一种表面螯合金属离子的磁性二氧化硅微球制备方法，由制备磁性二氧化硅微球、磁性二氧化硅微球的环氧基化、磁性二氧化硅微球羧基化、金属离子的螯合工艺步骤组成。本发明专利技术与现有的制备方法相比，具有设计合理、操作简单、金属螯合量大等优点。采用本发明专利技术制备的表面螯合金属离子的磁性二氧化硅微球中含有钴离子，具有与修饰微球间较强的结合力不易使钴离子泄漏，而且与蛋白质上的组氨酸具有较高选择性和合适的结合强度，使表面螯合金属离子的磁性二氧化硅微球对六聚组氨酸标签蛋白有很高的选择性和易于实现目标蛋白的分离和纯化。采用本发明专利技术所制备表面鳌合金属离子的磁性二氧化硅微球可用于分离六聚组氨酸标签蛋白。
【技术实现步骤摘要】
表面^^厲离子的磁性二氣4I^^!备方法及其用途 駄领域本专利技术属于材^l域，^tMU用于M^IF菌中分离六ll^^l白的材料。生!^SI^^是在^8i^fi^K^R&Jb^1^,以细龐、细菌、核酸 和蛋白JWi物体为Jgffl^的H^^离^, ^ *1^ ^￡^&#^卜M^用下i^ffii^H^,对目旨iwj^fim、富集、分awi化，早 期的工作i^i中于^K4^ietiWil^t上，^ss过在i^E体中g^，性^m邻附，^m聚丙iftKK、鹧:z^gZ^^l^l^中'这flW纖大小分布均匀M^ tl^匀纖，舰了不同生纖鹏 的可重现性和可皿。生iW分离^l^准分离^9比有一定^,首5fc^离nga常非常简单，只涉及几个鹏步骤.所有,鄉m^在单^t離 織中发生，不窬要昂贵wiU 120 180的L-天冬教 靴fl^^fWfc^^,在^S离TMi^工艺频4中，Jffi^Hs的tttt::m化硅IW与浓度为0,2啦1/L的CoCl,', ^tt^M量比为l: 1幼 15Q加，杯内，絲专利技术miittriw^m:艺步骤i中，+7^1三甲 1化铵与甲苯的最 *比为h 15， FeClHWf与Pea 6ft0的jil比为1: 3溶解于二^C中,RtM^A^为i40g/L的水瀋齔勵n到±^漏，中，再inAiu^K为m 駄，十:^HH甲絲化铵与Jga^为25ift!KJRmil量比为l: 0* 17,鄉賴中；将+7^^甲S^fc铵与I0i^ZaSftm8Wt比为1; 1.25的正繊 乙II^KlQA; ft^中加入乙醇，十六,三甲S^t铵与乙醇的J^t量比为 1: 2,25;沉淀物用乙鹏流12小时，+7^三甲翻^^与乙醇的§ ||*比 为h 22.5,鹏成磁性二氣化硅微球，在磁性二氧化硅鹏的环,化工艺歩骤2中，^it^w^m^与甲^a^iis比为i:服o加ah口繊内混合，在磁性:z^fcaW^4fcXX^骤3中，将L-天冬氣酸与# ,为60g/L的Ma水溶,最ttMl:比为i: 18混^^P加入两口,内，再加入与该混合溶液最顿量比为h 150的表面键合环條的離I^條鹏，审恪成L-天錄 靴^tt:imtta^将溴i酸与鹏總为60g/L的Na^Mia^质 i比为l; 1S潘絲解MA两口鹏内，再加入与该棍合^MmS比为1: 150 的L-天冬氯酸化6! 8性二氧化娃,。在金厲离子的,工，骤4中， ^M性zm化硅,与浓度为0.2n l/L的CoClWW)最佳拔廣量比为1: 120加入 烧杯内。，制备的表面,金属离子的磁性二氣化硅微,，杆菌中分离六聚组 氮酸标签蛋白中的用途。本专利技术采用了溶M^S^备了以四氧ftS^W^为核，以正繊乙酯作 1为壳《 :^化敏微球,以此,^^环氣,偶SIM3-缩氷甘油1W基丙SH甲^Si^、 l—天冬氣酸w^溴乙^i^后形成的配体为络合剂，截m属钴离子，翻恪自面l^^属离子ttM性:^il^,。本专利技术自了 Li#S 酸和澳乙,l^tW性:^化娃旨，可以为金厲离子li^个配位点，不仅保与蛋白质 貭。翻,较強,合力^i使钴离子M，而且与蛋白赝上B^氣m^^Wii^^铖的结^Mt,从而使表ffil^l离子,性:^化^im^聚组氣l1^蛋白有根swii^tt和易于实现目标蛋白的分离wi化，本专利技术与现有e^膝m相比，具有设^# 、,简单、誠^fc^^a細本专利技术脚條表面螯合金属离子的^ttrm化硅微球可用于分离六皿氨^s蛋白* 附图说明-图i ^y^施例i ^#表面^^1离子的《 ^ 4{^^的￥別,屈线-图2是,例l ti^^M^^Jg离子的Stti^Wfc^^的娜电子繊镜照片e图3是实施例i铜搭的，^jj离子fltiattz^tti^w^g描电子显微镜照片。图4是^M例i mw細i^JS离子的afe^4k^^ xps光电予麟图。图5是实MM i m的表面^^a离^rt性i化硅,xps光电子s^N元素的化学位移谱图。图6是 例i银洛的表面^^Ji离子的磁性:im化硅1SWt!全自动x—射线衍射團谱a图7是以实例i制备的表面螯^r属离子的磁性z^WM自测得的电泳照片。图s是实例i的磁性^^m化^^io^ffi螯合^ii离子的磁ttzm化硅,分 离蛋白的电泳照片。图9是不同釁亵M^金腐离子的自:zWtft1^,化分fifS白的电i^片。图10 Sffl环,丙m 3-缩水甘油l^丙SH甲^sa^分别修饰^IM 性二氧化硅微球纯化分析蛋白的电泳照片。图11六聚组鳜m^蛋白标准曲线a具体实施例方式.7 结合附图和^1^^本专利技术进一##细说明，鮮专利技术不限于这Hi施例。麯例i本^i^出了麵^kl离子^ifcm^imi搖雄，其工继驟如下1. 制^Htt:i^條,取7.娜2g十^6H甲^fc铵与100.0g甲苯MX到四口繊内， 基三甲M^铵与甲^JH:比为i: 15，用^l以woo转/^W^;将0.329g Pea卿与0,987g FeCh働港解于9,4397g 二次水中配制^St为 140g/L的;!K^, FeCla，与FeClj柳ltt比为1: 3,在2 3ttL/斑in ft气微 下将ii^K以4 M/h滴JnaJtJ^i糊中，800转/^^# 4 6小时；再 toAHjB^为2mL, +7^三甲 ^铵与 *^为25^K的蹄 比为l- 0,17，柳转/^IWta^2小时，左混糊中有四载4tHl5felft3W^ 成;以2 3A/h ^Wra入碰酸乙酯9.79mU "h^^甲^a化铵与B^乙酷 按质量比为h 1.25,卿转/^# 反应，用lSi:调节沐至8,以2 W7h滴加正翻乙iiWn完毕后i小时，停止掇气做咖转/^tti拌，aa常sr老化5天;ffiJ^W0XZ^限银十^^H甲^^條与ZJf的繊比为U.25， 以2000转/賴离心40 鎌战液，Mlt被164g乙醇中回流12小时，回 流乙酵用量按十六^三甲^Mfc铵与i酵的质量比为l: 22.5计；分离ffitS物， #*掉上験黄^^,黑felK淀用乙酵、水、丙,交替繊，^A真空T^内 60" 12~24小时，制备鹏性^m化硅麟。2. ,二氧化14',的环《1基化取鹏二辍化挂鹏o,lg、甲苯i05g加AH口繊，磁性:;mifctt徼球与甲苯的貭量比为h 1050，用,^W^W6QHz下超声处理10 ，,在2 3raL/Mn N汽W下，再加入3—^甘油ll^丙SH甲f^^42 g, 3—,甘油, 基丙基三甲ft^^与该混^W量比为l: 25,800转/##}^#, 1!01C回流12 小时，用夕OT^将沉淀物分离，依細二甲基甲職、丙酮、无水乙醇、水洗涤 3次，^AA空^f^if内60"锡！2 24小时，翻潘戯面键執* 4二 氣化娃微球。3. 磁性:i^爐微^^fc取L^e^(il2^66g、 ！^S^拳的lfa^水繊47.88&L"^4ftK 与^^H^60g/L的Ifa8OQb7ld^Uia:比为l: 18 ^fSliaA^口皿内，用wm以i咖转/^w^駒，aa^wtewifl^沐至8:再她表面键^fHHI^fcm化a^(X戰表面镳合环縫KHttt^fWWim球与^1^ 比为1: 150, 800转/:JH本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种表面螯合金属离子的磁性二氧化硅微球制备方法，其特征在于该制备方法步骤如下：（１）制备磁性二氧化硅微球 将十六烷基三甲基溴化铵与甲苯按质量比为１∶１２～２０加入到四口烧瓶内，用搅拌器以１０００转／分钟搅拌均匀，将ＦｅＣｌ↓［２］.４Ｈ↓［２］Ｏ与ＦｅＣｌ↓［３］.６Ｈ↓［２］Ｏ按质量比为１∶３溶解于二次水中，配制成浓度为１３０～１５０ｇ／Ｌ的水溶液，在２～３ｍＬ／ｍｉｎ Ｎ↓［２］气保护下将此溶液以４～５ｍＬ／ｈ滴加到上述混合物中，８００转／分钟持续搅拌４～６小时，再加入质量浓度为２５％氨水，十六烷基三甲基溴化铵与质量浓度为２５％氨水的质量比为１∶０．１～０．２，以８００转／分钟持续搅拌２小时，在混合物中，有四氧化三铁纳米颗粒形成；将十六烷基三甲基溴化铵与正硅酸乙酯按质量比为１∶１～１．５的正硅酸乙酯缓慢加入，以８００转／分钟搅拌反应，调节ｐＨ至８，以２～３ｍＬ／ｈ滴加正硅酸乙酯完毕后１小时，停止氮气保护，８００转／分钟搅拌，常温常压下老化５天，在产物中加入乙醇，十六烷基三甲基溴化铵与乙醇的质量比为１∶２～２．５，以２０００转／分钟离心４０分钟，去掉上层液，沉淀物在乙醇中回流１２小时，回流乙醇用量按十六烷基三甲基溴化铵与乙醇的质量比为１∶２０～２５计；冷却至室温，离心分离，去掉上层亮黄色溶液；黑色沉淀用乙醇、水、丙酮交替洗涤，放入真空干燥箱内６０℃干燥１２～２４小时，制备成磁性二氧化硅微球；（２）磁性二氧化硅微球的环氧基化 将磁性二氧化硅微球与甲苯按质量比为１∶１０００～１１００加入三口烧瓶，用超声清洗机频率为６０Ｈｚ的超声处理１０分钟，在２～３ｍＬ／ｍｉｎ Ｎ↓［２］气保护下，再加入与该混合溶液质量比为１∶２５的３－缩水甘油醚氧基丙基三甲氧基硅烷８００转／分钟搅拌，１１０℃回流１２小时，用外部磁铁将沉淀物分离，依次用二甲基甲酰胺、丙酮、无水乙醇、水洗涤３次，放入真空干燥箱内６０℃干燥１２～２４小时，制备成表面键合环氧基的磁性二氧化硅微球；（３）磁性二氧化硅微球羧基化 将Ｌ－天冬氨酸与体积浓度为６０ｇ／Ｌ的Ｎａ↓［２］ＣＯ↓［３］水溶液按质量比为１∶１５～２０混合溶解加入两口烧瓶内，用搅拌器以１０００转／分钟搅拌均匀，通过调节两者的相对量使溶液ｐＨ至８；再加入与该混合溶液质量比为１∶１００～２００的表面键合环氧基的磁性二氧化硅微球，８００转／分钟搅拌，并加热至８０℃反应２４小时；反应完毕，用外部磁铁将沉淀分离，...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：冯国栋，胡道道，崔亚丽，杨柳，杨磊，
申请(专利权)人：陕西师范大学，
类型：发明
国别省市：87[中国|西安]
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。