本发明专利技术公开了一种高纯度猪血清白蛋白的生产提取工艺，它由以下步骤组成：在猪血中加入枸橼酸钠、氯化钠，分离血浆与红细胞，血浆经离心，膜过滤提取后，放入夹层反应罐内，加热加入醇、辛酸钠、氯化钠，缓慢搅拌，分两次加入盐酸调ｐＨ值，离心，上清液加沉淀试剂磨成糊状，搅拌，冷藏过夜后离心分离沉淀，沉淀加水溶解，以氢氧化钠溶液调ｐＨ后静置，离心分离上清液，膜过滤和病毒灭活，冻干为成品。本工艺用料少，工艺流程短，生产效率高，操作容易，生产成本低，产品质量好，适合大批量生产。本产品可用作纤维蛋白胶封闭剂制备的辅料，生化原料，也可用作其它白蛋白的替代品。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种从猪血清中提取高纯度白蛋白的工艺方法及猪血白蛋白用途;具体是 一种猪血清白蛋白醇提复合沉淀精制工艺,获取的高纯度白蛋白用作纤维蛋白胶封闭剂制 备的辅料，也可用作生化原料或其它白蛋白的替代品，属生物
技术介绍
血清白蛋白是一种蛋白质，在血液循环、解毒、脂类代谢等方面执行着多种重要的 生物功能。在生物化学与免疫学研究中广泛用作生物大分子(酶、抗原)的稳定剂、模型抗 原以及半抗原的载体。由于白蛋白是一种蛋白质，易受温度、有机溶剂和PH等影响而变 性，其分离纯化要严格控制条件，难度大。最早，普遍应用^l酸铵重结晶法从血清中分离 白蛋白，但此法的选择性极差。人血清白蛋白(HSA)是人血中最丰富的蛋白质，其作用为维持渗透压，结合并运输营 养物和代谢物；HSA有很大的药用价值，可作为药物治疗因白蛋白损失、合成和失血造成 的白蛋白含量下降引起的低蛋白血症。获得白蛋白的方法多是从人血液中纯化，如中国专 利CN1055095C、 CN1313493C等公开了从人血液中分离纯化人血白蛋白的方法；然而这些 方法存在一些问题，例如血源的缺乏，不经济，以及受乙肝病毒、AIDS病毒等物质的 污染的可能。为避免这些问题，另一基于重组DNA技术方法生产重组人血清白蛋白(rHSA) 的多种方法最近已经得到了开发。如中国专利CN1496993A公开了一种适合于规模操作的 重组人白蛋白的纯化方法，其方法通过以下步骤达到含rHSA的发酵液上清液经(a) 具双重功能的耐高盐材料为基质的阳离子交换层析；(b)疏水层析(HIC); (c)阴离子交换 层析；中国专利CN10'1260145A公开了用无机盐培养基获得的含目标蛋白的基因工程酵母 菌发酵上清液和使用无血清培养基获得的重组脊椎动物细胞培养液用一种耐高盐、高载量 离子交换型亲和柱层析介质填料来分离纯化。然而，这些重组人白蛋白的纯化方法专利仍 然存在一些相似的问题纯化过程太复杂，周期长，成本高。为了获得生产周期短，成本低，适合于大规模生产的白蛋白或HAS (白蛋白)的替代品，从动物血'中纯化生产白蛋白 '的工艺方法越来越受重视，中国专利CN100387620C公开了一种牛血清白蛋白热乙醇法提 取工艺，该方法用料少、工艺流程短、收率高、产品质量较好。但是，该方法提取工艺中 只包含了从牛血清中除去球蛋白的工艺，没有包含将白蛋白与血清单独分离的工艺步聚, 产品中有包含其它成分的可能。
技术实现思路
为解决上述问题，本专利技术的目的之一是提供一种适合于大规模生产的猪血清白蛋白的 分离纯化工艺方法，以获得高纯度猪血白蛋白产品。它不仅工艺相对简单，而且用料少， 收率高，产品纯度高；可较大幅度的降低成本。本专利技术另一个目的是将制备的猪血白蛋白产品作为生物辅料应用于纤维蛋白胶封闭 剂产品生产，提高纤维蛋白胶封闭剂的质量和应用效果；还可用作生化原料，也可用作其 它白蛋白的替代品。本专利技术的目的是这样实现的 一种高纯度猪血清白蛋白的生产工艺，其特征在于包括以下步骤A、取新鲜猪血加入血量的0.38%的枸橼酸钠、0.09%氯化钠，将血液于0-l(TC冷库 中静置，待血浆与红细胞分层后，用虹吸法吸取血浆，下层血球另用；B、 取上述分离血浆，置于具有制冷装置的离心系统中，设定冷冻系统的温度为2'C -8。C，开启离心机离心，收集血浆，血浆再用0.22um的滤器过滤，得精制血浆；C、 将精制血浆放入夹层反应罐内，夹层罐加热至65。C 80。C;取猪血浆容积的 0.28-0. 38%的辛酸钠、0.9%氯化钠，加入到与血浆等体积量的纯化水中溶解，溶解后溶液 加入到血浆中，再加入醇溶液，使醇的体积浓度达到5.0%-10.0%，搅拌均匀，加入盐酸 调pH值并保温后，将溶液加入到搅拌罐中，降温，再次用盐酸调pH值，密封放置；D、取上述溶液，置离心系统中离心，收集上清液，加入沉淀试剂，使其浓度为 20%-25%，用胶体磨边加上清液边加沉淀试剂打磨成糊状，搅拌后于2 8'C冷库保存过夜；E、 取上述混合溶液，置高速冷冻离心系统中，设定冷冻系统的温度为2'C-1(TC，离 心分取沉淀，-2(TC冷库中保存备用；F、 跟据血浆量称取注射用水，加入到上述沉淀中，搅拌至完全溶解，用氢氧化钠溶 液调节pH值，室温放置；置高速冷冻离心系统中，设定冷冻系统的温度为8"C-1(TC，离 心收集上清液；上清液用洁净的0.22um的微孔滤膜过滤，滤液备用；G、 病毒灭活通过水浴对上述滤液进行病毒灭活，然后用0.22ixm的滤膜过滤，取 样检测蛋白质含量；.H、 冻干，将病毒灭活滤液按冻干曲线冻干，得到成品。 本专利技术具有如下优点I、 本专利技术是一种高纯度猪血白蛋白的生产，制备工艺简单，生产易实现规模化、自动 化控制；2. 本专利技术利用猪血作为原料进行猪血清白蛋白提纯。由于猪的基因序列同人的基因序 列极为相似，而携带人类的传染性疾病传播风险极小，避免了人类血源性疾病的传播机会；3. 本专利技术在制备工艺中包括了病毒灭活等工艺方法，使产品具有更高的可靠性与安全性；4.本专利技术与传统工艺相比其用料少、工艺流程短，工艺流程操作容易、产品收率高、 成本低、产品质量好；其质量检测结果见表l;5.本专利技术生产安全环保。制备工艺的操作过程中对人员和周围环境不产生危害，符合 国家的环保要求。表1本专利技术的猪血白蛋白的质检结果与行业质量标准比较<table>table see original document page 6</column></row><table>本专利技术的成品白蛋白经检验，质量完全符合行业质量标准。具体实施例方式猪血白蛋白是猪血清中主要的蛋白质，其含量约占血清中蛋白质总量的一半左右，猪血在我国资源极其丰富，猪血清白蛋白与人血清白蛋白非常相似，分子量67000，等电点为4.7,其性质比较稳定。本专利技术利用猪血白蛋白性质较稳定，血中含量高等特点，以猪血作为原料，以独特的提取分离工艺制备一种高纯度猪血白蛋白，并适合于大规模化生产， 生产产品具有较高的可靠性与安全性。本专利技术的高纯度猪血清白蛋白的生产工艺，包括以下步骤A、 分离血浆取新鲜猪血加入血量的0.38%的枸橼酸钠(抗凝剂)、0.09%氯化钠， 将血液于0-l(TC冷库中静置，待血浆与红细胞分层后，用虹吸法吸取血浆，下层血球另 用； .B、 精制血浆取上述分离血浆，置具制冷装置的离心系统中，设定冷冻系统的温度 为2°C-8°C，开启离心机离心，转速为3000转/分钟一5000转/分钟，离心30min-60min， 收集血浆。血桨再用0. 22 u m的滤器过滤，得精制血浆；C、 分除球蛋白等将精制血浆放入夹层反应罐内，夹层罐加热至65。C 80。C;取猪血浆容积的0.28-0. 38%的辛酸钠(白蛋白的保护剂)、0.9%氯化钠，加入到与血浆等体积 量的纯化水中溶解，溶解后溶液加入到血浆中，再加入醇溶液(醇溶液可为乙醇或甲醇)， 使醇溶液的浓度达到5.(W-10.0y。(V/V),搅拌均匀，加入盐酸调pH值至5.5 6.5，保温 20min -60min。将溶液加入到搅拌罐中，降温，使溶液降温到室温，测pH值。用盐酸调 PH值至3.8 4.5，密封，在室本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种高纯度猪血清白蛋白的生产工艺，其特征在于包括以下步骤： Ａ、取新鲜猪血加入血量的０．３８％的枸橼酸钠、０．０９％氯化钠，将血液于０－１０℃冷库中静置，待血浆与红细胞分层后，用虹吸法吸取血浆，下层血球另用； Ｂ、取上述分离血浆，置于具有制冷装置的离心系统中，设定冷冻系统的温度为２℃－８℃，开启离心机离心，收集血浆，血浆再用０．２２μｍ的滤器过滤，得精制血浆； Ｃ、将精制血浆放入夹层反应罐内，夹层罐加热至６５℃～８０℃；取猪血浆容积的０．２８－０．３８％的辛酸钠、０．９％氯化钠，加入到与血浆等体积量的纯化水中溶解，溶解后溶液加入到血浆中，再加入醇溶液，使醇的体积浓度达到５．０％－１０．０％，搅拌均匀，加入盐酸调ｐＨ值并保温后，将溶液加入到搅拌罐中，降温，再次用盐酸调ｐＨ值，密封放置； Ｄ、取上述溶液，置离心系统中离心，收集上清液，加入沉淀试剂，使其浓度为２０％－２５％，用胶体磨边加上清液边加沉淀试剂打磨成糊状，搅拌后于２～８℃冷库保存过夜； Ｅ、取上述混合溶液，置高速冷冻离心系统中，设定冷冻系统的温度为２℃－１０℃，离心分取沉淀，－２０℃冷库中保存备用； Ｆ、跟据血浆量称取注射用水，加入到上述沉淀中，搅拌至完全溶解，用氢氧化钠溶液调节ｐＨ值，室温放置；置高速冷冻离心系统中，设定冷冻系统的温度为８℃－１０℃，离心收集上清液；上清液用洁净的０．２２μｍ的微孔滤膜过滤，滤液备用； Ｇ、病毒灭活：通过水浴对上述滤液进行病毒灭活，然后用０．２２μｍ的滤膜过滤，取样检测蛋白质含量； Ｈ、冻干，将病毒灭活滤液按冻干曲线冻干，得到成品。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：黄星，李吉来，江彩霞，肖尚志，潘小宁，
申请(专利权)人：广州倍绣生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：81[中国|广州]
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。