抗人淋巴细胞免疫球蛋白的制备方法技术

本发明专利技术提供了一种抗人淋巴细胞免疫球蛋白的制备方法，其步骤是：用人外周血Ｔ淋巴细胞或人胸腺细胞免疫健康猪，采集、分离出猪血浆，经２０％乙醇制作后，用低温高转速离心机或压滤机分离出组分Ⅰ＋Ⅱ＋Ⅲ沉淀，经１４％乙醇制作后，分离、收集上清液，再经２５％乙醇制作后，分离出组分Ⅱ沉淀，再经过免疫球蛋白的精制、配置和病毒灭活等步骤即得抗人Ｔ细胞猪免疫球蛋白。与目前使用的硫酸铵盐析法相比，本发明专利技术工艺具有可大量生产、操作简单易于掌握、生产周期短、使用试剂少、成本低、无环境污染等优点，克服了现有工艺存在的难以大规模生产、产量低、浪费大、造成环境污染、生产成本高、生产过程复杂、使用的化学试剂繁多、生产周期长、设备占用率高等不足。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种抗人Ｔ细胞猪免疫球蛋白纯化工艺，包括以下步骤：（１）制备免疫血浆：用人外周血Ｔ淋巴细胞或人胸腺细胞免疫健康猪，经检验合格后采集、分离出猪血浆；（２）２０％乙醇制作：精确称量猪血浆量，倒入不锈钢大罐中，启动搅拌桨缓慢搅拌，按血浆量加入２０％～３０％的０．８５％的生理氯化钠溶液，搅拌均匀，加入ｐＨ４．０的醋酸盐缓冲液调整混合溶液的ｐＨ值为６．０±０．５０，再将混合液的温度降至－４．０℃±－１．０℃，加入９５％的乙醇，乙醇温度不低于－２５℃，加完乙醇，继续搅拌２小时后，停止搅拌静置８小时；（３）组分Ⅰ＋Ⅱ＋Ⅲ沉淀分离：用低温高转速离心机或压滤机分离出组分Ⅰ＋Ⅱ＋Ⅲ沉淀，上清液废弃；（４）１４％乙醇制作：将组分Ⅰ＋Ⅱ＋Ⅲ沉淀倒入装有温度低于４℃的注射用水的大罐中，缓慢搅拌，注射用水用量为投浆量的０．９倍，连续搅拌２小时后，加入磷酸盐缓冲液Ⅰ调整ｐＨ值为５．０±０．５０，持续搅拌１小时，再补入低于４℃的注射用水，注射用水用量为投浆量的１．３倍，加入磷酸盐缓冲液Ⅱ调整ｐＨ值为６．０±０．５０，持续搅拌１小时，再补入温度低于４℃的注射用水，注射用水用量为投浆量的１．７倍，将混合液温度降至－２℃±－１．０℃，加入９５％的乙醇，乙醇温度不低于－２５℃，加完乙醇，继续搅拌２小时后，停止搅拌静置８小时；（５）组分Ⅰ＋Ⅲ沉淀分离：用低温高转速离心机或压滤机分离、收集上清液；沉淀为组分Ⅰ＋Ⅲ，废弃；（６）２５％乙醇制作：精确计量上清液体积，加入３ｍｏｌ／Ｌ氯化钠溶液，加入量为上清量的０．０１６７倍，再加入１ｍｏｌ／Ｌ碳酸氢钠溶液调整ｐＨ为７．０±０．５０，将混合液温度降至－７．０℃±－１．０℃，加入９５％的乙醇，乙醇温度不低于－２５℃，加完乙醇，继续搅拌２小时后，停止搅拌静置８小时；（７）组分Ⅱ沉淀分离：用低温高转速离心机或压滤机分离出组分Ⅱ沉淀，上清液废弃；（８）免疫球蛋白精制：用０℃的０．８５％的生理氯化钠溶液溶解组分Ⅱ沉淀，生理氯化钠溶液用量为组分Ⅱ重量的３～５倍，缓慢搅拌２小时，使沉淀均匀浆化，开始澄清过滤，然后超滤脱醇，取样测蛋白浓度，根据测定的蛋白浓度的结果将蛋白浓度稀释至１％，加入经醛化的人红细胞，加量为投浆量的１５％～３０％，放置４℃冷库缓慢搅拌，冷吸收８～１０小时，离心取上清，上清中加入经醛化的人胎盘渣和健康人血浆，胎渣加量为投浆量的１５％～３０％，健康人血浆加量约为投浆量的５％，放置４℃冷库缓慢搅拌，冷吸收８～１...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：余健，吴笛，宰家敏，张伟华，徐江峰，
申请(专利权)人：武汉生物制品研究所，
类型：发明
国别省市：83[中国|武汉]