ENCL和PNCL的缺点是与连接反应部位所采用的特定氨基酸有关的可变的反应产率。例如，如NCL方法，ENCL和PNCL方法在涉及J3-支链氨基酸的连接反应部位进行得很差。因此，所需要的是除先前的形成酰胺的连接技术之外，提供可选 择的、广泛适用的和耐用的化学连接系统。本专利技术针对这些和其他需 要。专利技术简要概述本专利技术涉及用于侧链延伸的化学连接的方法和组合物。有利的曰疋，根据一个方面，本专利技术提供通过酰胺键连接成分的方法。该方法 包括将式JrC(O)SR的成分与式NH2-CH(XSH)-J2的成分在足够形成 具有式J广C(0)-NH-CH(XSH)-J2的巯基取代的连接产物的条件下接 触，其中，J,为第一'目标分子、聚合物或表面的残基；R为可与疏酯 相容的基团；XSH为具有可除去的巯基辅助物(auxilliary)的支链氨基 酸侧链并选自式-CH(R')-SH的(3-巯基辅助物和式-CH2-CH(R')-SH的Y-巯基辅助物，其中R'为氢以外的氨基酸侧链的残基；且J2为第二目标 分子、聚合物或表面的残基。在另一方面，本专利技术也提供了除去巯基 辅助物生成式JrC(0)-NH-CH(XH)-J2的连接产物的方法，其中XH为 选自式-CHb(R')和式-CH2-CH2(R')的氨基酸侧链。根据另 一方面，本专利技术提供了具有式P广NH-CH(XSH)-J2的成分， 其中P,为可除去的氨基保护基团或氢；XSH为支链氨基酸侧链成分 并选自式-CH(R')-SH的(3-巯基辅助物和式-CH2-CH(R')-SH的y-巯基辅 助物，其中R'不同于氢，而除去巯基辅助物后产生的残基CH2 R'和 CH2-CH2R'为氨基酸侧链；且J2为目标分子、聚合物或表面的残基。根据再一方面，本专利技术提供了具有式J广C(0)-NH-CH(XSH)-J2的 连接产物，其中J!为笫一连接成分的残基，XSH为具有可除去的巯基 辅助物的支链氨基酸侧链并选自式-CH(R')-SH的p-巯基辅助物和式-CH2-CH(R')-SH的"巯基辅助物，其中R'为不同于氢的氨基酸侧链残基，且J2为第二连接成分的残基。参考本说明书的剩余部分(包括附图和权利要求)，将实现本专利技术 的其他特征和优势。本专利技术的其4^特征和优势，以及本专利技术的各种实 施方案的结构和操作，在下面用附属的图和反应流程详细描迷。附图简要说明附图说明图1显示采用p-支链巯基辅助物的肽侧链延伸的化学连接；相同 的反应流程可用于进行任何合适的分子的连接，包括与y-支链巯基辅 助物的连接。图2描述了^4V2尺2^-苯J^半胱氨酸衍生物的合成^L流禾l。 图3描述了 /#4'-(2尺2^-苯基半胱氨酸衍生物的合成反应流程。 图4描述了反式和顺式苯基半胱氨酸衍生物和一锅化连接/烷基化/脱硫反应的联合反应流程。 —图5显示采用^4'-苯基半胱氨酸卩^ M,的C-端肽LYRAG-硫酯与N-端肽HSF-YAKYAKL的一锅化连接/烷基化/脱硫反应的HPLC色语图。图6显示采用乂 -苯基半胱氨酸(2見3》的C-端肽LYRAG-硫 酯与N-端肽HSF-YAKYAKL的一锅化连接/烷基化/脱硫反应的HPLC 色语图。专利技术详述本专利技术涉及与本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种通过酰胺键连接成分的方法，所述方法包括： （ａ）将式Ｊ↓［１］－Ｃ（Ｏ）ＳＲ的成分与式ＮＨ↓［２］－ＣＨ（ＸＳＨ）－Ｊ↓［２］的成分在足够形成具有式Ｊ↓［１］－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－ＣＨ（ＸＳＨ）－Ｊ↓［２］的巯基取代的连接产物的条件下接触， 其中， Ｊ↓［１］为第一目标分子、聚合物或表面的残基； Ｒ为可与硫酯相容的基团； ＸＳＨ为具有可除去的巯基辅助物的支链氨基酸侧链并选自式－ＣＨ（Ｒ′）－ＳＨ的β－巯基辅助物和式－ＣＨ↓［２］－ＣＨ（Ｒ′）－ＳＨ的γ－巯基辅助物，其中Ｒ′为氢以外的氨基酸侧链的残基；且 Ｊ↓［２］为第二目标分子、聚合物或表面的残基。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：P博蒂，S切尔特基安，
申请(专利权)人：安米林药品公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]
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