本发明专利技术提供了一种固相多肽合成Ｅｘｅｎａｔｉｄｅ的制备方法：以Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ树脂、ＲｉｎｋＡｍｉｄｅ ＡＭ树脂或Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ＭＢＨＡ树脂为起始原料，依次连接具有Ｆｍｏｃ保护基团的氨基酸，获得保护的三十九肽树脂，其间依次脱去Ｆｍｏｃ－保护基团，用缩合剂，进行接肽反应，得保护的三十九肽树脂后，同步进行脱侧链保护基团及切肽，获得Ｅｘｅｎａｔｉｄｅ粗品，并经Ｃ１８或Ｃ８柱进行分离纯化，再经冷冻干燥，获得产品（包括：醋酸盐、三氟醋酸盐等医学上可用的盐及游离碱）。本发明专利技术的方法，工艺稳定，原辅材料来源方便，生产周期短，生产成本低，三废少，收率高，质量稳定，生产成本低，收率高。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及Exenatide的制备方法，尤其涉及。
技术介绍
中文名艾赛那肽、醋酸艾赛那肽。商品名BYETTA 。英文名Exenatide Acetate。结构式His曙Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Lys-Gln-Met-Glu-Glu-Glu -Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp(Boc)-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pr o-Pro-Ser-NH2分子式为C184H282N5()O60S 分子量为4186.6糖尿病是一种世界性疾病，全世界糖尿病患者已超过1.5亿患者，其中II型糖尿病患 者占90%。在我国II型糖尿病患者将近4000万，随着生活水平的提高，发病率将越来越高， 且城市多于农村，由于患者须终生用药，因此治疗II型糖尿病的药物的市场每年在数百 亿人民币以上。Exenatide是一种治疗II型糖尿病的特效新药，在同类药物中具有极强 的竞争力。美国专利6528486报导了制备Exenatide的方法，系采用TentaGel S-RAM树脂为 起始原料，用DIC/HOBt或DCC/HOBt为縮合剂，反应时间长，TentaGel S-RAM树脂 来源稀缺，价格昂贵(是Rink Amide AM树脂的五倍)；因此该方法限制了 Exenatide 的大规模生产和使用。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种，以克服现有技术存 在的上述缺陷。本专利技术的方法包括如下步骤以Rink Amide树脂、Rink Amide AM树脂或Rink Amide MBHA树脂为起始原料， 按照固相合成的方法依次连接具有Fmoc保护基团的氨基酸，获得保护的三十九肽树脂， 其间依次脱去Fmoc-保护基团，用TBTU/HOBt、 HBTU/HOBt、 BOP/HOBt、 TBTU/HOAt、 HBTU/HOAt或BOP/HOAt中的任何一种为縮合剂，进行接肽反应，得保护的三十九肽树脂后，同步进行脱侧链保护基团及切肽，获得Exenatide粗品，并经C18 (或C8)柱 进行分离纯化，获得所说的Exenatide,然后可再经冷冻干燥，获得产品，包括醋酸盐、 三氟醋酸盐等医学上可用的盐及游离碱。按照本专利技术，优选的，依次连接具有Fmoc保护基团的氨基酸，获得保护的三十九 肽树脂，依次包括如下步骤(1) 将Rink Amide树脂、Rink Amide AM树脂或Rink Amide MBHA树脂用DMF 或DCM浸泡10-60分钟，使树脂溶胀，树脂的重量体积浓度为5~20ml/g;(2) 在上述的树脂中，加入脱帽试剂，进行脱帽反应，然后树脂用DMF洗涤， 抽干，加入用接肽试剂溶解的具有Fmoc保护基团的氨基酸、TBTU/HOBt、 HBTU/HOBt 或BOP/HOBt的混合物，10 60'C接肽反应0.5 5小时，抽干，分别用DMF、甲醇、DMF 洗漆，抽千，然后再加入脱帽试剂，脱帽反应，再加入用接肽试剂溶解的具有Fmoc保 护基团的氨基酸，如此重复，获得Fmoc-Gly-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Leu-Ser(tBu)-Lys(B oc)-Gln(Trt)-Met-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ala-Val-Arg(Pbf)-Leu-Phe-Ile-Glu(OtB u)-Trp(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Gly-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-S er(tBu)-树脂；所说的具有Fmoc保护基团的氨基酸，依次包括 (1) Fmoc-Ser(tBu)-OH、 (2) Fmoc-Pro-OH、 (3) Fmoc-Pro-OH、 (4) Fmoc-Pro-OH、 (5) Fmoc-Ala-OH、 (6) Fmoc-Gly-OH、 (7) Fmoc-Ser(tBu)-OH、 (8) Fmoc-Ser(tBu)-OH、 (9)Fmoc-Pro-OH、 (10)Fmoc-Gly-OH、 ( 11)Fmoc-Gly-OH、 ( 12)Fmoc-Asn(Trt)-OH、 (13) Fmoc-Lys(Boc)-OH、 (14) Fmoc-Leu-OH、 (15) Fmoc -Trp(Boc)-OH 、 (16) Fmoc-Glu(OtBu)-OH、 (17) Fmoc-Ile-OH、 (18) Fmoc-Phe-OH、 (19) Fmoc-Leu-OH、 (20 ) Fmoc-Arg(Pbf)-OH 、 ( 21 ) Fmoc-Val-OH 、 ( 22 ) Fmoc-Ala-OH 、 ( 23 ) Fmoc-Glu(CHBu)-OH、 (24) Fmoc-Glu(OtBu)-OH、 (25) Fmoc-Glu(OtBu) -OH、 (26) Fmoc-Met-OH 、 ( 27 ) Fmoc-Gln(Trt)-OH 、 ( 28 ) Fmoc-Lys(Boc)-OH 、 ( 29 ) Fmoc-Ser(tBu)-OH 、 ( 30 ) Fmoc-Leu-OH 、 ( 31 ) Fmoc-Asp(OtBu)-OH 、 ( 32 ) Fmoc-Ser(tBu)-OH 、 ( 33 ) Fmoc-Thr(tBu)-OH 、 ( 34 ) Fmoc-Phe-OH 、 ( 35 ) Fmoc-Thr(氾u)-OH、 (36) Fmoc-Gly-OH、 (37)Fmoc-Glu(OtBu)-OH、 (38) Fmoc-Gly-OH 禾口 (39) Fmoc-ffis(Trt)-OH。所说的接肽试剂为NMM: DMF=1: 5~15，体积比；所说的脱帽试剂为PIP: DMF=1: 2~5，体积比； Fmoc-Ser(tBu)-OH的摩尔数为树脂的2~5倍； 脱帽试剂的体积与树脂的重量比例为5~20ml/g; 接肽试剂的体积与树脂的重量比例为5~15ml/g; TBTU、. HBTU或BOP的摩尔数为树脂的2~5倍； HOBt的摩尔数为树脂的2~5倍； 脱帽反应温度为10-60°C，时间为5~60分钟；同步进行脱侧链保护基团及切肽，获得Exenatide粗品包括如下步骤将预冷至-l(TC l(TC的切肽试剂，加入步骤(2)的树脂中，1(TC 5(TC切肽反应1~5 小时，减压蒸除溶剂，加入乙醚沉淀，收集沉淀物，用乙醚洗涤，在室温，置干燥器中， P205存在下减压干燥10~14小时，获得Exenatide粗品；所说的切肽试剂为TFA/EDT/H20/TIS =90-95/2-5/2-5/1-5，体积比；切肽试剂与树脂的体积重量比为5~50ml/g;优选的，Exenatide粗品经C18或C8柱进行分离纯化包括如下歩骤将上述的 Exenatide粗品溶于乙酸水溶液中，过滤，滤液经C18或C8柱纯化，流动相为0.01 一0.5M醋酸盐、磷酸盐或三氟乙酸盐乙腈=10本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种固相多肽合成Ｅｘｅｎａｔｉｄｅ的制备方法，其特征在于，包括如下步骤： 以Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ树脂、Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ＡＭ树脂或Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ＭＢＨＡ树脂为起始原料，按照固相合成的方法依次连接具有Ｆｍｏｃ保护基团的氨基酸，获得保护的三十九肽树脂，其间依次脱去Ｆｍｏｃ－保护基团，用ＴＢＴＵ／ＨＯＢｔ、ＨＢＴＵ／ＨＯＢｔ、ＢＯＰ／ＨＯＢｔ、ＴＢＴＵ／ＨＯＡｔ、ＨＢＴＵ／ＨＯＡｔ或ＢＯＰ／ＨＯＡｔ中的任何一种为缩合剂，进行接肽反应，得保护的三十九肽树脂后，同步进行脱侧链保护基团及切肽，获得Ｅｘｅｎａｔｉｄｅ粗品，并经Ｃ１８（或Ｃ８）柱进行分离纯化，获得所说的Ｅｘｅｎａｔｉｄｅ，然后可再经冷冻干燥，获得产品，包括：醋酸盐、三氟醋酸盐等医学上可用的盐及游离碱。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：周逸明，崔颀，
申请(专利权)人：周逸明，崔颀，上海苏豪逸明制药有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]
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